呼吸道病原體檢測

呼吸道病原體檢測現(xiàn)在是1頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道感染呼吸道感染是指病原體感染人體的鼻腔、咽喉、氣管和支氣管等呼吸系統(tǒng)分為上呼吸道感染和下呼吸道感染現(xiàn)在是2頁\一共有59頁\編輯于星期五上呼吸道感染常見急性上呼吸道感染，指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱，是呼吸道最常見的一種傳染病常見病因?yàn)椴《荆贁?shù)由細(xì)菌引起。患者不分年齡、性別、職業(yè)和地區(qū)。不僅具有較強(qiáng)的傳染性，而且可引起嚴(yán)重并發(fā)癥現(xiàn)在是3頁\一共有59頁\編輯于星期五下呼吸道感染包括急性氣管/支氣管炎、慢性支氣管炎、肺炎、支氣管擴(kuò)張等由病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、軍團(tuán)菌等微生物引起，其防治應(yīng)遵循預(yù)防為主、準(zhǔn)確診斷、及時(shí)治療的原則，治療時(shí)必須明確引起感染的病原體以選擇有效的抗生素現(xiàn)在是4頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道病原體常見的呼吸道病原體主要有病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體和立克次體等據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起一種病原體可引起多種臨床癥狀，同一臨床表現(xiàn)可由多種病原體引起現(xiàn)在是5頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道病原體細(xì)菌：細(xì)菌引起呼吸道感染的機(jī)會(huì)比病毒少。一旦感染，癥狀多較嚴(yán)重，定位比較明顯，如扁桃體炎、中耳炎、鼻竇炎等。由細(xì)菌引起的兒童肺炎往往是流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌或金黃色葡萄球菌現(xiàn)在是6頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道病原體病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等現(xiàn)在是7頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道病原體支原體、衣原體感染導(dǎo)致的呼吸道感染與其它病原體感染的早期臨床表現(xiàn)類似?？赡茉?-3天后咳嗽的癥狀會(huì)表現(xiàn)比較突出。在小于30歲的年輕人中，肺炎支原體是最重要的下呼吸道病原體現(xiàn)在是8頁\一共有59頁\編輯于星期五非典型呼吸道病原體是指除肺炎鏈球菌以外的病原體，包括嗜肺軍團(tuán)菌(LP)、肺炎支原體(MP)、肺炎衣原體(CP)、Q熱立克次體(貝納柯克斯體)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV)和副流感病毒(PIV)等現(xiàn)在是9頁\一共有59頁\編輯于星期五非典型呼吸道病原體這些病原體變異快，傳播廣，由于不易形成長期免疫力而難以預(yù)防和控制流感病毒副流感病毒病毒呼吸道合胞病毒腺病毒現(xiàn)在是10頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道病原體檢測現(xiàn)有的主要方法：病毒分離培養(yǎng)抗原檢測抗體檢測分子生物學(xué)方法等現(xiàn)在是11頁\一共有59頁\編輯于星期五檢測方法的比較檢測方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)病毒分離培養(yǎng)特異性高，金標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件要求高、靈敏度低，標(biāo)本中病原體量少時(shí)，易致假陰性?？乖瓩z測直接免疫熒光法簡便、快速、靈敏度和特異性均較高且可用于疾病的早期診斷需要特異性抗體、熒光顯微鏡，易受采樣限制抗體檢測間接免疫熒光法靈敏度、特異性較高對疾病早期診斷沒有太大幫助酶聯(lián)免疫吸附法較快速，批量篩查特異性不高，假陽性多分子生物學(xué)方法靈敏度和特異性均很高操作繁瑣，價(jià)格昂貴現(xiàn)在是12頁\一共有59頁\編輯于星期五抗體、抗原檢測的比較抗體IgM檢測病原體抗原檢測檢測最佳時(shí)間一般在感染一周左右病毒感染出現(xiàn)癥狀后即可檢測出臨床意義回顧性診斷，適用于疾病中后期的診斷，可用于疾病早期診斷，對患者的治療有重要指導(dǎo)意義檢測靈敏度將包被有不同基質(zhì)的生物薄片固定在一個(gè)反應(yīng)區(qū)中，可同時(shí)檢測多種抗不同病原體的抗體檢測方法一般使用ELISA或者間接免疫熒光法，有非特異性熒光一般使用直接免疫熒光法，幾乎沒有非特異性反應(yīng)，敏感性較差現(xiàn)在是13頁\一共有59頁\編輯于星期五IgMIgG現(xiàn)在是14頁\一共有59頁\編輯于星期五機(jī)體產(chǎn)生IgM一般需要一周左右的時(shí)間，而有免疫缺陷或免疫系統(tǒng)不健全的個(gè)體如兒童，特別是3歲以下的小孩，其產(chǎn)生抗體往往需要更久，且抗體產(chǎn)生的水平也較低若檢測的是IgG，則不能很好地區(qū)分既往感染和急性感染現(xiàn)在是15頁\一共有59頁\編輯于星期五因此，抗原檢測的方法對嬰幼兒和兒童的呼吸道感染的病因診斷、鑒別診斷和臨床用藥指導(dǎo)比抗體法更有優(yōu)勢檢測抗體IgM比IgG更有臨床意義現(xiàn)在是16頁\一共有59頁\編輯于星期五采樣抗原檢測拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻腔伸入。

伸入距離為從耳垂部到鼻尖長度的一半，一般針對兩周歲以下兒童，伸入距離約為拭子絨毛頭的長度兩倍拭子伸入后要輕輕捻動(dòng)拭子轉(zhuǎn)3圈。

取樣后在一小時(shí)之內(nèi)洗脫到生理鹽水中，12小時(shí)內(nèi)送檢現(xiàn)在是17頁\一共有59頁\編輯于星期五抗原檢測采樣現(xiàn)在是18頁\一共有59頁\編輯于星期五采樣抗體檢測現(xiàn)在是19頁\一共有59頁\編輯于星期五采樣對結(jié)果影響較大非典型感染多為干咳，無痰/少痰陽性率低（標(biāo)本問題，病毒顆粒小）抗原在體內(nèi)存在時(shí)間短抗原檢測的劣勢現(xiàn)在是20頁\一共有59頁\編輯于星期五九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測現(xiàn)在是21頁\一共有59頁\編輯于星期五檢測原理間接免疫熒光法（IFA）是基于待測樣本中的抗體與吸附在載玻片上的抗原發(fā)生的反應(yīng)。樣本中存在的特異性抗體和抗原反應(yīng)，未與抗原結(jié)合的免疫球蛋白在洗滌步驟中除去。在下一步驟中，抗原-抗體復(fù)合物與熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)，用免疫熒光顯微鏡觀察結(jié)果現(xiàn)在是22頁\一共有59頁\編輯于星期五試劑盒組成組分成分和用途載玻片檢測的物理載體，覆有聚四氟乙烯并包被有針對檢測物的特異性抗原，質(zhì)控品吸附劑羊抗人IgG用來吸附人IgG避免干擾IgM檢測FITC結(jié)合物熒光素標(biāo)記的抗人免疫球蛋白結(jié)合物，和抗原抗體復(fù)合物反應(yīng)，并顯色封閉介質(zhì)甘油緩沖液，便于觀察磷酸鹽緩沖液(PBS)用于洗滌步驟，從反應(yīng)介質(zhì)中除去未結(jié)合的免疫球蛋白和結(jié)合物現(xiàn)在是23頁\一共有59頁\編輯于星期五實(shí)驗(yàn)步驟1樣本的稀釋：血清標(biāo)本與PBS按1:1比例稀釋稀釋后的血清加入吸附劑中，徹底混勻。處理后的血清要離心10-15分鐘除去沉淀，以防干擾檢測現(xiàn)在是24頁\一共有59頁\編輯于星期五實(shí)驗(yàn)步驟2現(xiàn)在是25頁\一共有59頁\編輯于星期五結(jié)果判斷現(xiàn)在是26頁\一共有59頁\編輯于星期五陰性結(jié)果熒光圖譜軍團(tuán)菌、肺炎衣原體和立克次體無熒光；支原體、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的細(xì)胞呈現(xiàn)紅色現(xiàn)在是27頁\一共有59頁\編輯于星期五陽性結(jié)果熒光圖譜腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒或副流感病毒對陽性血清的1-15%細(xì)胞的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光；軍團(tuán)菌、衣原體或立克次體中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光；支原體對陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光現(xiàn)在是28頁\一共有59頁\編輯于星期五病原體形態(tài)或熒光模式嗜肺軍團(tuán)菌桿狀肺炎支原體細(xì)胞外圍熒光模式立克次體球桿狀肺炎衣原體球狀腺病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）呼吸道合胞病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）甲型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）乙型流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）副流感病毒混合熒光模式（細(xì)胞核和胞漿或胞膜）現(xiàn)在是29頁\一共有59頁\編輯于星期五嗜肺軍團(tuán)菌陰性：熒光弱、少、不規(guī)則現(xiàn)在是30頁\一共有59頁\編輯于星期五嗜肺軍團(tuán)菌陽性：熒光密集，且亮度較好，桿狀形態(tài)現(xiàn)在是31頁\一共有59頁\編輯于星期五肺炎支原體陰性：紅色細(xì)胞周圍無或少量熒光，亮度弱現(xiàn)在是32頁\一共有59頁\編輯于星期五肺炎支原體陽性：熒光占視野50%以上，亮度好，形態(tài)為明顯的細(xì)胞膜或胞漿現(xiàn)在是33頁\一共有59頁\編輯于星期五Q熱立克次體陰性：熒光弱、少、不規(guī)則現(xiàn)在是34頁\一共有59頁\編輯于星期五Q熱立克次體陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，形態(tài)典型現(xiàn)在是35頁\一共有59頁\編輯于星期五肺炎衣原體陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是36頁\一共有59頁\編輯于星期五肺炎衣原體陽性：熒光密集，且亮度較好現(xiàn)在是37頁\一共有59頁\編輯于星期五腺病毒陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是38頁\一共有59頁\編輯于星期五腺病毒陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞>3-5個(gè)現(xiàn)在是39頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道合胞病毒陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是40頁\一共有59頁\編輯于星期五呼吸道合胞病毒陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞>3-5個(gè)現(xiàn)在是41頁\一共有59頁\編輯于星期五甲型流感病毒陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是42頁\一共有59頁\編輯于星期五甲型流感病毒陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞>3-5個(gè)現(xiàn)在是43頁\一共有59頁\編輯于星期五乙型流感病毒陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是44頁\一共有59頁\編輯于星期五乙型流感病毒陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞>3-5個(gè)現(xiàn)在是45頁\一共有59頁\編輯于星期五副流感病毒陰性：熒光弱、少現(xiàn)在是46頁\一共有59頁\編輯于星期五副流感病毒陽性：熒光亮度強(qiáng)且數(shù)量多，平均每個(gè)視野的陽性細(xì)胞>3-5個(gè)現(xiàn)在是47頁\一共有59頁\編輯于星期五方法的局限性抗體水平無顯著上升時(shí)不能排除感染的可能性單一樣本抗體檢測結(jié)果不能幫助作出近期感染的診斷。應(yīng)采集雙份樣本（急性期和康復(fù)期）同時(shí)檢測來觀察血清轉(zhuǎn)化或抗體水平的明顯升高現(xiàn)在是48頁\一共有59頁\編輯于星期五方法的局限性對患有自身免疫性疾病病人的血清，用IFA檢測時(shí)，支原體、腺病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒，會(huì)在細(xì)胞上發(fā)生非特異性反應(yīng)，這些血清不能用此方法評價(jià)質(zhì)控孔用于檢測這種現(xiàn)象現(xiàn)在是49頁\一共有59頁\編輯于星期五方法的局限性在嗜肺軍團(tuán)菌和Q熱立克次體中，有時(shí)血清會(huì)含有與卵抗原反應(yīng)的抗體，所以使用卵黃囊固定抗原會(huì)出現(xiàn)非特異性熒光。當(dāng)出現(xiàn)這種情況時(shí)，該血清就不能用IFA進(jìn)行分析了現(xiàn)在是50頁\一共有59