病毒感染和實驗診療專家講座

病毒感染及其試驗診療華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院從屬協(xié)和醫(yī)院盧銀平1病毒感染和實驗診療專家講座第1頁2病毒感染和實驗診療專家講座第2頁3病毒感染和實驗診療專家講座第3頁據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計，中國自1985年出現(xiàn)第一例艾滋病病人以來，截至年10月底，累計匯報艾滋病病毒感染者和病人319877例，其中艾滋病病人102323例；匯報死亡49845例。

4病毒感染和實驗診療專家講座第4頁5病毒感染和實驗診療專家講座第5頁6病毒感染和實驗診療專家講座第6頁病毒基本性狀和分類7病毒感染和實驗診療專家講座第7頁病毒大小與形態(tài)

一、病毒大小與測量單位

極其微小，測量單位為納米（nanometer，nm），20nm-300nm觀察及測量：電鏡、濾過、超速離心、X線衍射二、病毒形態(tài)

球形，磚形，桿形，彈形，長絲狀，蝌蚪形8病毒感染和實驗診療專家講座第8頁9病毒感染和實驗診療專家講座第9頁狂犬病毒(100-300x75nm)乳頭瘤病毒(70-90nm)10病毒感染和實驗診療專家講座第10頁輪狀病毒(60-80nm)11病毒感染和實驗診療專家講座第11頁乙型肝炎病毒(42nm)流感病毒(80-120nm)12病毒感染和實驗診療專家講座第12頁病毒結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成

一、病毒結(jié)構(gòu)核酸，衣殼，包膜

二、病毒化學(xué)組成

核酸，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)和糖類

13病毒感染和實驗診療專家講座第13頁核酸（DNA/RNA)蛋白質(zhì)保護核酸結(jié)構(gòu)蛋白：參加感染含有抗原性非結(jié)構(gòu)蛋白：病毒酶類（病毒復(fù)制，抑制宿主對應(yīng)功效）脂類和糖：主要存在于包膜中維護病毒體結(jié)構(gòu)完整性與宿主細(xì)胞有親和及融合性能表現(xiàn)病毒種、型抗原性與病毒引發(fā)機體中毒癥狀相關(guān)14病毒感染和實驗診療專家講座第14頁病毒增殖吸附，穿入，脫殼，生物合成，組裝成熟釋放

一、病毒復(fù)制周期15病毒感染和實驗診療專家講座第15頁16病毒感染和實驗診療專家講座第16頁17病毒感染和實驗診療專家講座第17頁病毒受體(viralreceptor,VP)是指存在于細(xì)胞表面，能被病毒特異識別并與之結(jié)合，促進病毒感染一組分子復(fù)合物。受體是病毒侵入門戶，它決定了病毒宿主范圍，組織及細(xì)胞嗜性。

18病毒感染和實驗診療專家講座第18頁二、病毒異常增殖

缺點病毒:是指因病毒基因組不完整或者因基因某一點改變而不能進行正常增殖病毒。缺點病毒不能復(fù)制，但卻能干擾同種成熟病毒體進入易感細(xì)胞，故又稱為缺點干擾顆粒(defectiveinterferingparticles）

頓挫感染:病毒進入宿主細(xì)胞，若細(xì)胞缺乏病毒復(fù)制所需酶、能量和原料等，則病毒不能合成本身成份；或雖合成部分或全部成份，不能裝配和釋放，稱為頓挫感染。組成頓挫感染細(xì)胞被稱為非容納性細(xì)(non-permissivecells)。19病毒感染和實驗診療專家講座第19頁病毒遺傳與變異

一、病毒性狀變異

毒力變異抗原性變異空斑變異

對理化原因抵抗力或依賴性變異二、病毒變異機制基因突變基因重組20病毒感染和實驗診療專家講座第20頁遺傳物質(zhì)變異類型1.基因突變突變株—指病毒基因堿基序列改變，造成表型性狀改變毒株條件致死性突變株（conditional-lethalmutant）

溫度敏感突變株（temperaturesensitivemutant,ts株）為條件致死性突變株中應(yīng)用最廣泛缺點型干擾突變株（defectiveinhibitionmutant，DIM）宿主范圍突變株（hostrangemutant,hr突變株）耐藥突變株（drug-resistantmutant）21病毒感染和實驗診療專家講座第21頁2.基因重組與重配兩種不一樣病毒感染同一細(xì)胞時，可發(fā)生基因交換而形成新性狀重組體。

基因重組（recombination）——不分節(jié)段基因組病毒基因重配（reassortment）——分節(jié)段基因組病毒類型：活病毒之間：N0H0+

N1H1——N0H1活病毒與滅活病毒之間（交叉復(fù)活）滅活病毒之間（多重復(fù)活）22病毒感染和實驗診療專家講座第22頁3.基因整合（geneintegration）病毒基因組（DNA病毒與逆轉(zhuǎn)錄病毒）與細(xì)胞細(xì)胞基因組重組過程。整合可引發(fā)宿主細(xì)胞基因改變→細(xì)胞遺傳性改變→細(xì)胞轉(zhuǎn)化→個別可發(fā)生細(xì)胞惡化→腫瘤23病毒感染和實驗診療專家講座第23頁24病毒感染和實驗診療專家講座第24頁病毒對理化原因抵抗力

一、物理原因溫度，電離輻射，紫外線二、化學(xué)原因氧化劑，脂溶劑，酚，甲醛，甘油,

酸堿等25病毒感染和實驗診療專家講座第25頁病毒分類與命名標(biāo)準(zhǔn)1.病毒體特征

顆粒大小，顆粒形狀，有沒有包膜，衣殼對稱性和結(jié)構(gòu)2.基因組特征

核酸類型（DNA或RNA），核酸鏈數(shù)（單鏈/雙鏈），核酸極性（正鏈/負(fù)鏈），核酸片段數(shù)3.蛋白質(zhì)特征

蛋白質(zhì)數(shù)目，大小，蛋白質(zhì)功效（轉(zhuǎn)錄酶，血凝素，蛋白融合）4.復(fù)制特征

核酸復(fù)制類型，轉(zhuǎn)錄特征5.理化特征

pH穩(wěn)定性，離子強度，抵抗力

6.生物學(xué)特征

血清學(xué)關(guān)系，宿主范圍，致病性，組織嗜性，傳輸路徑，媒介關(guān)系，地理分布26病毒感染和實驗診療專家講座第26頁病毒感染與免疫

27病毒感染和實驗診療專家講座第27頁1.殺細(xì)胞性感染：病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制完成，短時間內(nèi)釋放大量子代病毒即造成細(xì)胞死亡，多見于無包膜殺傷性強病毒。

抑制宿主細(xì)胞代謝（阻斷細(xì)胞核酸和蛋白質(zhì)合成）一些衣殼蛋白含有直接殺傷宿主細(xì)胞作用細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）對細(xì)胞影響28病毒感染和實驗診療專家講座第28頁ABL929cells+EMCV29病毒感染和實驗診療專家講座第29頁

2.

穩(wěn)定狀態(tài)感染：

一些病毒進入細(xì)胞后能夠復(fù)制，卻不引發(fā)細(xì)胞裂解、死亡，在相當(dāng)長一段時間內(nèi)細(xì)胞和病毒并存，同時增殖，細(xì)胞病變遲緩且輕。多見于有包膜病毒，出芽方式釋放子代。有些病毒蛋白有融膜特征，細(xì)胞膜融合使病毒擴散，結(jié)果形成多核巨細(xì)胞。細(xì)胞膜成份改變，嵌合有病毒特異性抗原，被機體抗體或CTL所識別并去除。對細(xì)胞影響30病毒感染和實驗診療專家講座第30頁細(xì)胞融合31病毒感染和實驗診療專家講座第31頁

3.包涵體形成概念：一些受病毒感染細(xì)胞內(nèi)，用普通光學(xué)顯微鏡可看到與正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和著色不一樣圓形或橢圓形斑塊。位置意義胞質(zhì)內(nèi)（痘病毒）胞核內(nèi)（皰疹病毒）二者都有（麻疹病毒）含有診療意義，如內(nèi)基小體32病毒感染和實驗診療專家講座第32頁麻疹病毒包涵體33病毒感染和實驗診療專家講座第33頁4.細(xì)胞凋亡：病毒感染細(xì)胞后，直接由病毒本身作用或間接地作為誘導(dǎo)因子引發(fā)細(xì)胞凋亡。34病毒感染和實驗診療專家講座第34頁細(xì)胞凋亡后基因組DNA梯狀電泳條帶35病毒感染和實驗診療專家講座第35頁5.基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化：少數(shù)病毒感染細(xì)胞后病毒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，促進細(xì)胞DNA合成，促進細(xì)胞增生或細(xì)胞轉(zhuǎn)化——即細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變，增殖加緊，失去細(xì)胞間接觸抑制等。是病毒致腫瘤原因之一36病毒感染和實驗診療專家講座第36頁病毒致腫瘤原因?qū)m頸癌肝癌鼻咽癌惡性淋巴瘤白血病37病毒感染和實驗診療專家講座第37頁（二）病毒感染免疫病理作用抗體介導(dǎo)免疫病理作用：Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)細(xì)胞介導(dǎo)免疫病理作用：CTL、本身抗原免疫抑制作用：HIV、CMV38病毒感染和實驗診療專家講座第38頁二、病毒感染傳輸方式39病毒感染和實驗診療專家講座第39頁㈠傳輸方式水平傳輸病毒在人群不一樣個體間傳輸，也包含從動物到動物再到人傳輸垂直傳輸

經(jīng)過胎盤或產(chǎn)道，病毒由宿主親代傳給宿主子代方式——HBV、CMV、HIV、風(fēng)疹病毒（其它微生物種少見）。40病毒感染和實驗診療專家講座第40頁㈡?zhèn)鬏斅窂胶粑老绖?chuàng)傷感染接觸感染血液傳輸性傳輸節(jié)肢動物媒介…41病毒感染和實驗診療專家講座第41頁三、臨床感染類型

隱性感染顯性感染急性感染連續(xù)性感染慢性感染潛伏性感染慢發(fā)病毒感染急性感染遲發(fā)并發(fā)癥42病毒感染和實驗診療專家講座第42頁隱性感染

病毒感染后不引發(fā)臨床癥狀顯性感染病毒感染后引發(fā)臨床癥狀43病毒感染和實驗診療專家講座第43頁病毒在體內(nèi)連續(xù)數(shù)月至多年，甚至數(shù)十年，且經(jīng)常重復(fù)間斷地向外排毒，可出現(xiàn)癥狀，引發(fā)慢性進行性疾病，也可不出現(xiàn)癥狀而長久帶病毒。攜帶者為主要傳染源連續(xù)性感染44病毒感染和實驗診療專家講座第44頁病毒感染后有很長潛伏期，經(jīng)多年，數(shù)十年后，可發(fā)生一些進行性疾病，最終死亡。（HIV）

病程長，病毒可檢出（HBV）潛伏感染：病毒基因存在于一定組織或細(xì)胞中并不產(chǎn)生感染性病毒體，但在一定條件下，病毒被激活而進入復(fù)制狀態(tài)，引發(fā)臨床癥狀（皰疹病毒）慢發(fā)病毒感染

持續(xù)性感染

慢性感染

潛伏感染急性病毒感染遲發(fā)并發(fā)癥急性感染后1年或多年，發(fā)生致死性病毒病，如亞急性硬化性全腦炎（SSPE）。45病毒感染和實驗診療專家講座第45頁病毒感染試驗診療

46病毒感染和實驗診療專家講座第46頁兒童腮腺炎病毒感染47病毒感染和實驗診療專家講座第47頁HSV-I感染引發(fā)唇皰疹48病毒感染和實驗診療專家講座第48頁乳頭瘤病毒感染引發(fā)各種癥狀49病毒感染和實驗診療專家講座第49頁病毒感染診療意義病毒診療是治療前提用于判斷預(yù)后用于疾病預(yù)防用于疾病監(jiān)測指導(dǎo)用藥50病毒感染和實驗診療專家講座第50頁病毒學(xué)試驗室診療四個方面

檢測病毒體極其所致宿主細(xì)胞病理改變（直接檢測和分離判定）

檢測病毒蛋白抗原和核酸

檢測抗體

其它非特異性物質(zhì)51病毒感染和實驗診療專家講座第51頁一、標(biāo)本采集與送檢標(biāo)本采集時間選擇發(fā)病早期

標(biāo)本儲存和運輸

低溫、含抗生素培養(yǎng)基標(biāo)本采集部位及種類選擇血液、腦脊液、宮腔拭子、糞便、含漱液、咽喉拭子、尿液或尿道拭子、尸檢標(biāo)本52病毒感染和實驗診療專家講座第52頁53病毒感染和實驗診療專家講座第53頁甲型肝炎標(biāo)本采集及時間選擇54病毒感染和實驗診療專家講座第54頁常規(guī)分離與判定動物接種雞胚接種組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng)

細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培養(yǎng)方法55病毒感染和實驗診療專家講座第55頁56病毒感染和實驗診療專家講座第56頁病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖指標(biāo)1、CPE2、紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞病變細(xì)胞57病毒感染和實驗診療專家講座第57頁內(nèi)基氏小體58病毒感染和實驗診療專家講座第58頁病毒數(shù)量和感染性測定1、蝕斑試驗2、ID50

或TCID50

病毒感染雞胚動物或細(xì)胞后，引發(fā)50%發(fā)生死亡或病變最小量

病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生不足病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個感染性病毒體復(fù)制使局部單層細(xì)胞脫落形成，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中感染性病毒量以每毫升蝕斑形成單位（PFU）來表示。59病毒感染和實驗診療專家講座第59頁病毒判定形態(tài)學(xué)判定：細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、包含體血吸附和血凝作用干擾作用病毒成份直接檢測60病毒感染和實驗診療專家講座第60頁電鏡技術(shù)標(biāo)本制備：超薄切片法（正染法）和負(fù)染法病毒識別：有包膜和無包膜病毒電鏡技術(shù)應(yīng)用：分類及診療61病毒感染和實驗診療專家講座第61頁病毒免疫學(xué)診療方法標(biāo)識法不標(biāo)識法免疫酶法、免疫熒光法血凝法、乳膠凝集法免疫轉(zhuǎn)印法SPA法、凝集抑制法放射免疫法補體結(jié)正當(dāng)、中和試驗法化學(xué)發(fā)光法沉淀反應(yīng)、免疫電鏡測熱及其它其它顆粒凝集法免疫PCR法62病毒感染和實驗診療專家講座第62頁

病毒血清學(xué)診療中和試驗補體結(jié)合試驗血凝抑制試驗免疫擴散等免疫熒光免疫酶技術(shù)63病毒感染和實驗診療專家講座第63頁血凝抑制試驗64病毒感染和實驗診療專家講座第64頁雙向免疫擴散試驗65病毒感染和實驗診療專家講座第65頁病毒快速診療光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)雜交South