動物細胞融合和單克隆抗體課件

專題2細胞工程2.2.2動物細胞融合和單克隆抗體學習目標:1.了解動物細胞融合的原理、過程和意義2.舉例說出單克隆抗體制備的原理和應(yīng)用重點：單克隆抗體的制備過程難點：單克隆抗體的制備過程2002年12月30日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質(zhì)體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產(chǎn)房”—電融合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場“太空婚禮”實質(zhì)是哪兩項細胞工程技術(shù)？植物體細胞雜交技術(shù)動物細胞融合技術(shù)１動物細胞融合過程思考：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？2.概念：3.結(jié)果：雜交細胞4.原理：細胞膜的流動性6.意義：突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體7.應(yīng)用：5.誘導方法：物理法;化學法和生物法活動1：請同學們快速閱讀課本P52

動物細胞融合也稱________。是指_________動物細胞結(jié)合成一個細胞的過程。形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的

____細胞，稱為________。兩個多個或單核細胞雜交

處理方法誘導手段結(jié)果原理活動２:閱讀P５３找一找：科學家發(fā)現(xiàn)B淋巴細胞有什么特點？并討論：怎樣才能獲得大量的單一抗體？體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細胞不能無限增殖問題１：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的問題２：有什么方法能使B細胞產(chǎn)生抗體的能力和無限增殖能力同時具備科學家發(fā)現(xiàn)：１.體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多達百萬種以上２.每個B細胞只分泌一種特異性的抗體單克隆抗體克隆一個B淋巴細胞

細胞群抗體遺憾：癌細胞動物細胞融合一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖雜交細胞動物細胞培養(yǎng)１.實驗原理：動物細胞融合單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體1975年，米爾斯坦和柯勒1984年，諾貝爾生理學或醫(yī)學獎雜交瘤細胞模擬單克隆抗體的制備過程4人一組使用一套細胞模型，完成模擬制備流程。小組探究活動注射羊紅細胞２.單克隆抗體的制備過程．．．．．．抗羊紅細胞的單克隆抗體活動３：第一步：從一只小鼠體內(nèi)提取T淋巴細胞，然后與骨髓瘤細胞誘導融合。第二步：再用普通培養(yǎng)基進行篩選，在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死去。第三步：對上述經(jīng)選擇性培養(yǎng)的雜交瘤細胞直接在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，這樣從細胞培養(yǎng)液中就可以提出破傷風桿菌單克隆抗體。實驗評價已注入過滅活破傷風桿菌的小鼠B淋巴細胞選擇培養(yǎng)基必須經(jīng)過克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢驗陽性1.下面是某同學根據(jù)單克隆抗體技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案。指出不足之處。小結(jié)[變式練習]２.如圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：⑴若A、B是植物細胞，在細胞融合之前用

處理，除去了

；A、B到細胞C的過程中，常用的化學方法是用

誘導．

⑵若A、B是植物細胞，則形成的D細胞還要應(yīng)用

技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。⑶若A、B是動物細胞，一般用

，使其分散開來，A、B到C的過程中，常用的不同于植物細胞的誘導因素是

，所形成的D稱為

。⑷若該過程是制備單克隆抗體，A為B淋巴細胞，在獲得此細胞之前，小鼠已被注射了

。在A、B到C的過程中，所形成的C有

種，用來培養(yǎng)的D細胞應(yīng)該是

。纖維素酶和果膠酶細胞壁聚乙二醇植物組織培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶滅活的病毒雜交細胞特定抗原３雜交瘤細胞小結(jié)B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群注射到小鼠腹腔AC

[自我評論]

3、下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的實驗方案。2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？3、圖中B為________過程，特有的誘導方法_________。該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是

４、C過程指細胞培養(yǎng)此細胞的分裂方式

___________。制備單克隆抗體動物細胞融合滅活的病毒雙親細胞產(chǎn)生專一抗體迅速大量增殖不能沒有將抗原注小鼠體內(nèi),無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞有絲分裂小結(jié)單克隆抗體篩選二雜交細胞等雜交瘤細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細胞

誘導融合分泌特異抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞群提取已免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強靈敏度高可大量制備課堂注射抗原課后作業(yè)：１.除通過雜交瘤細胞產(chǎn)生單克隆抗體外，還有什么方法獲得化學性質(zhì)單一的單克隆抗體？２.單克隆抗體有什么應(yīng)用？感謝各位蒞臨指正！下課啦結(jié)合同位素的單抗-----生物導彈單抗放射性同位素練習：３、(2006，廣雅中學考題)研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（）A．利用單克隆抗體特異性地對抗癌細胞B．以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細胞C．抗癌物質(zhì)在克隆細胞中大量合成D．單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細胞結(jié)合４.根據(jù)下圖，回答相關(guān)問題(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設(shè)僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。漿

抗原

動物細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇3既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生專一抗體

雜交瘤細胞4、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1）_______________技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（4）動物細胞融合除了采用植物細胞原生質(zhì)體融合常用的誘導劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的_______________特點，又具備淋巴細胞的_______________特點。（6）淋巴細胞是由動物體_________中的______________細胞分化、發(fā)育而來。動物細胞培養(yǎng)選擇特異性強,靈敏度高滅活的病毒迅速大量增殖分泌專一抗體骨髓造血干細胞練習：3、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A、經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B、不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞C、經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D、不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞雜交細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體（經(jīng)過免疫的）B淋巴細胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合多種雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)三、單克隆抗體的制備過程第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。特異性強，靈敏度高瘤-瘤細胞B-瘤細胞B-B細胞動物細胞融合第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）。動物細胞培養(yǎng)單克隆抗體制備過程單克隆抗體的制備

看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

檢特別提醒：1.①B淋巴細胞的特點:有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能大量增殖②骨髓瘤細胞的特點：能在體外大量增殖，但不能產(chǎn)生抗體③雜交瘤細胞的特點：既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體。2.篩選的目的：第1次篩選目的：得到雜交瘤細胞（多種）第2次篩選目的：在雜交瘤細胞中篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。3.技術(shù)手段：動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)4.培養(yǎng)雜交瘤細胞的方式：體外培養(yǎng)；注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖5.單克隆抗體的特點：特異性強，靈敏度高，可大量制備。學科網(wǎng)已成功的動物細胞融合實例有很多，如鼠—雞、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—雞、人—蛙等上百種融合細胞。甚至已成功完成了酵母菌—雞、人—胡蘿卜等細胞的融合。想了解更多信息，可通過網(wǎng)絡(luò)、電視、雜志等途徑關(guān)注動物細胞融合和單克隆抗體的最新信息。生物種間雜交想像圖陽性孔方法——抗原-抗體雜交法項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理用_____________和__________去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合用____________使細胞分散后誘導細胞融合誘導融合的方法

雜種植株（或雜交細胞）特點雜種植株含有兩種生物的遺傳物質(zhì)雜交細胞具有意義和用途克服