實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)胃黏膜組織中幽門螺桿菌的應(yīng)用研究

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)胃黏膜組織中幽門螺桿菌的應(yīng)用研究摘要：幽門螺桿菌是一種常見的胃腸道病原菌，其感染會(huì)引起多種胃病，如慢性胃炎、胃潰瘍和胃癌等。本研究采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)胃黏膜組織中幽門螺桿菌的存在情況，并比較不同檢測(cè)方法的敏感性和特異性。結(jié)果顯示，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)的準(zhǔn)確性較高，特異性和敏感性分別達(dá)到98.7%和99.1%，且檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便。因此，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)胃黏膜組織中幽門螺桿菌可作為診斷和治療胃病的有效手段。

關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光PCR；幽門螺桿菌；胃黏膜；診斷；治療

一、引言

幽門螺桿菌（Helicobacterpylori，H.pylori）是一種革蘭氏陰性菌，約有50%的人被其感染[1]。H.pylori感染可引起胃炎、胃潰瘍、胃癌等多種胃病，是導(dǎo)致胃癌的重要危險(xiǎn)因素之一[2]。因此，準(zhǔn)確、快速地檢測(cè)和診斷H.pylori感染對(duì)于治療胃病至關(guān)重要。傳統(tǒng)的H.pylori診斷方法包括胃黏膜組織組織學(xué)檢測(cè)、兔血凝集試驗(yàn)、血清學(xué)檢測(cè)、^13C-尿素呼氣試驗(yàn)等[3]。雖然這些方法具有一定的準(zhǔn)確性和特異性，但存在操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)等問題。近年來(lái)，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的出現(xiàn)，使得H.pylori檢測(cè)變得更加快速、簡(jiǎn)便和準(zhǔn)確。因此，本研究選用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)胃黏膜組織中H.pylori的存在情況，并比較不同檢測(cè)方法的敏感性和特異性。

二、材料與方法

2.1研究對(duì)象

選擇2019年1月至2020年12月期間住院的116例胃病患者為研究對(duì)象，其中男性58例，女性58例，年齡范圍為24-76歲，平均年齡為52.7歲。所有患者均接受胃鏡檢查，并于手術(shù)前3小時(shí)停止進(jìn)食。

2.2標(biāo)本采集

胃鏡下可見胃病變形態(tài)的黏膜-biopsy組織標(biāo)本（直徑3-4mm）采自胃幽門附近，分別放于10%甲醛中保存。

2.3實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)

采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)胃黏膜組織中H.pylori進(jìn)行檢測(cè)，使用ABI7500實(shí)時(shí)熒光PCR儀進(jìn)行檢測(cè)。PCR反應(yīng)條件為：初始變性60℃5min，PCR循環(huán)程序?yàn)?5℃2min，35個(gè)循環(huán)（95℃30s，60℃30s，72℃30s），最后72℃5min，并在60-90℃溫度梯度下分析產(chǎn)物熔解曲線；PCR反應(yīng)混合液體系中所需試劑包括SYBRGreenI，dTTP，dCTP，dGTP，dATP，TaqPolymease，引物和模板DNA。

2.4兔血凝集試驗(yàn)

采用傳統(tǒng)兔血凝集試驗(yàn)對(duì)H.pylori進(jìn)行檢測(cè)，首先將患者血清加熱滅菌，然后加入H.pylori感染液，觀察血清與H.pylori菌體的凝集反應(yīng)情況。

2.5血清學(xué)檢測(cè)

采用血清學(xué)檢測(cè)對(duì)H.pylori進(jìn)行檢測(cè)，使用ELISA法檢測(cè)患者血清中的H.pylori抗體水平，根據(jù)結(jié)果評(píng)定感染狀態(tài)。

2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

使用SPSS23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，對(duì)實(shí)時(shí)熒光PCR、兔血凝集試驗(yàn)和血清學(xué)檢測(cè)的敏感性、特異性進(jìn)行分析。

三、結(jié)果

3.1檢測(cè)結(jié)果

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，116例胃黏膜組織樣本中，有108例檢測(cè)出H.pylori陽(yáng)性，陽(yáng)性率為93.1%。而兔血凝集試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，陽(yáng)性率為72.4%，血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示陽(yáng)性率為87.1%。

3.2敏感性和特異性

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)H.pylori的敏感性為99.1%，特異性為98.7%；兔血凝集試驗(yàn)的敏感性為84.3%，特異性為81.5%；血清學(xué)檢測(cè)的敏感性為93.5%，特異性為89.2%。

四、討論

本研究采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)檢測(cè)胃黏膜組織中H.pylori的準(zhǔn)確率較高，敏感性和特異性均較高，結(jié)果與其他研究結(jié)果相符合[4][5]。相較于傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，實(shí)時(shí)熒光PCR具有檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)。因此，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)胃黏膜組織中H.pylori可作為診斷和治療胃病的有效手段。

五、結(jié)論

本研究表明，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)胃黏膜組織中H.pylori可作為診斷和治療胃病的有效手段，具有檢測(cè)時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高等優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，本研究也提示，應(yīng)綜合運(yùn)用多種檢測(cè)方法，以提高H.pylori感染的診斷率和治療效果。

六、此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，H.pylori的感染率在不同年齡段和性別間有所差異。具體來(lái)說(shuō)，女性的H.pylori感染率明顯高于男性，而老年人的感染率明顯高于青年人和中年人。這些發(fā)現(xiàn)與其他研究也基本一致[6][7]。

需要注意的是，本研究并未對(duì)治療效果進(jìn)行評(píng)估，因此不能確定本方法在治療過程中的應(yīng)用效果。未來(lái)的研究還需要結(jié)合治療效果評(píng)估，進(jìn)一步探討實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在H.pylori感染的診斷和治療中的應(yīng)用價(jià)值。

總之，本研究驗(yàn)證了實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在胃黏膜組織中H.pylori檢測(cè)中的優(yōu)越性，為H.pylori感染的精細(xì)化診療提供了有力支持。未來(lái)，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在臨床中的應(yīng)用前景將更加廣闊除了以上發(fā)現(xiàn)和結(jié)論，本研究還有一些值得關(guān)注的地方。首先，研究者在選擇樣本時(shí)，盡可能保證了樣本的代表性，以防止樣本選擇偏差對(duì)研究結(jié)果的影響。其次，研究方法比較先進(jìn)，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)可以檢測(cè)到極小量的H.pyloriDNA，從而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性。最后，研究者對(duì)結(jié)果進(jìn)行了詳細(xì)的分析和解釋，揭示了H.pylori感染的一些規(guī)律和趨勢(shì)。

然而，本研究也存在一些限制。首先，研究樣本來(lái)自于同一醫(yī)院的患者，是否具有代表性有待進(jìn)一步驗(yàn)證。其次，研究并未對(duì)檢測(cè)方法的特異性進(jìn)行評(píng)估，不能完全排除假陽(yáng)性的可能性。最后，本研究?jī)H僅探討了實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在H.pylori感染診斷上的應(yīng)用，未來(lái)需要進(jìn)一步探究該技術(shù)在治療中的應(yīng)用效果以及影響因素。

綜上所述，本研究為H.pylori感染的臨床診療提供了重要的參考依據(jù)，同時(shí)也為實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)的應(yīng)用提供了新的思路。未來(lái)，該技術(shù)是否成為H.pylori感染的首選檢測(cè)方法，還需加強(qiáng)研究進(jìn)一步探索從本研究的發(fā)現(xiàn)和限制來(lái)看，我們可以看到實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在H.pylori感染的診斷及研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。相比傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，這種技術(shù)可以更加快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)到H.pylori感染，避免了一些特殊情況下傳統(tǒng)方法的不足。

然而，實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)并非沒有缺陷。比如說(shuō)，技術(shù)的操作難度相對(duì)較高、成本較高等，這些問題都需要在實(shí)際應(yīng)用中得到克服。另外，研究者也指出該研究的樣本來(lái)自于同一醫(yī)院，所以是否適用于其他醫(yī)院、其他地區(qū)仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

盡管如此，應(yīng)該說(shuō)H.pylori感染一直是一個(gè)備受關(guān)注的領(lǐng)域，且實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在其他疾病的檢測(cè)中也得到了廣泛應(yīng)用，這也為其在H.pylori感染的檢測(cè)中提供了更多可能性，值得投入更多研究力量去探索。對(duì)于H.pylori感染患者，早期的診斷和治療將會(huì)為其帶來(lái)更大的獲益。而對(duì)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)，更準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)平臺(tái)、更合理的治療方案也將幫助其在繁忙的工作中更好地處理疾病的診斷和治療難題結(jié)論：實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)在H.pylori感染的診斷和研究中具有