單純TACE或TACE聯(lián)合其他治療方法

單純TACE或TACE聯(lián)合其他治療方法:一項肝癌動物模型的對比研究摘要本研究目的是比較單純TACE和TACE聯(lián)合其他治療方法在肝癌動物模型的效果。50只雄性ACI大鼠被膜下種植實體3924A肝癌（0天），第13天采用MRI測量腫瘤體積（VI）。第14天開腹后將導(dǎo)管逆行插入胃十二指腸動脈，根據(jù)實驗計劃進(jìn)行下列介入操作：TACE（MMC+B化油）+免疫治療（A組TNFa+IL-2；B組OK-432+IL-2）；TACE+抗血管生成治療（C組TNP-470;D組內(nèi)皮抑素）；E組單純TACE對照組）。采用MRI計算腫瘤體積（V2）,并計算比率X（V2/V1）。統(tǒng)計分析顯示B組（X=6.53）和C組（X=4.01）其腫瘤生長與對照組比較有顯著性差異（尸＜0.05）,C組與其他治療組比較有顯著差異（尸＜0.05）。TACE聯(lián)合免疫治療（OK-432）和抗血管生成治療（TNP-470）比單純TACE治療在肝癌動物模型治療中能有效抑制腫瘤生長。關(guān)鍵詞肝，肝細(xì)胞癌；TACE前言肝細(xì)胞癌（HCC）是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，每年約死亡100萬人。由于快速浸潤生長和合并肝硬化，預(yù)后很差。直到今天，外科治療包括手術(shù)切除和肝臟移植仍被認(rèn)為是可能治愈肝癌的方法，尤其是對病灶小河沒有浸潤轉(zhuǎn)移的病例。然而，由于病灶多中心生長、肝外轉(zhuǎn)移、早期血管浸潤、缺乏捐獻(xiàn)器官、并發(fā)癥和合并癥發(fā)生率高，只有少數(shù)病人適合外科手術(shù)。腫瘤局部消融治療，包括肝動脈栓塞化療術(shù)（TACE）、經(jīng)皮穿刺酒精注射術(shù)（PEI）、射頻消融術(shù)（RFA）、微波固化治療（MCT）、激光熱療（LITT），是常用的輔助治療，特別是對肝功能下降、不能手術(shù)切除或多發(fā)的病灶。TACE被認(rèn)為是對于不能手術(shù)切除的HCC病人的一種姑息治療，現(xiàn)在已成為一種最常用的介入治療方法，TACE已被證明可以減輕系統(tǒng)毒性，增加局部效果，增強(qiáng)治療效果。當(dāng)腫瘤已浸潤或乏血供時，TACE由于缺乏合適的栓塞劑而影響其治療效果。最近幾年，局部免疫治療和抗血管生成治療對于治療不能手術(shù)切除的HCC患者已顯示出令人鼓舞的效果，特別是對于肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和HCC復(fù)發(fā)的患者。這樣TACE聯(lián)合輔助治療可能會增強(qiáng)TACE的治療效果。然而，至今關(guān)于這些聯(lián)合治療的動物實驗的隨機(jī)研究很少報道。本研究的目的是在HCC動物模型中比較單純TACE和TACE聯(lián)合其他療法的效果。材料和方法動物模型瘤株為Morris肝癌細(xì)胞3924A，一種生長快、低分化的肝細(xì)胞肝癌，種植到ACI大鼠，腫瘤組織取自德國癌癥研究中心。50只雄性ACI大鼠，重220~260克，飼養(yǎng)條件為傳統(tǒng)條件，溫度22±2°C，相對濕度55±10%，標(biāo)準(zhǔn)實驗條件飼養(yǎng)，所有動物實驗均符合德國政府和動物研究的規(guī)定。藥物局部免疫藥物TNFa已知是一種具有多種生物活性的主要的炎癥介質(zhì)和主要的細(xì)胞素級聯(lián)的起始因子，臨床應(yīng)用主要是作為I期抗腫瘤藥物，但已被證實效果欠佳。用前20分鐘將7.5pgTNFa溶于0.5ml0.9%NaCl溶液中備用。OK-432是一種抗腫瘤藥，由日本東京Chugai醫(yī)藥公司提供。用前20分鐘將0.05mgOK-432溶于0.5ml0.9%NaCl溶液中備用。IL-2已知是一種有效的免疫藥物，可有效抗癌。用前20分鐘將5X103IUIL-2溶于0.5ml0.9%NaCl溶液中備用?？寡苌伤幬飪?nèi)皮抑素是一種XVIII分裂產(chǎn)物，在大鼠中可以知腫瘤血管生成和生長。用前10分鐘將0.8mg內(nèi)皮抑素溶于0.5ml0.9%NaCl溶液中加0.05ml酒精備用。TNP-470(AGM-1470)是一種合成的煙曲霉素類似物，可選擇性抑制內(nèi)膜增殖，從而起到抗腫瘤效果。用前10分鐘將5mgTNP-470溶于1ml枸櫞酸磷酸鹽緩沖液中（pH6.2）備用。麻醉在所有介入操作和影像檢查時，動物采用腹腔內(nèi)注射鹽酸氯胺酮100mg/kg或鹽酸甲苯噻嗪15mg/kg麻醉。腫瘤種植（0天）腫瘤種植方法基本同Yang等報道一致，稍作修改。將Morris3924A皮下種植（含5X106腫瘤細(xì)胞）后2周，切成2mm3塊。麻醉下在ACI大鼠肝左葉包膜下切一小口，將腫瘤組織塊植入肝內(nèi)，然后關(guān)腹。介入治療（14天）采用PE-10聚乙烯導(dǎo)管（內(nèi)徑0.28mm，外徑0.61mm）在剖腹下插管。采用雙筒手術(shù)顯微鏡，導(dǎo)管逆行插入胃十二指腸動脈，然后前推進(jìn)入肝總動脈，由于肝動脈分支細(xì)小不能做超選擇性插管栓塞。采用對手壓肝右動脈以保證藥物直接流入肝左動脈。采用三明治栓塞技術(shù)（順序注入MMC-生物治療-碘化油）在20分鐘內(nèi)經(jīng)導(dǎo)管注入藥物進(jìn)入肝動脈，注射中導(dǎo)管位置應(yīng)在肝動脈內(nèi)以做到中心性栓塞，防止藥物返流進(jìn)肝總動脈和腹腔干。50只大鼠隨機(jī)分成5組（A-E）,每組10只，所有的動物都接受TACE治療：MMC0.1mg,碘化油0.1ml。在A組和B組，經(jīng)動脈免疫治療聯(lián)合應(yīng)用TNFa+IL-2（A組）和OK-432+IL-2（B組）；抗血管生成治療是聯(lián)合應(yīng)用TNP-470（C組）和內(nèi)皮抑素（D組）；E組10只大鼠單純TACE治療。MRI掃描（13天；27天）和分析對比不同的HCC影像學(xué)檢查方法，我們決定應(yīng)用MRI掃描。所有的檢查使用1.5TSonata超導(dǎo)系統(tǒng)，使用腕部線圈于治療前（13天）和治療后（28天）作MRI掃描T1加權(quán)（SE:TR/TE,460/15ms）和T2加權(quán)（TSE:TR/TE,3170/99ms）,橫斷面掃描厚度2mm，184X256矩陣。MRI掃描圖像由兩名放射科醫(yī)生分析腫瘤大小、壞死和肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移，層間無間隔，未作強(qiáng)化掃描。腫瘤體積由T2加權(quán)圖像根據(jù)下述公式計算：腫瘤體積=最大徑（mm）X[最小徑（mm）]2/2.統(tǒng)計分析采用SAS軟件，比較治療組與對照組腫瘤生長率采用Dunnett’s分析，比較治療組間的差異采用Student-Neuman-Keuls分析，顯著水平為0.05。結(jié)果腫瘤種植腫瘤種植成功率為100%，在腫瘤種植和介入治療期間無大鼠死亡。治療前MRI平掃發(fā)現(xiàn)50只大鼠中有50個病灶（100%），介入治療后50只大鼠有50個病灶生長（100%）。MRI掃描和分析由于采用2mm層厚計算小的病灶的體積，現(xiàn)在的成像技術(shù)受到限制，病灶與周圍肝組織間的界限由放射科專家根據(jù)不同的信號強(qiáng)度判定。V2/V1的平均比率在A組為7.30，B組6.53，C組4.01，D組7.78，E組為9.14。與對照組E組（單純組）比較，B組（TACE+OK-432+IL-2）和C組（TACE+TNP-470）有顯著減?。≒<0.05）,而A組（TACE+TNFa+工-2）和D組（TACE+內(nèi)皮抑素）無顯著差異（P>0.05）。C組與其他治療組間比較有顯著差異（P<0.05）。A組10只大鼠中有1只，E組10只中有2只發(fā)生肝內(nèi)轉(zhuǎn)移。在T2加權(quán)圖像中可能代表腫瘤內(nèi)壞死區(qū)，在A、B、D和E組中有1只，在C組中有2只。討論自從TACE作為一種姑息性治療方法用于治療不能手術(shù)切除的HCC以來，TACE已成為一種最常用的介入治療方法。TACE應(yīng)用碘化油已顯示可使HCC縮小，減輕系統(tǒng)毒性從而提高治療效果。然而它也存在著是否能延長患者總的生存率的問題。已知提高肝癌總的治療效果依靠綜合治療，然而對于TACE聯(lián)合生物治療的實驗研究或臨床報道較少，所以我們設(shè)計了該項研究，觀察TACE聯(lián)合局部免疫治療和抗血管生成治療與單純TACE治療在Morris3924A大鼠動物模型中的價值。該動物模型與人類肝細(xì)胞癌類似，優(yōu)于Walker-256和VX-2動物模型。OK-432可以增強(qiáng)絲裂霉素（MMC）的抗腫瘤效果，因為OK-432本身就具有細(xì)胞毒性，可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長活性。化療可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞的敏感性，包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，被OK-432激活通過直接損害或通過化療調(diào)節(jié)表面抗原。而且，絲裂霉素能消除血液或滲出液中的抑制細(xì)胞或抑制因子，強(qiáng)化OK-432激活的免疫增強(qiáng)細(xì)胞，特別是T細(xì)胞的抗腫瘤活性，這也被經(jīng)動脈免疫栓塞（TIE）的組織學(xué)檢查，結(jié)果比傳統(tǒng)的TAE治療人類的包膜外浸潤和阻止肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的效果更有效所證實。Okuno等發(fā)現(xiàn)肝動脈灌注IL-2能增強(qiáng)肝動脈內(nèi)皮的滲透性，結(jié)果可增強(qiáng)抗腫瘤藥物的滲透，此現(xiàn)象可以增加抗腫瘤藥物釋放進(jìn)入肝臟，所以可以減少與藥物有關(guān)的系統(tǒng)毒性。我們的免疫化療栓塞方法就是基于上述的研究結(jié)果表明的TIE的價值和局部的免疫化療。結(jié)果表明，OK-432聯(lián)合TACE比單純TACE可明顯降低腫瘤的生長率，無肝內(nèi)轉(zhuǎn)移發(fā)生。在本實驗中，OK-432顯示出在TACE中的有效的抗腫瘤效果。TNFa，另一種生物反應(yīng)修飾因子，在體外具有多種生物活性，例如對癌細(xì)胞的毒性、損害內(nèi)皮細(xì)胞和增強(qiáng)成纖維細(xì)胞的增殖。Watanabe等發(fā)現(xiàn)在兔動脈內(nèi)灌注TNFa/碘油乳劑能產(chǎn)生顯著的抗腫瘤效果，可能是由于TNFa在腫瘤中集聚和滯留，引起腫瘤血管內(nèi)皮的損傷。在Yang等的實驗性研究中，連續(xù)ACI大鼠肝動脈灌注TNFa聯(lián)合肝動脈結(jié)扎術(shù)，能明顯阻止腫瘤的生長。注意將導(dǎo)管留在肝動脈中，在后期可將其作為腫瘤栓塞的中心。我們研究設(shè)計受到長期留置在肝動脈內(nèi)的導(dǎo)管的限制，由于此原因，與Yang等研究相比只有少量的TNFa聯(lián)合IL-2經(jīng)動脈注射到肝臟腫瘤當(dāng)中，這可以解釋為什么TNFa聯(lián)合TACE治療不能明顯降低腫瘤的生長。抑制血管生成藥物因選擇性作用于腫瘤的血管系統(tǒng)，所以具有較低的毒性，它們聯(lián)合抗癌藥物能增強(qiáng)其抗癌效果。為獲得最佳臨床效果，抗血管生成治療應(yīng)聯(lián)合其他輔助治療。TNP-470抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，抑制毛細(xì)血管網(wǎng)形成。研究表明TACE治療引起的缺血缺氧和壞死能刺激存活的HCC血管形成。動物實驗表明，聯(lián)合應(yīng)用TNP-470能增加某些細(xì)胞毒性和生物活性藥物的抗癌效果，但在血漿中的半衰期很短，一般注射后1h就從血循環(huán)中清除。據(jù)報道TACE聯(lián)合TNP-470能增強(qiáng)TACE治療HCC的效果，而對肝臟無嚴(yán)重副作用。我們的結(jié)果表明，TACE聯(lián)合動脈內(nèi)應(yīng)用TNP-470與單純TACE比較，能顯著降低腫瘤的生長率（P<0.05）,它的抗腫瘤效果優(yōu)于免疫治療組（TACE+OK-432和TACE+TNFa）。本研究應(yīng)用的內(nèi)皮抑素是一種新的抗血管生成因子。體外研究表明內(nèi)辟一素可以抑制VEGF引起的內(nèi)皮細(xì)胞遷移，體內(nèi)研究表明具有抗腫瘤活性，而無任何的毒性。研究顯示內(nèi)皮抑素能抑制裸鼠的HCC的生長（52.2%）。內(nèi)皮抑素聯(lián)合傳統(tǒng)化療能增強(qiáng)鼠結(jié)直腸癌早期肝轉(zhuǎn)移模型的治療效果。我們的結(jié)果表明，選擇性應(yīng)用內(nèi)皮抑素聯(lián)合TACE與單純TACE比較，未顯示出抑制腫瘤生長的優(yōu)勢，且發(fā)生了肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（10%），我們猜想可能是該組研究中枸櫞酸磷酸鹽緩沖液量過大（1.0ml,只有0.8mg的內(nèi)皮抑素可溶解），結(jié)果大量的MMC和碘化油被沖走，所以抗腫瘤效果被削弱?？傊?/p>