第八章基因治療下

第八章基因治療（下）一、基因治療的策略和途徑二、基因治療的基本程序三、基因治療的載體四、基因治療的靶向性問(wèn)題五、基因治療的歷史、現(xiàn)狀和展望第一頁(yè)，共53頁(yè)。五、基因治療的歷史、現(xiàn)狀和展望第二頁(yè)，共53頁(yè)。60年代Lederberg設(shè)想基因治療遺傳病。1980年，美國(guó)Cline主持了β－地中海貧血的基因治療,引發(fā)社會(huì)風(fēng)波。1980-1989年,

美國(guó)

Anderson為首的科學(xué)家爭(zhēng)取社會(huì)和政府的支持理解，F(xiàn)DA和RAC制定了基因治療審批管理方案。1989年,

美國(guó)Rosenberg經(jīng)FDA批準(zhǔn)主持腫瘤患者標(biāo)志基因轉(zhuǎn)移臨床試驗(yàn)。1990年,美國(guó)Culver/Blease主持世界首例ADA缺乏癥基因治療臨床試驗(yàn)。（一）基因治療的歷史回顧第三頁(yè)，共53頁(yè)。基因治療從1989年進(jìn)入臨床試驗(yàn)以來(lái),從相對(duì)禁錮到迅速發(fā)展,過(guò)熱泛濫,反思降溫,平穩(wěn)發(fā)展,猛烈抨擊,捷報(bào)頻傳等階段,幾經(jīng)波折,充分體現(xiàn)了新生事物發(fā)展規(guī)律。但是,無(wú)論基因治療發(fā)展坎坷如何,科學(xué)家堅(jiān)信,基因治療是一場(chǎng)醫(yī)學(xué)革命,在21世紀(jì)將真正走向臨床,為人類造福。（二）基因治療的現(xiàn)狀第四頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委熍R床試驗(yàn)方案國(guó)家/洲臨床方案治療患者非洲115

美國(guó)3102389

亞洲937

澳大利亞313

歐洲97727

國(guó)際合作6314

總計(jì)4253476（二）基因治療的現(xiàn)狀第五頁(yè)，共53頁(yè)。

疾病名稱臨床方案%治療患者%

癌癥

27965245970

傳染病

337.841212

單基因病

55133069.0

基因標(biāo)記

409.42276.5

志愿者

20.560.2

其它

163.8661.9

總計(jì)

4253476（二）基因治療的現(xiàn)狀第六頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委熭d體臨床方案患者數(shù)量反轉(zhuǎn)錄病毒1601222

反轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞21420

腺病毒86534

腺相關(guān)病毒436

單純皰疹病毒10Lipofection69+2+1757+3

裸DNA1671

電穿孔220

Poxvirus25130RNA130（二）基因治療的現(xiàn)狀第七頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委焼位虿?/p>

AATdeficiency;ADA-SCID

Canavandisease;Chronicgranulomatousdisease;CysticfibrosisFamilialhypercholesterolemia;Fanconi'sanemia;Gaucher'sdisease;HemophiliaBHunter'ssyndrome(typeII);Hurlersyndrome(typeI);LeukocyteAdherenceDeficiency;OTCdeficiencyPNP-deficiency,

X-linkedSCID（二）基因治療的現(xiàn)狀第八頁(yè)，共53頁(yè)。遺傳病基因治療的兩重性1.必要性:沒(méi)有其他辦法根治2.安全性:基因整合的遺傳毒性;

重復(fù)治療的復(fù)雜性伴隨終生的考驗(yàn);

發(fā)展緩慢!!呼吁:

科學(xué)價(jià)值>商業(yè)價(jià)值社會(huì)價(jià)值>商業(yè)價(jià)值寬松的環(huán)境（二）基因治療的現(xiàn)狀第九頁(yè)，共53頁(yè)。腫瘤基因治療Gynecologicaltumors:breast,ovary,cervixNervoussystemtumors:glioblastoma,leptomen-ingealcarcinomatosis,glioma,astrocytoma,neuroblastomaGenito-urinarytumors:prostate,renalcarcinomaSkintumors:melanoma,Gastrointestinaltumors:colon,colorectal,livermetastases,post-hepatitislivercancer,pancreaticcancer

（二）基因治療的現(xiàn)狀第十頁(yè)，共53頁(yè)。HeadandnecktumorsLungtumors(adenocarcinoma,smallcellcancer,non-smallcellcancer)MesotheliomaHematologicalmalignancies(leukemias,lymphomas,GVHDriskafterABMTinleukemia,multiplemyeloma)Sarcomas

Germcellcancers（二）基因治療的現(xiàn)狀腫瘤基因治療第十一頁(yè)，共53頁(yè)。1.免疫效應(yīng)細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞)免疫增強(qiáng)2.腫瘤細(xì)胞抗原性增強(qiáng)3.抗原提呈-免疫識(shí)別系統(tǒng)增強(qiáng)4.腫瘤自殺基因5.抑癌基因6.耐藥基因7.反義基因8.血管生長(zhǎng)抑制（二）基因治療的現(xiàn)狀腫瘤基因治療的策略第十二頁(yè)，共53頁(yè)。腫瘤基因治療的幾種策略第十三頁(yè)，共53頁(yè)。1.手術(shù)為主,早期診斷更為重要2.生物輔助治療的一種,貴族治療3.惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是重點(diǎn)4.腫瘤的復(fù)雜性---基因治療的個(gè)性化5.潛在商業(yè)價(jià)值巨大6.風(fēng)險(xiǎn)性:死馬當(dāng)作活馬醫(yī)7.療效評(píng)價(jià)的科學(xué)性:綜合治療;復(fù)雜腫瘤背景;易打擦邊球（二）基因治療的現(xiàn)狀腫瘤基因治療的評(píng)價(jià)第十四頁(yè)，共53頁(yè)。Infectiousdiseases:HIVinfectionOtherdiseases:Amyotrophiclateralsclerosis(ALS)CoronaryarterydiseaseCubitaltunnelsyndromePeripheralarterydiseaseRestenosisRheumatoidarthritis（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療其他疾病第十五頁(yè)，共53頁(yè)。AIDS致病機(jī)制:

（1）病毒要向淋巴組織及外周血細(xì)胞播散；（2）病毒吸附于細(xì)胞受體，融合和遺傳物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞；（3）病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制；（4）CD4細(xì)胞功能和數(shù)目降低，CD8細(xì)胞功能喪失；（5）感染性病毒的釋放和病毒感染的細(xì)胞數(shù)增加；

(6）病毒復(fù)制的增強(qiáng)導(dǎo)致致病變株的出現(xiàn)；

(7）CD4細(xì)胞數(shù)和功能的進(jìn)一步降低；

(8）艾滋病形成。艾滋病是由HIV引起的一個(gè)后天獲得性遺傳疾病，HIV攜帶者并不表現(xiàn)出艾滋病的癥狀，阻斷攜帶向艾滋病發(fā)展是基因治療的優(yōu)勢(shì)。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療艾滋病第十六頁(yè)，共53頁(yè)。免疫療法:HIV-env激活CTL干擾素:IFN-a抑制HIV復(fù)制胞內(nèi)免疫:突變的病毒基因,如VP16,P24,Rev細(xì)胞受體:CCR5作為靶位抗HIV感染治療病毒抗體:中和病毒及包裝,如HIV結(jié)構(gòu)蛋白的基因工程單鏈抗體反義策略:潛力很大,包括反義RNA,反義DNA,核酶,反義誘導(dǎo)等聯(lián)合治療:HIV多變,雞尾酒治療奏效（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療艾滋病第十七頁(yè)，共53頁(yè)。基因治療的臨床試驗(yàn)以外,更多的是各種基因治療基礎(chǔ)研究?；蛑委熍R床取得成功的源頭在基礎(chǔ)研究。1.基因治療載體研究:理化方法;病毒載體,新型載體,雜合載體;載體的靶向性;載體的調(diào)控表達(dá)。2.基因治療范圍拓寬:功能基因組研究為基因治療病種的擴(kuò)大提供了基礎(chǔ);為人類改造自我提供了更多的幻想空間。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療的基礎(chǔ)研究第十八頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委煂?lái)可能治療運(yùn)動(dòng)員嚴(yán)重受傷的肌肉，骨折的大腿或膝蓋。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，基因治療已成功的愈合了骨折的骨骼，而且使受傷的肌肉長(zhǎng)得更加強(qiáng)壯?？梢杂脕?lái)治療目前技術(shù)無(wú)法治愈的嚴(yán)重受傷的關(guān)節(jié)和骨骼,韌帶和肌腱,也有可能治療如關(guān)節(jié)炎等關(guān)節(jié)疾病。這項(xiàng)研究人體實(shí)驗(yàn)已經(jīng)處于早期階段。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療身體創(chuàng)傷第十九頁(yè)，共53頁(yè)。臺(tái)灣中研院李英惠利用Ｃ／ＥＢＰ基因治療來(lái)防止肥胖?？衫没蛉〈呗?，把體內(nèi)一個(gè)控制脂肪細(xì)胞發(fā)育因子取代成另一功能相似相互有別的因子,脂肪轉(zhuǎn)變成高代謝活性的能量消耗,不影響人脂肪功能及正常代謝機(jī)能。這項(xiàng)基因治療已在老鼠身上獲得良好的效果，經(jīng)過(guò)基因治療者雖然美食保持苗條體型。該研究可望讓人們吃得多、吃得好，不運(yùn)動(dòng)也不會(huì)增胖。其它治療肥胖的策略:PCG-1,瘦素基因等。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療肥胖第二十頁(yè)，共53頁(yè)。

臨床上口腔白色念株菌（簡(jiǎn)稱“白念”）感染日趨常見(jiàn)。且由于耐藥性，治療很困難。由涎腺合成并分泌至人唾液中一種富組多肽具有明顯抗真菌功能，且對(duì)耐藥株有效?！鞍啄睢被颊叩脑摱嚯臐舛鹊拖碌摹dcMVH3體外實(shí)驗(yàn)殺死病菌顯著有效.大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)頜下腺富組蛋白基因轉(zhuǎn)移，其合成蛋白多分泌至唾液，從而可用來(lái)治療相關(guān)的口腔疾病。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療口腔感染第二十一頁(yè)，共53頁(yè)。Kagami證實(shí)用涎腺基因治療其合成蛋白可投遞到全身。將AdGH經(jīng)尾靜脈注入侏儒小鼠，血中生長(zhǎng)激素升高，恢復(fù)到正常范圍，侏儒小鼠生長(zhǎng)發(fā)育明顯改善，接近正常小鼠，對(duì)照組侏儒小鼠體重僅為治療組的十分之一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已見(jiàn)很好的苗頭。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療侏儒癥第二十二頁(yè)，共53頁(yè)。美國(guó)賓夕法尼亞州大學(xué)成功發(fā)明新的基因治療法，能夠防止老鼠的肌肉老化,使肌肉不致因年紀(jì)而失去力量和萎縮。人類到了五十歲以後，肌肉的功能會(huì)每十年退化10%,IGF-I蛋白質(zhì)刺激肌肉生長(zhǎng)，補(bǔ)充已損壞的肌肉細(xì)胞；利用基因治療，使肌肉繼續(xù)制造IGF-I蛋白質(zhì),實(shí)驗(yàn)證實(shí)，老鼠經(jīng)過(guò)基因治療後，肌肉的功能增加百分之27%。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療肌肉老化第二十三頁(yè)，共53頁(yè)。用于美容:SOD,EGF,VEGF可望消除疤痕,延緩皮膚衰老；用于減肥:瘦素基因,能量代謝基因；治療禿頂、促進(jìn)毛囊增生:毛囊移植減少排異;“染”發(fā):酪氨酸酶將白發(fā)變黑；延緩女性衰老,增加卵泡數(shù)、治療不孕:通過(guò)激素調(diào)節(jié)基因可望實(shí)現(xiàn)；（二）基因治療的現(xiàn)狀研究中的基因治療第二十四頁(yè)，共53頁(yè)。ADA缺乏癥基因治療:ADA缺乏導(dǎo)致嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺乏癥,沒(méi)有免疫能力。1990年9月,一位四歲的ADA缺乏癥女孩接受了首例基因治療,患者注入10億個(gè)遺傳修飾的T淋巴細(xì)胞,約每月1次,連續(xù)1年,ADA水平從1%上升到20%,淋巴細(xì)胞數(shù)量正常,免疫功能正常,1991年另一位9歲患者基因治療也取得成功,他們從隔離病房走向了美好生活。美國(guó),意大利,荷蘭和日本等國(guó)先后開(kāi)展了該病臨床試驗(yàn)。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第二十五頁(yè)，共53頁(yè)。血友病B基因治療:血友病是一種由于人凝血因子缺陷導(dǎo)致的遺傳性出血疾病.1991年,復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)研究所采用反轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的自體皮膚成纖維細(xì)胞對(duì)2例血友病B患者進(jìn)行了世界首次血友病基因治療臨床試驗(yàn),患者體內(nèi)凝血因子濃度和活性上升,出血癥狀減輕,取得了安全有限的結(jié)果.1999年美國(guó)UP和Avigen公司合作采用AAV途徑進(jìn)行了血友病B基因治療,患者治療后出血癥狀顯著改善。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第二十六頁(yè)，共53頁(yè)。AdP53基因治療腫瘤:P53基因突變與腫瘤發(fā)生發(fā)展高度相關(guān),將正常P53基因?qū)肽[瘤細(xì)胞,可以誘發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡,而對(duì)正常細(xì)胞無(wú)害。Clayman等采用AdP53治療頭頸部腫瘤取得良好效果,NemunaitisJ主持的AdP53治療肺癌效果顯著。AdP53基因治療在美國(guó)已經(jīng)進(jìn)入臨床III期試驗(yàn),可望成為第一個(gè)基因治療新藥。我國(guó)也批準(zhǔn)了該項(xiàng)基因治療臨床試驗(yàn)。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第二十七頁(yè)，共53頁(yè)。HSV-TK自殺基因治療:利用腫瘤細(xì)胞對(duì)HSV-TK基因/GCV的敏感性而自殺。這方面的基因治療腦腫瘤開(kāi)展較早,先后多種策略進(jìn)入臨床試驗(yàn),取得了一定的療效,并進(jìn)入了臨床III期試驗(yàn)。但是,由于RV的轉(zhuǎn)移效率,GCV毒副作用等原因,推廣有一定的困難。我國(guó)首例腫瘤基因治療也采用此方法。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第二十八頁(yè)，共53頁(yè)。心血管基因治療:VEGF165對(duì)于血管的生成具有重要作用,而一些心腦血管疾病由于血管堵塞,狹窄導(dǎo)致,可以采用該策略進(jìn)行血管再生,旁路再通,使病人免受開(kāi)刀搭橋之苦。美國(guó)已經(jīng)有多項(xiàng)方案進(jìn)入臨床試驗(yàn),臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示:新血管生長(zhǎng)、心肌血流灌注和室壁功能改善，大多數(shù)病人的心絞痛減輕。該項(xiàng)研究具有立竿見(jiàn)影的驚人效果,商業(yè)價(jià)值巨大,被稱為21世紀(jì)初最激動(dòng)人心和快速發(fā)展的進(jìn)展之一。但是也必須考慮到VEGF與腫瘤的關(guān)系。我國(guó)這方面的研究進(jìn)入申請(qǐng)臨床試驗(yàn)階段。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第二十九頁(yè)，共53頁(yè)。

法國(guó)科學(xué)家采用反轉(zhuǎn)錄病毒途徑,以CD34+骨髓造血干細(xì)胞為靶細(xì)胞,對(duì)兩例重癥聯(lián)合免疫缺乏癥嬰兒成功實(shí)施基因治療,患兒不再服用任何藥物就從隔離病房走向正常生活,機(jī)體免疫功能完全恢復(fù),能夠抵抗外界的各種病毒,細(xì)菌等病原體的感染?？茖W(xué)家稱這是基因治療取得完全成功的第一個(gè)報(bào)道。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療成功范例第三十頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委熞蝗怂劳?1999年10月美國(guó)賓州大學(xué)JMWilson在開(kāi)展腺病毒OTC基因治療肝臟遺傳病時(shí),一位亞利桑那州的十八歲的青年Gelsinger接受了高劑量治療后死亡。FDA調(diào)查:18點(diǎn)問(wèn)題,知情同意,及時(shí)匯報(bào);草率!FDA終止試驗(yàn)。媒體社會(huì)群起攻之;科學(xué)家保持沉默,內(nèi)心呼吁理解?；蛑委熐熬?基因治療是不是一場(chǎng)夢(mèng)?（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療存在的問(wèn)題第三十一頁(yè)，共53頁(yè)。Gelsinger死后:美國(guó)專家委員會(huì)要求所有的基因治療負(fù)面事件報(bào)告給NIH。RAC則要求建立公報(bào)基因治療相關(guān)病或死亡的制度。1999年:970例負(fù)面報(bào)告(85嚴(yán)重)2000年464例負(fù)面報(bào)告(1-3月)(43嚴(yán)重),除賓大外,佛羅里達(dá)州的一例死亡可能是基因治療所致,計(jì)死亡6人。至少另兩個(gè)基因治療中心已被關(guān)閉)。JeremyRifkin呼吁:暫停基治療。未及時(shí)匯報(bào)和公布原因:隱私和行業(yè)秘密（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療存在的問(wèn)題第三十二頁(yè)，共53頁(yè)。國(guó)家“863”高技術(shù)計(jì)劃自1987年起資助遺傳病基因治療;“八五”“九五”設(shè)重大,重點(diǎn)項(xiàng)目資助,國(guó)家自然科學(xué)基金也給予了面上及重點(diǎn)資助。中國(guó)基因治療也跟隨美國(guó)幾經(jīng)波折。1.復(fù)旦大學(xué)的血友病基因治療中國(guó)第一,世界第二

腦腫瘤基因治療:國(guó)際先進(jìn)（二）基因治療的現(xiàn)狀我國(guó)的基因治療研究第三十三頁(yè)，共53頁(yè)。2.上海腫瘤所---腦腫瘤/肝癌基因治療HSV-TK腦腫瘤基因治療臨床試驗(yàn)肝癌靶向基因治療申報(bào)臨床3.第二軍醫(yī)大學(xué):腫瘤免疫基因治療細(xì)胞因子;DC細(xì)胞4.上海第二醫(yī)科大學(xué)基因治療中心同種異體瘤苗;細(xì)胞因子,免疫增強(qiáng),血管生成及抑制;自殺基因,血友病A（二）基因治療的現(xiàn)狀我國(guó)的基因治療研究第三十四頁(yè)，共53頁(yè)。中科院上海生化所:帕金森等神經(jīng)系統(tǒng)基因治療,TK,GDNF,脂質(zhì)體,微囊移植上海兒童醫(yī)院:地中海貧血反義及藥物調(diào)控基因治療北京中國(guó)醫(yī)科院基礎(chǔ)所:地中海貧血基因治療:調(diào)控表達(dá);轉(zhuǎn)基因動(dòng)物北京醫(yī)科大學(xué):心腦血管基因治療北京中國(guó)預(yù)防醫(yī)科院病毒所:新型病毒載體:AAV大規(guī)模擴(kuò)增系統(tǒng)北京中國(guó)醫(yī)科院腫瘤所:腫瘤基因治療（二）基因治療的現(xiàn)狀我國(guó)的基因治療研究第三十五頁(yè)，共53頁(yè)。基因治療是一個(gè)涉及到基礎(chǔ)研究與臨床應(yīng)用的跨學(xué)科工程。目前，多數(shù)臨床試驗(yàn)項(xiàng)目都是由多家單位或企業(yè)合作進(jìn)行的。不僅有基礎(chǔ)與臨床的合作，同時(shí)也有科研機(jī)構(gòu)與企業(yè)的合作。多數(shù)用于臨床試驗(yàn)的載體是由基礎(chǔ)部門開(kāi)發(fā)，然后由企業(yè)進(jìn)行生產(chǎn)、制備后提供給臨床的。從而使得基因治療越來(lái)越接近或符合傳統(tǒng)藥物的生產(chǎn)制備與應(yīng)用程序。因此，也更趨于科學(xué)與合理。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療的產(chǎn)業(yè)化第三十六頁(yè)，共53頁(yè)。世界上幾家大的國(guó)際性制藥公司都早已成立了基因治療開(kāi)發(fā)部，拆巨資投入基因治療研究。如，BiogenInc.曾拆資3800萬(wàn)美元投入GenovoInc.,SandozLtd曾拆資2900萬(wàn)美元投入GeneticTherapyInc.進(jìn)行基因治療研究。而Ciba-GeigyLtd將21億資產(chǎn)的49.9％的股份投入ChironCorp，從事基因治療的開(kāi)發(fā)。還有，像AvigenInc.,CellGenesys,IntroGene,MediGene以及Transgene等公司都是從事基因治療研究與開(kāi)發(fā)的。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療的產(chǎn)業(yè)化第三十七頁(yè)，共53頁(yè)。AvigenInc.AAVsystemHemophiliaB,A,Gaucher,lungdisease,blooddisease.Parkin-sonsdisease($140millionNASDAQ$35.0)TransgenefivevectorsfourPII,cooperatedwithHGSI,Schering-PloughInc.CTL:AdIL-2,IFN-r,Verocells,Ag:MucIbreastcancer,etc.HPV16,AdCFTR,DMD,cardiovasculardisease,(NASDAQ&NouveauMarche)TranskaryoticTherapiesInc.Non-viralexvivogenetherapyproducts:GA-EPO;hemophilia,GH($400million)（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療的公司第三十八頁(yè)，共53頁(yè)。IntroGeneadenoviralvectorandstemcells(Crucell)

(Eruo50million)GeneTherapySystemsInc.DesignanddevelopsgenetherapyproductsQ-oneBiotechLtd.(UK)viralorplasmidforinvivoorexvivogenetherapyPI/IIVical:NakedDNAcompanyforcancer,DNAvaccinesandDNAproteindelivery.ChironCorp,CellGenesys,MediGene,Geneways,OxfordBioMedicaetc.（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療的公司第三十九頁(yè)，共53頁(yè)。上海腫瘤研究所與天津天獅集團(tuán)(2300萬(wàn))合作進(jìn)行腦腫瘤基因治療臨床試驗(yàn)。北京病毒所獲得大連某企業(yè)5000萬(wàn)投資,開(kāi)發(fā)新型病毒載體。上海第二軍醫(yī)大學(xué)獲得華晨集團(tuán)投資開(kāi)展免疫基因治療。深圳賽百諾公司從海外引進(jìn)技術(shù),開(kāi)展腺病毒P53基因治療進(jìn)入臨床試驗(yàn)。珠海麗珠集團(tuán),華北制藥,山東金泰等公司投資北京醫(yī)科大學(xué)開(kāi)展心腦血管疾病基因治療。（二）基因治療的現(xiàn)狀我國(guó)基因治療的產(chǎn)業(yè)化第四十頁(yè)，共53頁(yè)?；蛑委熍R床試驗(yàn)效果需要進(jìn)一步確認(rèn),無(wú)可爭(zhēng)議的療效太少；期望值和現(xiàn)實(shí)相差太大；在遺傳病基因治療中忽視科學(xué)價(jià)值和樣板作用基因轉(zhuǎn)移效率低;基因表達(dá)水平低?；虮磉_(dá)持續(xù)時(shí)間短;基因轉(zhuǎn)移缺乏靶向性;基因表達(dá)缺乏調(diào)控性;基因治療的操作復(fù)雜;基因治療的安全性(包括免疫)。缺乏足夠的疾病治療基因。缺乏有效的動(dòng)物模型。

（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療面臨的問(wèn)題第四十一頁(yè)，共53頁(yè)。1.大多重復(fù)國(guó)外同類實(shí)驗(yàn)；2.缺乏創(chuàng)新性各自為政,規(guī)模小,資金投入有限,缺乏中心的輻射作用；3.一哄而上,一哄而下,缺乏基因治療正確認(rèn)識(shí).4.缺乏孵化和轉(zhuǎn)化機(jī)制,更缺乏風(fēng)險(xiǎn)基金；5.基因治療研究和相關(guān)研究如基因組學(xué),病毒學(xué),免疫學(xué),轉(zhuǎn)基因動(dòng)物,臨床醫(yī)學(xué)的結(jié)合不夠；6.高級(jí)人才匱乏；7.重視商業(yè)價(jià)值,忽視科學(xué)價(jià)值和樣板作用。（二）基因治療的現(xiàn)狀我國(guó)基因治療存在的問(wèn)題第四十二頁(yè)，共53頁(yè)。造血干細(xì)胞(HSC)是最為理想的靶細(xì)胞:HSC具有永生性的能力;HSC具有很強(qiáng)的增殖,分化和自我更新的能力(從1到10萬(wàn));HSC產(chǎn)物直接進(jìn)入血液;HSC從采集、分離、體外培養(yǎng)、擴(kuò)增以及移植等技術(shù)路線已經(jīng)成熟。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療研究的若干熱點(diǎn)第四十三頁(yè)，共53頁(yè)。HSC特征及其面臨的問(wèn)題；HSC的獲取，分離純化；CD34+/38-;HSC培養(yǎng)和擴(kuò)增:培養(yǎng)體系；短期培養(yǎng)；間質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)；探尋細(xì)胞分化抑制劑；反轉(zhuǎn)錄病毒(RV)是HSC目前最為理想的基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)。小鼠造血干細(xì)胞已經(jīng)取得20－30％的高效轉(zhuǎn)移；而人HSC基因轉(zhuǎn)移效率低于1％；原因：1.細(xì)胞表面反轉(zhuǎn)錄病毒受體數(shù)目差異；其次,5－Fu,Ara-C處理的區(qū)別。（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療研究的若干熱點(diǎn)第四十四頁(yè)，共53頁(yè)。提高RV對(duì)HSV的基因轉(zhuǎn)移效率策略：刺激HSC增殖；提高RV受體表達(dá)；流動(dòng)轉(zhuǎn)導(dǎo)；纖維連接素(fibronection);GALV的env替換；腺相關(guān)病毒(AAV)因?yàn)樵谶z傳病基因治療中的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)而倍受親睞。AAV基因轉(zhuǎn)移HSC效率較低(復(fù)雜的機(jī)制,共受體)；AAV/SV40雜合病毒提高效率?；蛑委熝芯康娜舾蔁狳c(diǎn)（二）基因治療的現(xiàn)狀第四十五頁(yè)，共53頁(yè)。其它病毒載體:SV40病毒系統(tǒng):高效感染HSC,最高達(dá)到90%,是其它病毒不能比擬.問(wèn)題:整合?野毒污染.慢病毒(lentivirus):艾滋病的元兇-HIVRV的特性+有效轉(zhuǎn)染非分裂細(xì)胞;具有T細(xì)胞的靶向性;HSC導(dǎo)向外膜蛋白的替換問(wèn)題:安全性HSC基因治療已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn),取得成功,前景光明（二）基因治療的現(xiàn)狀基因治療研究的若干熱點(diǎn)第四十六頁(yè)，共53頁(yè)。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新型基因治療策略，是對(duì)人類某些特殊疾病現(xiàn)行基因治療弊端所作的策略和對(duì)策上