動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作

最新版--動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作一（固定、性別判定、標(biāo)識(shí)）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，防止被動(dòng)物咬傷、準(zhǔn)確辨別動(dòng)物性別、準(zhǔn)確標(biāo)識(shí)動(dòng)物，要學(xué)會(huì)用正確方法捉拿實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、掌握辨別動(dòng)物性別的方法以及掌握標(biāo)識(shí)動(dòng)物的方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄各半，體重180-250g。【實(shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、美式圖釘、細(xì)繩、防護(hù)手套藥品：苦味酸80%~90%酒精飽和溶液、20%烏拉坦【實(shí)驗(yàn)步驟】一、小鼠的捉拿1、徒手固定：用右手提起尾巴中部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上。向后上方輕拉，此時(shí)，小鼠前肢緊緊抓住粗糙表面。左手拇指和食指迅速捏住小鼠頸背部皮膚，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夾住小鼠背部皮膚，無(wú)名指壓住小鼠尾根部，將其固定于手中。右手可行注射或其它操作。2、固定器固定：尾靜脈注射或給藥時(shí)，將小鼠放進(jìn)固定器中或者大小和重量適當(dāng)?shù)娜萜鳎ㄈ鐭?，只露出尾巴，該?lèi)容器能夠壓住尾部，避免其活動(dòng)。勿固定過(guò)緊造成窒息死亡。進(jìn)行腹腔手術(shù)或心臟采血時(shí)，先準(zhǔn)備一個(gè)15-20cm的方木板，邊緣釘入五顆釘子。將小鼠四肢分別用20-30cm的線(xiàn)繩捆綁，線(xiàn)的另一頭分別綁在方木板的釘子上，并且在頭部上顎切齒牽引一根線(xiàn)繩，也固定在釘子上，達(dá)到完全固定。二、大鼠的捉拿

4-5周內(nèi)的大鼠，方法同小鼠。周齡較大的，則：1、首先戴好防護(hù)手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。3、左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取保定。三、性別判定小鼠、大鼠性別判定（1）幼鼠外生殖器與肛門(mén)間隔短的是♀，外生殖器與肛門(mén)間隔長(zhǎng)的是♂。（2）成年動(dòng)物可直接肉眼辨認(rèn)，雄性有膨起的陰囊和陰莖，雌性動(dòng)物有陰道口。四、動(dòng)物的標(biāo)記小鼠的短期標(biāo)記法：苦味酸80%~90%酒精飽和溶液（黃色），標(biāo)出屬于自己的編號(hào)【注意事項(xiàng)】1、實(shí)驗(yàn)人員要有精神準(zhǔn)備：掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、動(dòng)物興奮的時(shí)候不要抓取，待其安靜下來(lái)。3、根據(jù)受試動(dòng)物的給藥部位或采血方法的不同，事先選擇徒手固定還是固定器固定。4、固定時(shí)把握好力度，過(guò)分用力會(huì)使小鼠頸椎脫臼或窒息死亡，若用力過(guò)輕頭部能反轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)咬傷實(shí)驗(yàn)者的手?！舅伎碱}】1.在固定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)如何才能快、準(zhǔn)、穩(wěn)？動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作二（給藥途徑、采血）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭谧鰟?dòng)物試驗(yàn)時(shí)，為確保給藥、采血實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，要掌握根據(jù)不同的情況進(jìn)行動(dòng)物給藥以及采血的正確方法?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠（180-250g），KM小鼠（18-22g），雌雄各半?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、方木板、長(zhǎng)釘、細(xì)繩、防護(hù)手套,灌胃針，注射器（1ml,5ml）、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子藥品：生理鹽水、75％酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管【實(shí)驗(yàn)步驟】給藥途徑1、大、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃針并已吸好藥物)，將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線(xiàn)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如果動(dòng)物掙扎厲害，退出灌胃針，待動(dòng)物安靜下來(lái)，重新插入。灌胃針前端達(dá)到膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說(shuō)明已進(jìn)入胃內(nèi)。如不通暢，且動(dòng)物掙扎厲害，須拔出重新操作。2、皮下注射左手拇指和食指輕輕提起動(dòng)物皮膚，右手持注射器，將注射針刺入皮下，若針頭容易擺動(dòng)則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，稍微用手指壓片刻針刺部位，以防藥物外漏。3、肌肉注射選用肌肉發(fā)達(dá)，無(wú)大血管經(jīng)過(guò)的部位，如臀部或股部。（肌肉注射比皮下和腹腔注射用得較少，但當(dāng)給動(dòng)物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，常采用肌肉注射）4、腹腔注射A、左手抓取并固定好動(dòng)物，將腹部朝上。B、右手持注射器將針頭在下腹部腹白線(xiàn)稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進(jìn)針3-5mm。C、再使針頭與皮膚呈45°角斜穿過(guò)腹肌，當(dāng)針尖穿過(guò)腹肌進(jìn)入腹腔時(shí)，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽，無(wú)回血，無(wú)腸液、尿液，便可緩緩?fù)迫胨幰骸?、靜脈注射（尾靜脈注射）A、大、小鼠尾靜脈共有3根(左、中、右)，一般常選用兩側(cè)的靜脈。注射前，先把動(dòng)物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內(nèi)(可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替).B、拔去尾部靜脈走向的毛，用75％酒精棉球反復(fù)擦拭鼠尾，以達(dá)到消毒、血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。C、盡量從靜脈的遠(yuǎn)心端刺入血管，回一下血，將藥液緩慢注入。D、注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。二、采血1、心臟采血將動(dòng)物仰臥固定在鼠板上，剪去胸前區(qū)部位的被毛，消毒。在左側(cè)第3-4肋間，用左手食指摸到心搏處，右手持注射器選擇心搏最強(qiáng)處穿刺。當(dāng)針穿刺入心臟時(shí)，血液由于心臟搏動(dòng)的力量自動(dòng)進(jìn)入注射器。如不需保留動(dòng)物存活時(shí)，也可麻醉后切開(kāi)動(dòng)物胸膛，直接用注射器刺入心臟內(nèi)采血，也可剪破心臟直接用注射器或吸管吸血。2、摘眼球采血用左手抓住動(dòng)物頸部皮膚，并將動(dòng)物輕壓在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，稍微側(cè)臥，左手拇指盡量將動(dòng)物眼周?chē)つw往眼后壓，使動(dòng)物眼球突出并充血，用彎頭鑷子迅速摘除眼球，眼眶內(nèi)很快流出血液。3、眶靜脈叢（竇）采血將動(dòng)物麻醉，采用側(cè)眼向上固定體位，用左手拇指和食指從背部較緊地握住大（小）鼠頸部。取血時(shí)，左手拇指及食指輕輕壓迫動(dòng)物的頸部?jī)蓚?cè)，是頭部靜脈血液回流困難，眼球充分外突，眶靜脈叢充血?！咀⒁馐马?xiàng)】1、掌握方法，膽大心細(xì)，做好防護(hù)。2、常用灌胃量：小鼠：0.2～1ml,大鼠1～4ml3、摘取眼球采血法一般可取約為小鼠體重4-5%的血液量。【思考題】1.如何熟練掌握大小鼠的給藥途徑和采血方法？ 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本操作三（安樂(lè)死）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹吭诳茖W(xué)應(yīng)用和教學(xué)實(shí)驗(yàn)中，因?qū)嶒?yàn)終結(jié)、研究所需提供血液或其他組織臟器、不適合繁殖或者是當(dāng)動(dòng)物的疼痛與窘迫程度超過(guò)預(yù)期等情況下，需要我們以人道的方式使動(dòng)物死亡，使動(dòng)物在最低程度的疼痛、恐懼，并在最短的時(shí)間內(nèi)失去知覺(jué)和痛覺(jué)?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】KM小鼠，雌雄各半，體重18-22g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：鼠籠、大小鼠固定器、注射器（1ml）、棉球，剪毛剪、手術(shù)剪、手術(shù)刀、采血管、彎頭鑷子、燒杯100ml、方木板藥品：吸入性麻醉劑、注射型麻醉劑、75％酒精棉球【實(shí)驗(yàn)步驟】1、頸椎脫臼法用拇指和食指用力往下按住鼠頭，另一只手抓住鼠尾（鼠尾根部），用力往后上方一拉，使頸椎脫臼，造成脊髓與腦髓斷離，動(dòng)物立即死亡。醉藥。麻醉效果判定：可以通過(guò)觀察動(dòng)物呼吸平穩(wěn)深慢、角膜反射遲鈍或消失、肢體肌肉松弛、皮膚夾捏反射消失四方面來(lái)判定是否達(dá)到理想的麻醉效果家兔的氣管與動(dòng)脈插管1、仰臥固定：頭部用一根粗棉線(xiàn)拉住兔的兩只門(mén)齒后栓在兔板的鐵柱或固定于鉤上。兩前肢平直放在胸腰部?jī)蓚?cè),用粗棉繩的一端縛扎腕關(guān)節(jié)以上部位,縛繩從背后左右交叉穿過(guò),壓在對(duì)側(cè)前肢的前臂上,再緊扎于兔板兩側(cè)的木鉤上,兩后肢左右分開(kāi),縛繩扎踝關(guān)節(jié)以上部位,另一端分別固定于兔板后兩側(cè)的木鉤上，如下圖2。氣管插管操作要點(diǎn)用手術(shù)刀時(shí)，先用手或器械使兩側(cè)組織牽拉緊張情況下，以刀刃作垂直的輕巧的切開(kāi)，不要作刮削的動(dòng)作。氣管插管術(shù)操作要點(diǎn)（）：①頸部正中切開(kāi)皮膚，鈍性分離暴露氣管、穿線(xiàn)備用。②于氣管中段第三或第四軟骨環(huán)上向頭端作一縱向倒“T”形切口。③將氣管導(dǎo)管由切口向胸部方向插入氣管腔內(nèi)。④在氣管軟骨環(huán)之間進(jìn)行結(jié)扎，并將棉線(xiàn)固定于插管分叉處。3、動(dòng)脈插管操作要點(diǎn)①于氣管一側(cè)小心分離頸總動(dòng)脈約3cm穿兩線(xiàn)備用。②遠(yuǎn)心端結(jié)扎、近心端用動(dòng)脈夾夾緊。③用眼科剪與血管呈45℃的角度從遠(yuǎn)心端開(kāi)始在向心一側(cè)剪開(kāi)管壁的1/3。④插管前導(dǎo)管和壓力換能器的肝素化。⑤插管后結(jié)扎固定。注意事項(xiàng)1、麻醉動(dòng)物時(shí),注射速度先快后慢,邊注射邊觀察動(dòng)物麻醉指征。如麻醉過(guò)淺,動(dòng)物掙扎時(shí)可適量追加麻醉藥,切忌麻醉過(guò)深引起家兔死亡；2、手術(shù)過(guò)程中操作應(yīng)輕柔,盡量避免不必要的損傷和出血；3、手術(shù)時(shí),切開(kāi)頸部皮膚后,盡量鈍性分離,以免損傷血管；4、氣管插管前，應(yīng)注意止血，并將氣管分泌物清理干凈；5、動(dòng)脈導(dǎo)管的插入端要光滑，不能過(guò)尖，以防刺破動(dòng)脈壁，引起大出血。6、未扎緊動(dòng)脈插管前不要松動(dòng)動(dòng)脈夾。實(shí)驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)性肺水腫【實(shí)驗(yàn)原理與目的】肺水腫是臨床上常見(jiàn)的危重癥之一，肺水腫是指過(guò)多的液體積聚在肺間質(zhì)或溢入肺泡腔內(nèi)的病理狀態(tài)。當(dāng)肺毛細(xì)血管流體靜脈壓增高、血漿膠體滲透壓降低，肺微細(xì)管壁通透性增高、肺淋巴回流障礙等因素的某個(gè)或多個(gè)同時(shí)或相繼作用，一般水腫液先在組織間隙中積聚，形成間質(zhì)性肺水腫，然后發(fā)展為肺泡性肺水腫。肺水腫發(fā)生后，可引起氣體彌散障礙以及肺泡通氣與血流比例失調(diào)（如果氣道內(nèi)存在水腫液，還會(huì)引起通氣障礙），最終導(dǎo)致呼吸功能不全。大劑量腎上腺素可引起機(jī)體血液重新分布，外周血管廣泛收縮，血液由體循環(huán)急速轉(zhuǎn)移到肺循環(huán)，使左心房壓力和肺毛細(xì)血管有效濾過(guò)壓增高，液體流入肺間質(zhì)增多而出現(xiàn)肺水腫。本實(shí)驗(yàn)的目的是用大劑量腎上腺素復(fù)制肺水腫模型，觀察急性肺水腫的表現(xiàn)，分析發(fā)病機(jī)理?！緦?shí)驗(yàn)對(duì)象】SD大鼠，雌雄不限，體重180-250g?！緦?shí)驗(yàn)器材和藥品】器材：彈簧磅秤，電子天平，手術(shù)器械1套，2ml,5ml注射器，聽(tīng)診器1具，濾紙。藥品：生理鹽水，0.1%鹽酸腎上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液(烏拉坦，4-5ml/kg體重，麻醉用)?！緦?shí)驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo)】1.取180-250g左右體重相近的大鼠兩只，做好標(biāo)記（甲鼠、乙鼠），稱(chēng)重，觀察動(dòng)物的一般情況、呼吸和膚色。2.甲鼠腹腔注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液1.5~2ml；乙鼠腹腔注射同體積生理鹽水。觀察動(dòng)物變化如活動(dòng)情況、呼吸、膚色并做肺部聽(tīng)診肺呼吸音，注意口鼻有無(wú)泡沫液體流出。如動(dòng)物死亡，記錄時(shí)間；若注射藥物20min后動(dòng)物未死亡，可按0.3%戊巴比妥鈉溶液1ml/100g腹腔注射，帶麻醉成功后剪斷動(dòng)脈快速放血處死。3.解剖尸體，止血鉗夾住氣管后取出心肺，然后將心臟分離（注意不要損