熒光原位雜交更新課件

熒光原位雜交技術(shù)簡(jiǎn)介原位雜交技術(shù)（insituhybridization，ISH）Gall和Pardue1969年建立。用標(biāo)記的DNA或RNA作為探針，對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的核酸或有絲分裂中期的染色體進(jìn)行原位檢測(cè)和觀察。最初的探針大多以同位素3H、32P等標(biāo)記，但因同位素標(biāo)記探針對(duì)人體有放射損害、實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)、放射自顯影的分辨率有限、環(huán)境污染等缺點(diǎn)，給研究及實(shí)際應(yīng)用帶來了諸多不便。熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH）利用熒光物質(zhì)標(biāo)記探針（直接或間接），再進(jìn)行雜交，可通過熒光顯微鏡對(duì)靶序列進(jìn)行定性、定位和定量分析FISH技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)證實(shí)或發(fā)現(xiàn)了用經(jīng)典細(xì)胞遺傳學(xué)方法無法證實(shí)或發(fā)現(xiàn)的腫瘤染色體改變，成為銜接細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)之間的一座橋梁。開創(chuàng)了一個(gè)新的學(xué)科——分子細(xì)胞遺傳學(xué)。熒光標(biāo)記的DNA探針（200-500bp）FISH熒光原位雜交特點(diǎn)與其它原位雜交技術(shù)相比，F(xiàn)ISH的優(yōu)點(diǎn)：①經(jīng)濟(jì)安全，快速方便；②敏感性高，特異性強(qiáng)，背景低；③宜于多靶雜交，對(duì)同一標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行多個(gè)探針雜交，不同的探針可以顯示不同的熒光顏色；④使用G帶玻片可作出回顧性分析；缺點(diǎn)：不能達(dá)到100%雜交，特別是在應(yīng)用較短的cDNA探針時(shí)效率明顯下降?；蛱禺愄结槹邢蛎織l染色體只有一個(gè)拷貝的DNA序列。主要用于間期或中期染色體中識(shí)別染色體易位、倒位、重復(fù)和缺失、鄰近基因綜合征、標(biāo)記染色體和染色體擴(kuò)增等，可檢測(cè)基因的擴(kuò)增和重排。常用探針類型—基因特異探針21三體FISH常用探針類型—WCP探針全基因組繪畫（WCP）探針是一種復(fù)合DNA探針。除著絲粒和端粒區(qū)外，全基因組繪畫探針對(duì)全長(zhǎng)染色體有高度親和力。這些探針最適用于識(shí)別中期染色體的基因組不平衡，尤其是在許多癌癥中觀察到的復(fù)雜染色體重排。M-FISH用特殊選擇的窄帶濾色片連續(xù)捕獲5種熒光色素中的每一種熒光色素圖像；SKY用于熒光色素組合分析的成像設(shè)備不同：冷電荷耦合器(CCD)照相機(jī)和Fourier變換光譜法相結(jié)合，同步曝光成像。這些技術(shù)目前在國內(nèi)一些重點(diǎn)細(xì)胞遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)室中開展。WCP探針（SKY）

技術(shù)結(jié)合—FQ-PCR

來自于分子生物學(xué)技術(shù)-定量熒光聚合酶鏈反應(yīng)

和FISH的結(jié)合；對(duì)染色體13、18、21、X和Y采用熒光引物對(duì)染色體特異性高度多態(tài)性DNA短重復(fù)序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，快速診斷非整倍體；特定的基因引物可以檢測(cè)基因的缺失與擴(kuò)增檢測(cè)“有”或“無”和數(shù)目異常；位置異常無法判斷，如平衡性染色體重排。技術(shù)13,18,21三體微缺失解釋容易成本平臺(tái)費(fèi)用產(chǎn)前BoBs++++++++核型分析++---++FISH++--+QF-PCR++--+++--

幾種技術(shù)平臺(tái)比較細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)的比較結(jié)合技術(shù)相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目染色體病快速產(chǎn)前診斷（FISH、qPCR、BoBs）產(chǎn)前單基因病診斷SNPArray檢測(cè)某些代謝病的產(chǎn)前診斷項(xiàng)目意義1.快速且準(zhǔn)確進(jìn)行檢測(cè)

較羊水染色體分析，F(xiàn)ISH技術(shù)可以確定13、18、21、X、Y的染色體數(shù)目信息，緩解唐篩陽性患者或高齡孕婦精神負(fù)擔(dān)；緩解醫(yī)生核型分析工作壓力，能夠有針對(duì)性的對(duì)樣本進(jìn)行處理。2.彌補(bǔ)核型檢測(cè)失敗無報(bào)告的問題FISH對(duì)于樣本要求比較低，對(duì)于羊水量少、羊水活細(xì)胞數(shù)目少、孕周偏大、細(xì)胞培養(yǎng)失敗、核型結(jié)果難以判讀等各種原因?qū)е碌暮诵头治鍪【舍槍?duì)性的給予彌補(bǔ)，解決占染色體數(shù)目異常的80-90%問題。3.FISH與羊水染色體核型分析構(gòu)成較為完整的染色體異常診斷平臺(tái)，提高了產(chǎn)科胎兒