哺乳動(dòng)物總RNA提取及電泳課件_第1頁(yè)
哺乳動(dòng)物總RNA提取及電泳課件_第2頁(yè)
哺乳動(dòng)物總RNA提取及電泳課件_第3頁(yè)
哺乳動(dòng)物總RNA提取及電泳課件_第4頁(yè)
哺乳動(dòng)物總RNA提取及電泳課件_第5頁(yè)
已閱讀5頁(yè)，還剩6頁(yè)未讀， 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

第四課哺乳動(dòng)物總RNA提取及RNA瓊脂糖凝膠電泳第一部分哺乳動(dòng)物總RNA提取實(shí)驗(yàn)原理異硫氰酸胍可將哺乳動(dòng)物組織勻漿中蛋白質(zhì)變性，十二烷基肌氨酸鈉可使細(xì)胞裂解，并釋放RNA，同時(shí)保持RAN的完整。苯酚也是蛋白質(zhì)變性劑，加入氯仿后離心，溶液分為水相和有機(jī)相。酸性條件下DNA同蛋白質(zhì)一起變性被離心下來(lái)，絕大部分RNA則保留于水相。水相的RNA可經(jīng)異丙醇沉淀。實(shí)驗(yàn)步驟取3克組織，加30ml裂解液，勻漿。吸取500ul勻漿液于1.5ml微量離心管中.加50ul2M醋酸納（pH4.0），500ul水飽和苯酚，100ul氯仿，震蕩1分鐘。冰上放置15分鐘。13000rpm，4℃，5分鐘。將上清轉(zhuǎn)移至1.5ml無(wú)酶微量離心管中，加等體積的苯酚/氯仿（1:1），震蕩1分鐘。13000rpm，4℃，5分鐘。將上清轉(zhuǎn)移至1.5ml無(wú)酶微量離心管中，加等體積的氯仿，震蕩1分鐘。13000rpm，4℃，5分鐘。將上清轉(zhuǎn)移至1.5ml無(wú)酶微量離心管中，加等體積的異丙醇。0℃放置20分鐘。13000rpm，4℃，10分鐘。去上清。用1ml75%乙醇洗管壁。盡量去處乙醇。室溫干燥。將RNA沉淀溶于10ul經(jīng)DEPC處理的去離子水中。-20℃保存。第二部分RNA瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)原理常用的變性劑甲醛或戊二醛可使蛋白質(zhì)變性，也可破壞RNA分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。因此在含有變性劑的瓊脂糖凝膠中電泳，可防止RNA被降解，同時(shí)可以避免RNA高級(jí)結(jié)構(gòu)對(duì)電泳結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)試劑瓊脂糖10XMOPS（嗎啉代丙烷磺酸）(0.2MMOPS,50mMNaAc,10mMEDTA,Ph7.0)37%甲醛RNA上樣緩沖液（50%甲酰胺，1XMOPS，6%甲醛，7%甘油，0.3%溴酚藍(lán)）思考題如何處理玻璃器皿及金屬器械，使之無(wú)RNA酶？如何配制DEPC水？如何配制無(wú)RNA酶試劑？在提取RNA的實(shí)驗(yàn)中，你認(rèn)為操作上應(yīng)注意那些地方能有助于防止RNA降解？在提取RNA

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽，若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間，僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理，對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請(qǐng)與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論