分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用 一代測序技術(shù) 分子生物學(xué)_第1頁
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一代測序技術(shù)主講人:XXX發(fā)展歷程第二代測序使用最為廣泛。以Roche公司的454技術(shù)，Illumina公司的Solexa，HiSeq技術(shù)為代表一代測序技術(shù)01基本介紹02一代測序技術(shù)的方法基本介紹01基本介紹——第一代測序的發(fā)明人在1997年發(fā)明了利用DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止測定DNA核苷酸序列的方法。FredSanger及其同事基本介紹——第一代測序的發(fā)明人第一代測序技術(shù)概念：傳統(tǒng)的鏈終止法，化學(xué)降解法，以及在它們的基礎(chǔ)上的各種DNA測序技術(shù)。一代測序技術(shù)的方法02一代測序技術(shù)的方法０１對DNA片段5’或3’末端進行放射性標記。０２采用特異性化學(xué)試劑修飾和裂解特定的堿基位點。Maxam-Gilbert

化學(xué)降解測序法實驗步驟將標記完的樣品，分成四份取待測DNA片段２．G+A反應(yīng)"甲酸"１．G反應(yīng)，"硫酸二甲酯"４．C反應(yīng)在NaCl存在時，只有C與肼反應(yīng)，得到一系列C末端的片段３．T+C反應(yīng)"肼"一代測序技術(shù)的方法形成大小不一的DNA鏈電泳分離DNA鏈根據(jù)同位素標記自顯影后讀出序列Maxam-Gilbert化學(xué)降解測序法的弊端化學(xué)降解測序法自建立以來沒有很大的改進，目前僅在分析DNA和蛋白質(zhì)相互作用中的DNA一級結(jié)構(gòu)時等中才使用。受制于當時聚丙烯酰胺凝膠電泳的分辨能力dNTP和ddNTP分子結(jié)構(gòu)式Sanger雙脫氧鏈終止法利用DNA聚合酶特性，使ddNTP參入到寡核苷酸鏈的3’末端。基本原理：雙脫氧鏈終止法主要用于DNA基因分析一代測序技術(shù)的方法Sanger雙脫氧鏈終止測序法原理原理：是以待測單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，在寡核苷酸引物的引導(dǎo)下依據(jù)堿基互補配對原則。在此對引物進行了事先標記，可以實現(xiàn)4個測序反應(yīng)在同一反應(yīng)管中進行。可以利用自顯影技術(shù)。測序程序2.在4只試管中加入適當?shù)囊?、模板?種dNTP。分別加入一種一定濃度的ddNTP。3.與單鏈模板結(jié)合的引物，在DNA聚合酶作用下從5’端向3’端進行延伸反應(yīng)，32P隨著引物延長摻入到新合成鏈中。1.分離待測核酸模板。放射自顯影用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳同時分離4只反應(yīng)管中的反應(yīng)產(chǎn)物自動化測序技術(shù)DNA重組技術(shù)1986年美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司推出首臺商

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