第八章 液相色譜

第八章液相色譜第一頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)高效液相色譜法簡(jiǎn)介第二節(jié)高效液相色譜的類型

第三節(jié)高效液相色譜儀第四節(jié)高效液相色譜固定相第五節(jié)液相色譜流動(dòng)相第六節(jié)高效液相色譜檢測(cè)器第八章高效液相色譜法第二頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)高效液相色譜法簡(jiǎn)介第三頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日高效液相色譜法是1964～1965年開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新穎快速的分離分析技術(shù)。

它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器后，發(fā)展成為高分離速度、高分離效率、高檢測(cè)靈敏度的高效液相色譜法。也稱現(xiàn)代液相色譜法。概述：第四頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

共同點(diǎn)：

高效液相色譜是在氣相色譜高速發(fā)展的情況下發(fā)展起來(lái)的，它們之間在理論上和技術(shù)上有許多共同點(diǎn)。

（1）色譜的基本理論是一致的；（2）定性定量原理完全一樣；（3）均可應(yīng)用計(jì)算機(jī)控制色譜操作條件和色譜數(shù)據(jù)的處理程序，自動(dòng)化程度高。

液相色譜和氣相色譜的異同點(diǎn)：第五頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日1.流動(dòng)相差別2.固定相差別3.使用范圍更廣4.在原理和結(jié)構(gòu)方面有差異因液相色譜的流動(dòng)相是液體，其粘度比氣體大100倍以上，擴(kuò)散系數(shù)比氣體小102～105倍；因此溶質(zhì)分子與液體流動(dòng)相之間的作用力不能忽略，致使液相色譜與氣相色譜有以下的差別：二者的差異：液相與氣相差異第六頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日流動(dòng)相：氣相色譜為氣體、液相色譜為液體。

以液體作流動(dòng)相，液體分子與樣品分子間的作用力不能忽略；液體種類多，性質(zhì)差別大，水溶液或有機(jī)溶劑，極性或非極性化合物，可供選擇的范圍廣。是控制柱效和分離效率的重要因素之一。

使高效液相色譜除了固定相的選擇外，增加了一個(gè)可供選擇的重要的操作參數(shù)。液相與氣相差異1.流動(dòng)相差別第七頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

氣相色譜固定相多為固體吸附劑或在擔(dān)體表面上涂漬一層高沸點(diǎn)有機(jī)液體而成的液體固定相、近年才出現(xiàn)一些化學(xué)鍵合相，粒度粗(100～250μm)，吸附等溫線多是非線性的，成本較低。

高效液相色譜固定相大都是新型的固體吸附劑或化學(xué)鍵合相，粒度小(3～10μm)，分配等溫線多是線性的，峰形對(duì)稱，成本較高，發(fā)現(xiàn)容量大，分析型色譜柱最大容量可達(dá)50mg以上。液相與氣相差異2.固定相差別第八頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

氣相色譜分析是沸點(diǎn)在500℃以下、分子量少于450的物質(zhì)。對(duì)熱穩(wěn)定性差、易于分解變質(zhì)，或具有生理活性的物質(zhì)，都不能用升溫氣化的方法分析。氣相色譜只能分析約占有機(jī)物總數(shù)15%～20%的物質(zhì)。

高效液相色譜在室溫或接近室溫條件下工作，可分析沸點(diǎn)在500℃以上、分子量450以上的有機(jī)物質(zhì)，約占總數(shù)的80%～85%。高效液相色譜的使用范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)氣相色譜。液相與氣相差異3.使用范圍廣第九頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

高壓液相色譜儀具有高壓輸液泵和輸液系統(tǒng)，其檢測(cè)器的檢測(cè)原理和結(jié)構(gòu)與氣相色譜也有較大差異。

高效液相色譜和氣相色譜在功能方面各有所長(zhǎng)、相互補(bǔ)充。

在高效液相色譜廣泛應(yīng)用的同時(shí)，氣相色譜仍然發(fā)揮著它的重要作用。液相與氣相差異4.在原理和結(jié)構(gòu)方面的不同第十頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日一、液－液色譜法，二、液－固色譜法，三、離子交換色譜法四、排阻色譜。第二節(jié)高效液相色譜的類型第十一頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日一、液－液色譜法①涂漬固定相，將某些固定液涂漬在惰性擔(dān)體的表面；涂漬的固定相，固定液易于流失，柱子壽命短，分離的重現(xiàn)性和分離效果好，是目前固定相的發(fā)展方向。②化學(xué)鍵合固定相，把化學(xué)基團(tuán)與惰性擔(dān)體反應(yīng)，使其以共價(jià)鍵的形式結(jié)合在擔(dān)體表面上。柱子性質(zhì)穩(wěn)定、壽命長(zhǎng)。又稱液－液分配色譜。1、液－液色譜固定相的形式，兩種：第十二頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

不同溶質(zhì)在兩個(gè)液相中，有不同的分配系數(shù)?；瘜W(xué)鍵合相的液－液色譜，分配機(jī)理和吸附機(jī)理同時(shí)存在。為了防止色譜分離過(guò)程中兩相的混溶，流動(dòng)相與固定相的極性必須不同。2、分離原理

當(dāng)固定相為極性時(shí)，流動(dòng)相為非極性溶劑，此時(shí)組分流出先后的順序是非極性向極性過(guò)度，稱為正相色譜。

固定相為非極性，用極性溶劑作流動(dòng)相，組分的流出順序是極性組分先流出，稱為反相色譜。3、正相色譜和反相色譜第十三頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日固定相與正相色譜或反相色譜相同，流動(dòng)相是含有適當(dāng)有機(jī)反離子的溶劑，它能與組分生成離子對(duì)，稱為正相離子對(duì)色譜或反相離子對(duì)色譜。離子對(duì)色譜，可以分析離子型或可離解的化合物。4、液－液色譜的一種特殊形式

——離子對(duì)色譜第十四頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日二、液－固色譜也稱液－固吸附色譜1、固定相：以固體吸附劑如硅膠，各種微球硅珠，氧化鎂，氧化鋁，活性炭，聚酰胺等作為固定相。吸附劑粒度約20～50μm或35～75μm左右，比液－液色譜固定相(3～10μm)的粒度大。2、分離原理：吸附劑表面與溶質(zhì)分子中功能團(tuán)的吸附與解吸作用，是溶質(zhì)分子與溶劑分子對(duì)固定相的競(jìng)爭(zhēng)吸附的能力差異。溶劑的極性強(qiáng)弱對(duì)分離和分析速度影響很大，液－固色譜主要用來(lái)分析具有極性官能團(tuán)、且極性不太強(qiáng)的化合物。第十五頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

吸附劑對(duì)同系物的選擇分離能力小，對(duì)不同族化合物的選擇分離能力強(qiáng)。主要用于按族分離化合物。

溶質(zhì)分子在吸附劑活性中心上的吸附能力與分子的幾何形狀有關(guān)，液－固色譜對(duì)異構(gòu)體有高的選擇性，能分離幾何異構(gòu)體(順?lè)串悩?gòu)體)和同分異構(gòu)體(不同取代位)。

缺點(diǎn):重復(fù)性差。對(duì)流動(dòng)相的含水量須嚴(yán)格控制，方能獲得有重復(fù)性的保留值。每次分析后，特別是作梯度洗脫時(shí)，色譜柱再生的時(shí)間很長(zhǎng)，耗費(fèi)溶劑多。

3、液－固色譜分離特點(diǎn)第十六頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日三、離子交換色譜

1、固定相：為帶有電荷官能團(tuán)的離子交換劑，并存在帶相同電荷數(shù)的相反離子——反離子。根據(jù)分離離子的不同而采用陽(yáng)離子交換劑(-SO3-等基團(tuán))或陰離子交換劑(-N(CH3)3+等)。2、機(jī)理：流動(dòng)相中被分析的離子與反離子之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附。根據(jù)吸附能力不同將物質(zhì)分離。離子交換色譜主要用于分離能解離為離子的化合物，如無(wú)機(jī)離子、核酸、氨基酸等。

第十七頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日交換劑R+Y-交換劑R+Y-X-X-╋╋交換吸附交換劑R+的反離子Y-是陰離子的為陰離子交換色譜。交換劑R-帶負(fù)電荷，其反離子Y+為陽(yáng)離子的稱為陽(yáng)離子交換色譜。離子交換色譜的吸附示意第十八頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日四、凝膠色譜

也稱排阻色譜、空間排阻色譜等。凝膠色譜是基于分子大小不同而進(jìn)行分離的一種色譜技術(shù)。

1、固定相：凝膠。是一種表面惰性，含有許多不同尺寸孔穴或立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。凝膠的孔穴大小應(yīng)與被分離組分的大小基本相當(dāng)。第十九頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日2、分離原理：當(dāng)試樣隨流動(dòng)相在凝膠外的間隙和凝膠空穴中流動(dòng)時(shí)，分子體積大的不能滲透到凝膠孔穴中去，隨流動(dòng)相快速流出。中等大小的分子，能選擇性地滲透到部分孔穴中去，流出稍慢。分子體積小的，則滲透到凝膠內(nèi)部的孔穴深處中，移出困難，被沖洗出來(lái)的速度慢。分子越小，在孔穴的滲透越深，流出越慢。這樣，各組分按分子大小先后從柱中流出。第二十頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

3、應(yīng)用：凝膠色譜主要是分離和鑒定高分子量的化合物。對(duì)于分子量高達(dá)150’000’000的特大分子的混合物也可進(jìn)行分離和鑒定。凝膠顆粒的微孔直徑大小可根據(jù)分析的要求加以選擇。其孔徑的線性范圍不同，可以用于分離不同分子量范圍的組分。凝膠色譜在生物樣品(蛋白質(zhì)、酶、核酸等)與高分子化合物的化學(xué)分析中有重要的應(yīng)用價(jià)值。

第二十一頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日第三節(jié)高效液相色譜儀現(xiàn)代高效液相色譜儀，在復(fù)雜程度及各種部件的功能上都有很大的差別。儀器的基本結(jié)構(gòu)可分為：液相輸送系統(tǒng)，進(jìn)樣系統(tǒng)，色譜分離系統(tǒng)與檢測(cè)記錄數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等四部分。

第二十二頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日液相色譜儀的結(jié)構(gòu)示意圖餾分收集器高壓輸液泵貯液器梯度洗脫裝置液相輸送系統(tǒng)進(jìn)樣閥進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱色譜分離系統(tǒng)檢測(cè)記錄系統(tǒng)

檢測(cè)器記錄儀第二十三頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日一、液相輸送系統(tǒng)液相輸送系統(tǒng)包括：貯液槽、高壓泵，有的還配備有梯度洗脫裝置。

1、貯液槽：貯存流動(dòng)相，容量為0.5～1L。流動(dòng)相必須脫氣，除去溶解在流動(dòng)相中的空氣，以防止溶解的空氣在檢測(cè)池內(nèi)形成氣泡，引起基線漂移，或不規(guī)則的噪音。脫氣的方法：(1)超聲波振動(dòng)脫氣，(2)加熱沸騰回流脫氣

(3)真空脫氣。第二十四頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

高壓輸液泵的作用是輸送恒定流量的流動(dòng)相。按輸液特性可分為：恒流泵和恒壓泵。(1)恒流泵主要優(yōu)點(diǎn)是始終輸送恒定流量的液體，與柱壓力的大小和壓力的變化無(wú)關(guān)。因此，保留值的重復(fù)性好，基線穩(wěn)定，能滿足高精度分析和梯度洗脫的要求。2.高壓輸液泵第二十五頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日恒流泵的主要類型為：柱塞式往復(fù)泵。該泵的主要優(yōu)點(diǎn)：輸液連續(xù)，流速與色譜系統(tǒng)的壓力無(wú)關(guān)，泵室的體積很小(幾微升到幾十微升)。適用于梯度洗脫和再循環(huán)洗脫，清洗方便，更換溶劑容易。缺點(diǎn)：輸送有脈動(dòng)的液流，液流不穩(wěn)定，引起基線噪聲。克服的方法是在泵和色譜柱間串入一根盤(pán)狀阻尼管，使液流平穩(wěn)。第二十六頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

恒壓泵通過(guò)采用適當(dāng)?shù)臍鈩?dòng)裝置，使高壓惰性氣體直接加壓于流動(dòng)相，輸出無(wú)脈動(dòng)的液流。也稱為氣動(dòng)泵。這種泵簡(jiǎn)單價(jià)廉，但流速不如恒流泵精確穩(wěn)定。只適用于對(duì)流速精度要求不高的分析或作為裝填色譜柱用泵。

恒壓泵的優(yōu)點(diǎn)：容易獲得高壓，沒(méi)有脈沖，流速范圍大。

缺點(diǎn)：受系統(tǒng)壓力變化的影響大，保留值重復(fù)性較差，不適于梯度洗脫操作。泵體積較大，更換溶劑麻煩、耗費(fèi)量大。（2）恒壓泵第二十七頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日洗脫裝置有兩種工作方式：

一種是以兩臺(tái)或多臺(tái)高壓泵將不同的溶劑吸入混合室，在高壓下混合，然后進(jìn)入色譜柱。優(yōu)點(diǎn)是通過(guò)電子器件分別程序控制兩臺(tái)或多臺(tái)輸液泵的流量，就可以獲得任何一種形式的淋洗濃度曲線。缺點(diǎn)混合多種溶劑，需要多臺(tái)高壓泵。

另一種是以一臺(tái)高壓泵通過(guò)多路電磁閥控制各路吸入的流量,同時(shí)吸入幾種溶劑，經(jīng)混合后送到色譜柱，這樣只要一臺(tái)高壓泵。

3.梯度洗脫裝置

指在分離過(guò)程中，隨時(shí)間函數(shù)程序的改變，流動(dòng)相的組成也逐漸改變，即流動(dòng)相的強(qiáng)度(極性，pH，離子強(qiáng)度等)逐漸改變。第二十八頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日包括：進(jìn)樣口、注射器、六通閥和定量管等。它的作用是把樣品有效的送入色譜柱中。

進(jìn)樣系統(tǒng)是柱外效應(yīng)的重要來(lái)源之一，為了減少對(duì)板高的影響，避免由柱外效應(yīng)而引起峰展寬，對(duì)進(jìn)樣口要求死體積小，沒(méi)有死角，能夠使樣品象塞子一樣進(jìn)入色譜柱。二、進(jìn)樣系統(tǒng)第二十九頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

包括：色譜柱，柱溫箱和連接閥等。

色譜柱色譜柱包括柱管和固定相兩部分。柱材料要求耐高溫，內(nèi)壁光滑，管內(nèi)徑均勻，無(wú)條紋或微孔等；最常用的是不銹鋼管。

柱溫箱柱溫是液相色譜的重要操作參數(shù)。在較高的柱溫下操作的優(yōu)點(diǎn)：1.能增加樣品在流動(dòng)相中的溶解度，縮短分析時(shí)間，柱溫升高6℃，組分保留時(shí)間約減少30%；2.減少傳質(zhì)阻力，增加柱效；3.降低流動(dòng)相粘度，在相同流量下，降低柱壓。液相色譜常用柱溫范圍為室溫65℃。三、色譜分離系統(tǒng)第三十頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

四、檢測(cè)記錄數(shù)據(jù)系統(tǒng)包括：檢測(cè)器、記錄儀和微型數(shù)據(jù)處理機(jī)。

常用的檢測(cè)器為：示差折光檢測(cè)器，紫外吸收檢測(cè)器，熒光檢測(cè)器，二極管陣列檢測(cè)器等。

記錄和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)與氣相色譜儀相同。第三十一頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日一、液-固色譜固定相二、液－液色譜固定相三、離子交換劑固定相四、凝膠色譜固定相第四節(jié)高效液相色譜固定相第三十二頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

是以硅膠為基體的各種類型的硅珠。主要有全多孔微粒型硅珠、多孔層硅珠和堆積型硅珠。

1、全多孔硅珠，最初使用的是粒度30～70μm的全多孔硅珠，比表面積大約100～400m2/g。

優(yōu)點(diǎn)：孔徑大而深，粒度大，易于裝柱；比表面積大、柱容量大，允許較大進(jìn)樣量；制作工藝簡(jiǎn)單，成本也低。

缺點(diǎn)：孔徑深，傳質(zhì)阻力大，柱效不高。

現(xiàn)在多用粒度為5～10μm的全多孔微粒型硅珠，在柱效或柱容量方面都有大大提高。一、液-固色譜固定相第三十三頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

2、多孔層硅珠：也稱表面多孔硅珠或薄殼硅珠。它是在粒度為30～50μm的硅珠表面上，覆蓋一層多孔性基質(zhì)，厚度為1～2μm。優(yōu)點(diǎn)：孔淺，傳質(zhì)阻力小，柱效較高；流動(dòng)性好，可用于干法裝柱。

缺點(diǎn)：比表面積小，只有1～20m2/g，樣品容量小，易發(fā)生過(guò)載現(xiàn)象。只適用于高靈敏度檢測(cè)器。液-固色譜固定相第三十四頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

3、堆積型硅珠：將顆粒極細(xì)的硅珠經(jīng)一定工藝，凝聚成5～10μm的堆積硅珠。

優(yōu)點(diǎn)：粒度分布窄、粒徑接近，比表面積大，柱滲透性小，柱效高，壓力低。

缺點(diǎn)：制造工藝復(fù)雜，價(jià)格昂貴。

微粒型全多孔硅珠和堆積型硅珠具有傳質(zhì)快，柱效高，容量大的優(yōu)點(diǎn)，已成為液－固色譜常用的固定相，普遍取代了多孔層硅珠。

液-固色譜固定相第三十五頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日不同土壤，不同磷源30mm二、液－液色譜固定相

主要為化學(xué)鍵合固定相。以硅珠為基質(zhì)，利用硅珠表面的硅醇基團(tuán)與鍵合基反應(yīng)加工而成。優(yōu)點(diǎn)是：

1、在表面鍵合了有機(jī)物基團(tuán)，消除了表面的吸附活性點(diǎn)，使表面更均一。2、可以通過(guò)改變鍵合不同的有機(jī)分子基團(tuán)來(lái)改變選擇性。3.

柱效高，固定液不流失，提高了柱子的穩(wěn)定性和使用壽命。4.由于牢固的化學(xué)鍵，能耐各種溶劑，有利于梯度淋洗和樣品的回收。第三十六頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日三、離子交換劑固定相

離子交換劑固定相的基質(zhì)有兩種類型：一種是以硅膠微球；另一類是苯乙烯與二乙烯基苯的共聚物。

強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的交換基為磺酸基，弱酸性的羧基。強(qiáng)堿性的陰離子交換樹(shù)脂基為季銨鹽，弱堿性的為-NH(R)2CI。

主要類型：薄殼玻珠～苯磺酸、薄殼玻珠～乙基苯磺酸、薄殼玻珠～丙氨基丙酸、堆積硅珠～丙氨基丙酸、薄殼玻珠～丙基芐基二甲胺氯等。第三十七頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日按化學(xué)類型可分為軟性，半軟性，剛性凝膠。

軟性凝膠在高的流速下會(huì)被壓縮，并會(huì)從柱末端擠壓出來(lái)，只適用于低流速的液相色譜。

半軟性凝膠可用于高效液相色譜，但壓力不能超過(guò)150kg/cm2。

剛性凝膠為多孔硅膠，它們近于純的SiO2,其孔徑按不同方法形成。多孔硅膠表面上有酸性基團(tuán)，能與某些樣品作用，需進(jìn)行表面處理。四、凝膠色譜固定相第三十八頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日在液相色譜中，許多溶劑都可用作流動(dòng)相。第五節(jié)、液相色譜流動(dòng)相一、對(duì)流動(dòng)相的要求1.對(duì)色譜柱、固定相和分離組分要有惰性。2.對(duì)樣品有較大的溶解度。3.對(duì)所選用的檢測(cè)器沒(méi)有干擾。4.粘度小。5.純度高，成本低，容易清洗，沸點(diǎn)合適，以利于回收分離樣品。6.毒性要小，穩(wěn)定性要好。第三十九頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

1、流動(dòng)相對(duì)檢測(cè)器的影響。如用紫外檢測(cè)器時(shí)，要求流動(dòng)相在紫外區(qū)吸收很弱。采用示差折光儀時(shí)，流動(dòng)相的折光指數(shù)要與樣品組分的折光指數(shù)有較大差別。

2、流動(dòng)相的粘度小，分析組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)大，減少了傳質(zhì)阻力。如流動(dòng)相粘度增加，不僅柱效降低，而且滲透性下降，分析時(shí)間增加。對(duì)流動(dòng)相的要求注：第四十頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日

在液相色譜中一般固定相不容易改變(色譜柱固定)。常用改變流動(dòng)相的強(qiáng)度或極性來(lái)提高分離效率。

溶劑極性的大小，可用溶劑強(qiáng)度E0來(lái)表示，溶劑強(qiáng)度的順序稱為洗脫序列，與溶劑的洗脫能力大致相符。工作中，可以溶劑洗脫序列為依據(jù)，正確的選擇一定強(qiáng)度的溶劑，以解決色譜分離。溶劑的極性也可用溶解度參數(shù)d表示，它是靜電力、誘導(dǎo)力、色散力和氫健力等的總效應(yīng)。二、溶劑強(qiáng)度第四十一頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日常用溶劑的極性順序溶劑正戊烷正己烷環(huán)己烷四氯化碳苯乙醚氯仿二氯甲烷四氫呋喃二氧六烷丙酮醋酸乙酯乙腈甲醇水強(qiáng)度E00.000.010.010.180.320.380.400.420.450.560.560.580.650.951.00小大溶解度7.17.38.28.69.27.49.19.69.19.89.48.611.812.921參數(shù)d與E0略有差異第四十二頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日三、液－固色譜流動(dòng)相的選擇

主要考慮：溶劑的強(qiáng)度、溶劑的組成、適當(dāng)控制溶劑的含水量。四、液－液色譜流動(dòng)相的選擇

正相色譜：在非極性的流動(dòng)相中，加入極性改性劑如甲醇、四氫呋喃、氯仿等，通過(guò)改變?nèi)軇┑膹?qiáng)度來(lái)使組分分離。

反相色譜：用水與強(qiáng)溶劑甲醇、乙腈以適當(dāng)比例混合，再適當(dāng)配上其它溶劑，結(jié)合梯度洗脫技術(shù)，可使復(fù)雜的組分分離。

離子對(duì)色譜：改變反離子的濃度，控制各組分的分配系數(shù)來(lái)使組分分離。第四十三頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日五、離子交換色譜流動(dòng)相的選擇

1、pH值，pH值對(duì)交換基團(tuán)和樣品組分的離解度都有顯著影響。增加pH值，樣品的正電性降低，在陽(yáng)離子色譜上保留值下降，在陰離子色譜上保留值增加。

2、離子強(qiáng)度，流動(dòng)相的離子強(qiáng)度越大，洗脫能力越強(qiáng)、組分的保留時(shí)間越短。

3、緩沖液類型，不同離子因電荷數(shù)、離子半徑、離子的溶劑化特性不同，與交換基團(tuán)的作用力不同、洗脫能力也不同。陽(yáng)離子交換能力：Ba2+>K+>NH4+>Li+>H+。陰離子：OH-?SO42-?檸檬酸根?酒石酸根?NO3-?PO43-?醋酸根?Cl-。第四十四頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日1、粘度，高粘度將限制擴(kuò)散，降低組分的分離度。2、溶劑對(duì)樣品組分的溶解能力，使用的溶劑既要能溶解樣品，又要與凝膠的性質(zhì)極為相似，這樣才能潤(rùn)濕凝膠、防止凝膠對(duì)樣品組分的吸附作用。六、凝膠色譜流動(dòng)相的選擇第四十五頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日檢測(cè)器聯(lián)接在液相色譜柱的出口上。樣品在色譜柱中被分離后，隨同流動(dòng)相連續(xù)的流經(jīng)檢測(cè)器，檢測(cè)器根據(jù)流動(dòng)相中組分的量或組分的濃度輸出一個(gè)信號(hào)，來(lái)定量表示被測(cè)組分含量或濃度的變化，最終得到樣品中各個(gè)組分的含量。第六節(jié)、高效液相色譜檢測(cè)器檢測(cè)器是色譜分析工作中，定性、定量分析的主要工具。第四十六頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日對(duì)檢測(cè)器的要求：靈敏度高、重復(fù)性好、響應(yīng)快、峰形好、線性范圍廣、對(duì)流量和溫度的變化不敏感。

應(yīng)用最廣泛的是紫外吸收檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、二極管陣列檢測(cè)器等。第四十七頁(yè)，共五十五頁(yè)，2022年，8月28日紫外吸收檢測(cè)器（UV）的作用原理和結(jié)構(gòu)與常用的紫外～可見(jiàn)分光光度計(jì)基本相同，儀器結(jié)構(gòu)的主要區(qū)別是將吸收池改為流動(dòng)池。流動(dòng)吸收池的體積一般只有5～15μl，光程長(zhǎng)1cm左右，以適應(yīng)高效液相色譜進(jìn)樣量小，柱外譜帶展寬小的要求。一、紫外吸收檢測(cè)器第四十八頁(yè)，共五十