探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化第1頁/共31頁培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究：第2頁/共31頁基礎(chǔ)回扣1、酵母菌酵母菌是單細(xì)胞真核生物。生長周期短，增殖速度快，還可以用酵母菌作為實(shí)驗(yàn)材料研究（探究酵母菌的呼吸方式，判斷細(xì)胞的死活探究膜的透性）第3頁/共31頁2、種群數(shù)量的變化

種群數(shù)量的變化包括增長、波動、穩(wěn)定、下降等“S”型曲線有一個K值，即環(huán)境容納量。

種群數(shù)量的增長也受到許多環(huán)境因素（如溫度、培養(yǎng)液的pH、培養(yǎng)液的養(yǎng)分種類和濃度、代謝產(chǎn)物等）的影響。第4頁/共31頁探究過程1．提出問題：2．作出假設(shè)：3．設(shè)計實(shí)驗(yàn)：4．進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：5．分析結(jié)果和表達(dá)交流：6．得出結(jié)論：培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？酵母菌在開始一段時間呈“J”型增長，隨著時間的推移，由于資源和空間有限，呈“S”型增長。連續(xù)培養(yǎng)5天，每天用顯微鏡和血球計數(shù)板計數(shù)出酵母菌種群密度各小組匯報實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合前4天的結(jié)果，畫出酵母種群增長的曲線圖并進(jìn)行分析。酵母菌在開始一段時間呈“J”型增長，但隨著時間的推移，由于資源和空間有限，將呈“S”型增長，并最終將全部死亡。第5頁/共31頁3．設(shè)計實(shí)驗(yàn)：①將10mL無菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液加入試管中；②將酵母菌接種入試管中的培養(yǎng)液中混合均勻；③將試管在28℃條件下連續(xù)培養(yǎng)5d；④每天取樣計數(shù)酵母菌數(shù)量；⑤分析結(jié)果，得出結(jié)論。是否設(shè)置對照組和多組重復(fù)實(shí)驗(yàn)？如何取樣計數(shù)？記錄表怎樣設(shè)計？計數(shù)時有哪些注意事項(xiàng)？第6頁/共31頁計數(shù)室計數(shù)室（中間大方格）的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為______mm3，合_________mL。1mm0.11×10-4血球計數(shù)板:一種專門計數(shù)較大單細(xì)胞微生物的儀器第7頁/共31頁計數(shù)室計數(shù)室分為25中格（雙線邊）每一中格又分為16小格計數(shù)室是由___________個小格組成25×16=400第8頁/共31頁如何計數(shù)？五點(diǎn)取樣法樣方法每mL培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量==A(平均每個中格酵母細(xì)胞數(shù))×25×104×稀釋倍數(shù)A1A2A5A3A4第9頁/共31頁第1天第10頁/共31頁第4

天第6天第11頁/共31頁第7

天死亡第12頁/共31頁酵母菌數(shù)量變化記錄表第13頁/共31頁計數(shù)時有哪些注意事項(xiàng)？①從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾次；如果酵母菌濃度過大，應(yīng)先稀釋。②對于壓在中格界線上的酵母菌，一般只取相鄰兩邊及夾角計數(shù)；③對于已經(jīng)出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算；已死亡的酵母菌不計數(shù)※。④每個樣品一般計數(shù)三次，取其平均值。第14頁/共31頁培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化第15頁/共31頁第16頁/共31頁死亡第17頁/共31頁在計數(shù)前，還應(yīng)有哪些步驟？需注意些什么？培養(yǎng)液配制滅菌接種培養(yǎng)無菌操作培養(yǎng)條件第18頁/共31頁試管編號培養(yǎng)液/mL無菌水/mL酵母菌母液/mL溫度（℃）A10—0.128B10—0.15C—100.128

針對“培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化”，有人提出了新的問題，某同學(xué)按下表完成了有關(guān)實(shí)驗(yàn)。第19頁/共31頁溫度、營養(yǎng)物質(zhì)對酵母菌生長的影響第20頁/共31頁試管編號培養(yǎng)液/mL無菌水/mL酵母菌母液/mL溫度（℃）A10—0.128B10—0.15C—100.128第21頁/共31頁以計數(shù)酵母菌為例

(1)用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個數(shù).

(2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù),以每小方格內(nèi)含有4-5個酵母細(xì)胞為宜,一般稀釋10倍即可.

(3)將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數(shù)室上加蓋專用的厚玻片.

(4)將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內(nèi).

血球計數(shù)板的使用第22頁/共31頁第23頁/共31頁(5)計數(shù)時,如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數(shù).如果規(guī)格為25格×16格的計數(shù)板,除了取其4個對角方位外,還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù).

(6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌,一般只計數(shù)大方格的上方和左方線上的酵母細(xì)胞(7)對每個樣品計數(shù)三次,取其平均值,按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù).第24頁/共31頁3.計算公式

(1)16格×25格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細(xì)胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/100×400×104×稀釋倍數(shù)

(2)25格x16格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細(xì)胞數(shù)/ml=80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)

第25頁/共31頁怎樣進(jìn)行酵母菌的計數(shù)？

對一支試管中的培養(yǎng)液(可定為10ml)中的酵母菌逐個計數(shù)是非常困難的，可以采用抽樣檢測的方法：先將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入，多余培養(yǎng)液用濾紙吸去，稍待片刻，待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計數(shù)室底部，將計數(shù)板放在載物臺的中央，計數(shù)一個小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)量，再以此為根據(jù)，估算計算中的酵母菌總數(shù)，蓋玻片下，培養(yǎng)液厚度為0.1mm，可算出10ml培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)的公式：2.5×104x(x為小方格內(nèi)酵母菌數(shù))

第26頁/共31頁從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，建議你將試管輕輕振蕩幾次。這是為什么？本探究需要設(shè)置對照嗎？如果需要請討論對照組應(yīng)怎樣設(shè)計和操作；如果不需要，請說明理由。需要做重復(fù)實(shí)驗(yàn)嗎？

目的是使培養(yǎng)液中的酵母菌均勻分布，以保證估算的準(zhǔn)確性，減少誤差。

不需要，本實(shí)驗(yàn)旨在探究培養(yǎng)液中酵母菌在一定條件下的種群數(shù)量變化，只要分組實(shí)驗(yàn)，獲得平均數(shù)值即可。

不用重復(fù)，只要分組實(shí)驗(yàn)獲得平均值即可。第27頁/共31頁5、怎樣記錄結(jié)果？記錄表怎樣設(shè)計？如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以計數(shù)，應(yīng)采取怎樣的措施？第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第1組第2組第3組------第n組平均值

搖勻試管取1mL酵母菌培養(yǎng)液稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以n×2.5×104，即為10mL酵母菌液中酵母菌個數(shù)。只計數(shù)相鄰兩邊及其頂角的酵母菌數(shù)。7對于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)當(dāng)怎樣計數(shù)？第28頁/共31頁

設(shè)計實(shí)驗(yàn)：A組為實(shí)驗(yàn)組，裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃。B組裝培養(yǎng)液10mL，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度5℃，與A組形成溫度條件對照。C組不裝培養(yǎng)液，只裝無菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度28℃，與A組形成營養(yǎng)條件對照。第29頁/共31頁

計數(shù)計數(shù)：首先取樣，每天取樣時間大體一致，并要遵守?zé)o菌操作規(guī)范。每次取樣前要試管振蕩搖勻，正確地使用1mL刻度吸管將lmL酵母菌培養(yǎng)液移入1支干凈的試管里，然后用滴管吸取1滴培養(yǎng)