性激素六項檢測與臨床應(yīng)用

免疫學(xué)檢測發(fā)展簡介免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進行檢測的一種手段，由于其可以利用同位素、酶、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。第一頁，共29頁。免疫學(xué)檢測發(fā)展簡介免疫分析經(jīng)歷了放射免疫檢驗、熒光免疫檢驗、酶標免疫檢驗等不同時期，化學(xué)發(fā)光免疫檢驗是免疫分析發(fā)展的一個新階段，它環(huán)保、快速、準確的特點已得到人們的普遍認識。

因此化學(xué)發(fā)光免疫分析是通往免疫檢驗完美境界的必經(jīng)之路。第二頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)原理化學(xué)發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是將化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光體系與免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光是在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射。其機制為某些化合物（發(fā)光劑或發(fā)光底物）可以利用一個化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子激態(tài)。當此產(chǎn)物分子或中間態(tài)分子衰退至基態(tài)時，以發(fā)射光子的形式釋放能量（即發(fā)光）。免疫測定(immunoassay)是利用抗原體反應(yīng)來測定標本中微量物質(zhì)的方法。第三頁，共29頁。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)原理1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。3.洗滌后加入發(fā)光底物，酶促使發(fā)光底物發(fā)光，通過專用的儀器檢測光子的數(shù)量，從而反算出未知抗原或抗體的濃度。第四頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測原理

在化學(xué)發(fā)光免疫分析，基本原理同酶聯(lián)免疫技術(shù)(ELISA)，常采用雙抗體夾心法、競爭法、等反應(yīng)模式。第五頁，共29頁。檢測方法的比對1、化學(xué)發(fā)光與酶免的對比

2、化學(xué)發(fā)光與放免的對比

3、化學(xué)發(fā)光與時間分辯熒光檢測的對比

4、化學(xué)發(fā)光的突出優(yōu)點第六頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光與酶免的對比酶免原理：1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。3.洗滌后加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測的靈敏度與可測范圍遠遠高于酶免產(chǎn)品，兼具ELISA法簡便的操作方法與較短的反應(yīng)時間。第七頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光與酶免的對比表酶標化學(xué)發(fā)光測量精度定性/半定量測量定量測量人體傷害底物有致癌性無有效期較短長干擾因素多極少測試項目少多第八頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光與放免的對比放免原理是使用具有放射性的I125作標記物，然后用測量射線計數(shù)儀放射性（125I）。對環(huán)境的污染及對身體的危害，已經(jīng)為重視環(huán)保的國家逐步取消。（如整個歐洲僅尚存幾個放免試驗室）125I的半衰期短而導(dǎo)致其試劑有效期短標記物125I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標準曲線有效期短，必須每次定標，造成浪費。

操作繁瑣，出報告時間長。第九頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光與放免的對比表放免化學(xué)發(fā)光測量精度較高高人體傷害放射性無有效期較短長干擾因素較多極少測試項目較少多第十頁，共29頁。化學(xué)發(fā)光與時間分辨的對比時間分辨免疫檢測原理和化學(xué)發(fā)光基本一樣，只是標記物改為稀土元素，不用發(fā)光底物但需要外在的穩(wěn)定光源照射，光的波長產(chǎn)生stoke位移，并有一個時間滯后以便于檢測波長改變后的光子數(shù)量。

1、化學(xué)發(fā)光成本低于時間分辨熒光免疫分析。

2、化學(xué)發(fā)光比時間分辨熒光免疫試劑盒更穩(wěn)定

3、化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒對對測試環(huán)境條件要求低。

4、化學(xué)發(fā)光不需要外光源，儀器可靠性更高第十一頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光與時間分辯熒光的對比化學(xué)發(fā)光時間分辯熒光標記物酶-發(fā)光底物兩級放大稀土離子，如銪穩(wěn)定性穩(wěn)定性非常好影響被標記物的生物活性與免疫活性靈敏度靈敏稍高于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系接近中性酸性，易引起蛋白質(zhì)變性包被技術(shù)不透明微量孔壁吸附,提高分析靈敏度,降低本底采用透明微量孔壁吸附，孔壁的透明度會引起,本底干擾技術(shù)性新技術(shù)，很成熟新技術(shù)，不成熟干擾因素干擾極小容易受內(nèi)外源稀土離子的干擾測試項目

項目齊全缺少部分項目。如：貧血（葉酸，鐵蛋白，維生素B12）第十二頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)點1．靈敏度高：這是CLIA關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達10-16mol/L（RIA為10-12mol/L）。又如化學(xué)發(fā)光底物（如AMPPD）可檢測出的堿性磷酸酶的濃度比顯色底物要靈敏5х105倍。2．寬的線性動力學(xué)范圍：發(fā)光強度在4～6個量級之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（OD值）為2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然RIA也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用。3．光信號持續(xù)時間長：輝光型（glowtype）的CLIA產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。第十三頁，共29頁。化學(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)點4．分析方法簡便快速：絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式。

5．結(jié)果穩(wěn)定、誤差?。簶悠废抵苯幼约喊l(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。6．安全性好及使用期長：在上述優(yōu)點前提下，更免除了使用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)CLIA的危害性。有效期可長達1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰變，一般有效期只有一個月，而酶聯(lián)的底物貯存性差，都無法與化學(xué)發(fā)光相比，有效期長可以提高勞動效率，也利于推廣應(yīng)用。

第十四頁，共29頁?；拘阅軐φ毡淼谑屙?，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析種類1.直接化學(xué)發(fā)光A吖啶酯發(fā)光原理：納米磁珠分離后的吖啶酯標記的抗原抗體復(fù)合物，在含H2O2的強酸、強堿激發(fā)底物的作用下，快速發(fā)出可見光，通過光電倍增管進行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗原濃度成函數(shù)關(guān)系。特點：發(fā)光過程在5秒內(nèi)完成，激發(fā)發(fā)光程序簡單，測試速度快，但發(fā)光標記物吖啶酯在緩沖液中不穩(wěn)定，易水解，影響試劑穩(wěn)定性。代表儀器：拜耳公司、雅培。第十六頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析種類B異魯米諾發(fā)光原理：發(fā)光過程和原理與吖啶酯完全相同，但激發(fā)發(fā)光速度更快，在3秒內(nèi)完成整個過程，測試速度最快，而且克服了吖啶酯在緩沖液不穩(wěn)定、易水解的缺點。代表儀器：德國Byk–Sangtec公司C電化學(xué)發(fā)光原理：納米磁珠分離后的三聯(lián)吡啶釕標記的抗原抗體復(fù)合物，在三丙胺的作用下，發(fā)生氧化還原反應(yīng)，發(fā)出可見光，通過光電倍增管進行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗原濃度成函數(shù)關(guān)系。代表儀器：瑞士ROCHE公司。第十七頁，共29頁?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析種類2、酶促化學(xué)發(fā)光或持久發(fā)光原理：酶促化學(xué)發(fā)光一般是將堿性磷酸酶標記在抗體或抗原上，納米磁珠分離后的堿酶標記的抗原、抗體復(fù)合物在發(fā)光底物AMPPD作用下，持續(xù)發(fā)出可見光，通過光電倍增管讀取光信號。特點：激發(fā)發(fā)光時間長，測試速度慢，因為酶易受環(huán)境溫度的影響，試劑的穩(wěn)定性不如直接化學(xué)發(fā)光好。代表儀器：美國貝克曼公司的ACCESS，雅培公司的AXSYM。第十八頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用標本的采集：檢查內(nèi)分泌最好在月經(jīng)第2-5天，這一段時間稱為基礎(chǔ)性激素水平，第3天測定最好?？梢苑磻?yīng)卵巢的功能狀態(tài)。但對于月經(jīng)長期不來潮而且又急于了解檢查結(jié)果者，則隨時可以檢查。第十九頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用通過測定性激素水平來了解女性內(nèi)分泌功能和診斷與內(nèi)分泌失調(diào)相關(guān)的疾病.常用的性激素有卵泡生成激素(FSH)、黃體生成激素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睪酮(T)、催乳激素(PRL),基本滿足了臨床醫(yī)生對內(nèi)分泌失調(diào)與否的篩查和對生理功能的一般性了解。此外，還應(yīng)用于男女不育癥，鑒別診斷垂體或下丘腦的某些功能障礙。適應(yīng)癥：女性出現(xiàn)月經(jīng)周期紊亂、閉經(jīng)、生殖道異常出血、婦科相關(guān)腫瘤等等，需要常規(guī)檢查性激素。在男性，出現(xiàn)精液異常、陽痿、激素相關(guān)腫瘤等，需要檢查性激素。第二十頁，共29頁。性激素項目常識檢查基礎(chǔ)性激素前至少一個月不能用性激素類藥物（包括黃體酮、雌激素類），否則結(jié)果不可靠（治療后需要復(fù)查性激素除外）。月經(jīng)任何時間檢查性激素都可以，每個時段的正常值不同。但是診治不孕癥一定要了解基礎(chǔ)性激素水平，首先要選擇月經(jīng)第2～5天檢查，稱為基礎(chǔ)性激素水平，第3天測定最好。確定是來月經(jīng)第3天，檢查性激素5項即可，可以不查孕酮，孕酮應(yīng)該在黃體期檢查（月經(jīng)21天或排卵后7天）；但不能肯定陰道流血是否月經(jīng)，應(yīng)該檢查6項，以防止誤診（根據(jù)P數(shù)據(jù)可以大概判斷月經(jīng)周期時段）。第二十一頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用雌二醇（E2）正常月經(jīng)周期中，卵泡早期排卵前達第一個高峰，可達250.0～500.0pg/mL，排卵后迅速下降，黃體期形成第二個高峰，約125.0pg/mL，維持一段時間后，黃體萎縮時下降至早卵泡期水平,即來月經(jīng)第3天應(yīng)該為25.0～50.0pg/mL。1、基礎(chǔ)E2>45.0～80.0pg/mL，無論年齡與FSH如何，均提示生育力下降。2、基礎(chǔ)E2≥100.0pg/mL時，卵巢反應(yīng)更差，即使FSH﹤15IU/L，也無妊娠可能。3、監(jiān)測卵泡成熟和卵巢過度刺激綜合癥（OHSS）的指標①促卵泡排出：促超排卵治療時，當卵泡≥18mm，血E2達299.7pg/mL時，停用人絕經(jīng)期促性腺激素（HMG），當日或于末次注射HMG后24～36小時注射HCG10000IU。②E2﹤1000.0pg/mL，一般不會發(fā)生OHSS。③E2﹥2500.0pg/mL，為發(fā)生OHSS的高危因素，及時停用或減少HMG用量，并禁用HCG支持黃體功能，可避免或減少OHSS的發(fā)生。④E2﹥4032.7pg/mL時，近100%發(fā)生OHSS，并可迅速發(fā)展為重度OHSS。第二十二頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用促卵泡刺激素（FSH）和促黃體生成素（LH）基礎(chǔ)值為5～10mIU/mL正常月經(jīng)周期中，卵泡早期(月經(jīng)2~3天)血FSH、LH均維持在低水平，排卵前迅速升高，LH高達基礎(chǔ)值的3~8倍，可達160mIU/mL甚更高，而FSH只有基礎(chǔ)值的2倍左右，很少﹥30mIU/mL，排卵后FSH、LH迅速回到卵泡期水平。監(jiān)測卵泡早期的FSH、LH水平，可以初步判斷性腺軸功能。FSH在判斷卵巢潛能方面比LH更有價值。

1、卵巢功能衰竭：基礎(chǔ)FSH﹥40mIU/mL、LH升高或﹥40mIU/mL，為高促性腺激素（Gn）閉經(jīng)，即卵巢功能衰竭；如發(fā)生于40歲以前，稱為卵巢早衰（POF）。2、基礎(chǔ)FSH和LH均﹤5mIU/mL為低Gn閉經(jīng)，提示下丘腦或垂體功能減退，而二者的區(qū)別需借助促性腺激素釋放激素（GnRH）試驗。第二十三頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用3、基礎(chǔ)FSH﹥12mIU/mL，下周期復(fù)查，連續(xù)﹥12mIU/mL提示DOR。4、卵巢儲備功能不良（DOR）：基礎(chǔ)FSH/LH﹥2～3.6提示DOR（FSH可以在正常范圍），是卵巢功能不良的早期表現(xiàn)，往往提示患者對超排卵（COH）反應(yīng)不佳，應(yīng)及時調(diào)整COH方案和Gn的劑量以提高卵巢的反應(yīng)性，獲得理想的妊娠率。因為FSH/LH升高僅僅反映了DOR，而非受孕能力下降，一旦獲得排卵時期，仍能獲得理想的妊娠率。5、多囊卵巢綜合征（PCOS）：基礎(chǔ)LH/FSH﹥2～3，可作為診斷PCOS的主要指標(基礎(chǔ)LH水平﹥10mIU/mL即為升高，或LH維持正常水平，而基礎(chǔ)FSH相對低水平，就形成了LH與FSH比值升高)。6、檢查2次基礎(chǔ)FSH>20mIU/mL，可認為是卵巢早衰隱匿期，提示1年后可能閉經(jīng)。第二十四頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用泌乳素（PRL）PRL由腺垂體嗜酸性的PRL細胞合成和分泌。PRL分泌不穩(wěn)定，情緒、運動、性交、饑餓及進食均可影響其分泌狀態(tài)，而且隨月經(jīng)周期有較小的波動，具有與睡眠有關(guān)的節(jié)律性；入睡后短期內(nèi)PRL分泌增加，下午較上午升高。因此，根據(jù)這種節(jié)律分泌特點，應(yīng)在上午9~10時空腹抽血。PRL顯著升高者，一次檢查即可確定；PRL輕度升高者，應(yīng)進行第二次檢查，不可輕易診斷高泌乳素血癥（HPRL）而濫用溴隱亭治療。PRL≥25ng/ml或高于本單位檢驗正常值為HPRL。PRL﹥50ng/ml，約20%有泌乳素瘤。PRL﹥100ng/ml，約50%有泌乳素瘤，可選擇性做垂體CT或磁共振。PRL﹥200ng/ml，常存在微腺瘤，必須做垂體CT或磁共振。PRL降低：席漢綜合征、使用抗PRL藥物如溴隱亭、左旋多巴、VitB6等。第二十五頁，共29頁。性激素項目臨床應(yīng)用孕酮（P）基礎(chǔ)值一般<1.0ng/ml正常情況下，卵泡期血P一直在較低水平，平均0.19~0.60ng/mL，一般<3.14ng/mL；排卵前出現(xiàn)LH峰時，P分泌量開始增加，排卵后卵巢黃體產(chǎn)生大量P，血P濃度迅速上升；黃體成熟時(LH峰后的6~8天)，血P濃度達高峰，可達15.0~32.2ng/mL或更高，然后不斷下降，月經(jīng)前期達最低水平。整個黃體中外周血的P含量變化呈拋物線狀。1、判斷排卵：黃體中期（月經(jīng)周期28日的婦女為月經(jīng)第21日）P>5.03ng/mL提示排