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文檔簡介

實(shí)驗(yàn)七豬偽狂犬病PCR診斷實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解PCR反應(yīng)的原理、方法及操作步驟；2、掌握豬偽狂犬病毒PCR檢測的方法；實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、講述PCR反應(yīng)的原理、方法及操作步驟，2、豬偽狂犬病毒PCR檢測。什么是PCR？聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction，簡稱PCR）又稱無細(xì)胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增技術(shù)。一、PCR反應(yīng)的原理、方法及操作步驟PCR原理PCR技術(shù)在模板DNA、dNTP、Mg2+、合適Buffer等條件下，用耐熱的Taq聚合酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引物，經(jīng)過DNA變性、引物與模板結(jié)合（復(fù)性）和延伸3個(gè)步驟的反復(fù)循環(huán)（2530次）過程，使目的DNA呈指數(shù)擴(kuò)增。反應(yīng)程序變性：93-94℃2min變性：93-94℃30s復(fù)性：55-65℃30s延伸：72℃30s延伸：72℃2min35個(gè)循環(huán)PCR原理SampledenaturatationPrimerannealingPrimerextension標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系10×擴(kuò)增緩沖液10ul

4種dNTP混合物各200umol/L

引物10～100pmol

模板DNA0.1～2ug

TaqDNA聚合酶2.5u

Mg2+1.5mmol/L

加雙或三蒸水至100ul酶及其濃度目前有兩種TaqDNA聚合酶供應(yīng)天然酶：從棲熱水生桿菌中提純基因工程酶：大腸菌合成一個(gè)典型的PCR反應(yīng)約需酶量2.5U（指總反應(yīng)體積為100ul時(shí)）濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少引物在線設(shè)計(jì)網(wǎng)址：primer/primer3_二豬偽狂犬病毒感染PCR檢測-試劑盒使用方法作業(yè)1、

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