中藥逆轉(zhuǎn)卵巢癌多藥耐藥的研究進(jìn)展

中藥逆轉(zhuǎn)卵巢癌多藥耐藥的研究進(jìn)展【摘要】多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥產(chǎn)生耐藥性后,對結(jié)構(gòu)與作用機制不同的抗腫瘤藥產(chǎn)生交叉耐藥的現(xiàn)象。這種現(xiàn)象可以是先天的,也可以是化療誘導(dǎo)產(chǎn)生的。目前認(rèn)為其共同的生物學(xué)基礎(chǔ)是MDR1基因產(chǎn)物P2糖蛋白(P2gp)過量表達(dá),與腫瘤內(nèi)藥物結(jié)合或直接從細(xì)胞膜上排除抗腫瘤藥物,從而降低藥物對腫瘤細(xì)胞的毒性所致。MDR是目前化療的主要障礙,是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的重要原因。

【關(guān)鍵詞】中藥；卵巢癌；多藥耐藥；逆轉(zhuǎn)

卵巢癌是當(dāng)前死亡率最高的婦科惡性腫瘤之一。手術(shù)輔以化療是其主要的治療原則。然而化療耐藥嚴(yán)重影響了卵巢癌患者的化療效果和生存質(zhì)量,使患者5年生存率大大下降。多藥耐藥(multidrugresistance,MDR)指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥產(chǎn)生耐藥性后,對結(jié)構(gòu)與作用機制不同的抗腫瘤藥產(chǎn)生交叉耐藥的現(xiàn)象。目前,卵巢癌化療多藥耐藥的研究既是熱點問題,又是難點問題。因此發(fā)掘?qū)Ｒ恍缘哪退幠孓D(zhuǎn)劑及從中藥中篩選出特別有效的耐藥逆轉(zhuǎn)藥物，都會給患者帶來新的生命,新的希望。

中藥因其藥理作用廣泛,療效明顯,而不良反應(yīng)少,已成為目前腫瘤多藥耐藥研究的熱點。中藥抗腫瘤作用的機制概括起來有:①中藥通過對腫瘤細(xì)胞周期的抑制作用和(或)對腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo),減緩腫瘤細(xì)胞的增殖,或?qū)е履[瘤細(xì)胞的死亡,從而起到抑制腫瘤增長的作用;②中藥通過對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用提高機體免疫力,保護(hù)正常細(xì)胞,延長帶瘤生存期;③中藥與化療藥合用,可明顯提高化療藥物的敏感性,達(dá)到有效殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。本文對相關(guān)中藥單體及復(fù)方進(jìn)行整理，圍繞以上幾個機制對中藥逆轉(zhuǎn)卵巢癌的研究進(jìn)展作一綜述。

1中藥單體

1．1人參皂苷Rg3許天敏等通過體內(nèi)、體外實驗觀察了20(S)-人參皂苷Rg3對卵巢癌生長的影響,并初步探討其抗卵巢癌的機制。體外實驗顯示Rg3對SKOV3細(xì)胞生長有明顯抑制作用。并且隨著Rg3作用濃度的增加,抑制作用明顯增大。卵巢癌皮下移植瘤動物模型的體內(nèi)實驗,也證實Rg3能明顯抑制實體腫瘤的生長,并且隨著給藥劑量的增加抑制作用增強,說明Rg3有較好的抗卵巢癌作用。并推測Rg3抗卵巢癌的作用機制可能是通過抑制卵巢癌周圍新生血管的形成而實現(xiàn)的。

1．2蟾蜍毒素蟾酥是傳統(tǒng)中藥，李艷榮等研究發(fā)現(xiàn)蟾蜍毒素粗提物對卵巢癌細(xì)胞OVCAR-3作用細(xì)胞24,48,72h,半數(shù)抑制濃度分別為0．62、0．24、0．09μg/ml。細(xì)胞經(jīng)0．5、5μg/ml蟾蜍毒素粗提物處理1,6h,細(xì)胞生存率均95%,集落抑制率與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0．05)。流式細(xì)胞儀分析表明,0．5μg/ml蟾蜍毒素粗提物明顯增加G2/M期的比例,同時觀察到分裂期細(xì)胞明顯增多,提示蟾蜍毒素粗提物使OVCAR-3細(xì)胞周期阻滯于M期。但其確切機理有待進(jìn)一步研究。

1．3黃芩素黎丹戎等實驗表明黃芩素在非細(xì)胞毒劑量時與ADM合用后能逆轉(zhuǎn)A2780/ADM對ADM的耐藥性;ADM與黃芩素合用時,其細(xì)胞內(nèi)ADM的含量較單獨使用明顯增高。采用無細(xì)胞毒性濃度的黃芩素能使A2780/ADM細(xì)胞內(nèi)ADM的積累增加3倍,與異博定的效果相當(dāng),提示其逆轉(zhuǎn)機制可能是與化療藥物競爭P-Gp上的結(jié)合位點,從而降低化療藥物的外流,增加細(xì)胞內(nèi)化療藥物的積累。

1．4姜黃素英煥春等研究發(fā)現(xiàn)姜黃素能誘導(dǎo)COC1/DDP細(xì)胞凋亡,DDP與姜黃素聯(lián)用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力比單用DDP或姜黃素明顯增加，順鉑的濃度在1．25~5μg/ml時加入姜黃素20μmol/L后耐藥細(xì)胞生存率下降明顯(P0．05),尤以順鉑2．5μg/ml和姜黃素。20μmol/L聯(lián)合作用時,耐藥細(xì)胞生存率下降最明顯;COC1/DDP中順鉑與姜黃素聯(lián)合用藥與單獨用順鉑相比,凋亡率明顯增加(P0．05)。其機制可能與降低Bcl-2、Survivin基因的表達(dá),增加Caspase-3基因的表達(dá)有關(guān)。

1．5雄黃陳文雪等應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡、透射電子顯微鏡和免疫組織化學(xué)等技術(shù),以細(xì)胞凋亡和VEGF為主要觀測指標(biāo),觀察中藥雄黃對荷人卵巢癌裸鼠移植瘤抗腫瘤作用。證明雄黃可誘導(dǎo)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤細(xì)胞凋亡,抑制荷瘤裸鼠腫瘤的生長,阻止血管生成抑制細(xì)胞DNA的合成,并可延長小鼠存活時間，具有廣闊的應(yīng)用前景。

1．6砒霜砒霜的有效成分三氧化二砷(As203)近年來成為抗腫瘤藥物研究的熱點。鄭建華等研究發(fā)現(xiàn)0．5～4．0umo1/LAs203明顯抑制SKOV3細(xì)胞的增殖，并呈劑量和時間依賴性；透射電鏡觀察可看到較為典型的細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞儀檢測出現(xiàn)DNA含量小于G1峰的亞二倍體凋亡峰，同時出現(xiàn)G2/M期阻滯。As203對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3的生長有明顯的抑制作用，誘導(dǎo)凋亡是其主要作用機制之一。

1．7去甲斑蝥素唐龍英等實驗表明：NCTD對3AO和AO細(xì)胞有較強抑制作用,并呈濃度和時間依賴性,兩種細(xì)胞的IC50分別為20、10μg/ml。通過體外殺傷實驗再次證實了NCTD的抗癌作用,其作用結(jié)果與大多數(shù)文獻(xiàn)報道NCTD對其他癌細(xì)胞的殺傷作用一致。但其對卵巢癌作用的具體機制尚不清楚,有待進(jìn)一步研究。

1．8川芎嗪高婷等運用RT-PCR技術(shù)檢測22例卵巢惡性腫瘤患者PBMC中Th1類細(xì)胞因子(IFN-γ,IL-2)、Th2類細(xì)胞因子(IL-4I、L-10)及轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3的mRNA表達(dá)水平，證明了卵巢惡性腫瘤患者出現(xiàn)典型的Th1/Th2漂移現(xiàn)象與T-bet和GATA3的表達(dá)水平有相關(guān)性。川芎嗪能降低Th2類細(xì)胞因子和GATA3的表達(dá),提高Th1類細(xì)胞因子和T-bet的表達(dá)。

1．9苦參堿侯華新等研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿對SKOV3細(xì)胞生長有明顯的抑制作用,且這種抑制作用呈濃度依賴性。細(xì)胞經(jīng)0．189mmol/L和0．378mmol/L的氧化苦參堿作用48h后,即呈現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化和DNA片段的梯形條帶。說明氧化苦參堿在一定濃度下能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡,其抗癌機制與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。

此外，李大成等通過體外細(xì)胞實驗,從32種中藥制劑中篩選出的Ams-11、Fw-13、Tul-17等3種中藥逆轉(zhuǎn)劑,能明顯增強MDR細(xì)胞對抗癌藥物的敏感性,而且其逆轉(zhuǎn)作用呈劑量依賴關(guān)系,能有效逆轉(zhuǎn)P-gp高表達(dá)細(xì)胞的人卵巢癌細(xì)胞SKVLB對長春花堿的耐藥性。

2中藥復(fù)方制劑

中藥復(fù)方制劑,可通過增強機體免疫功能、逆轉(zhuǎn)MDR等多種機制,提高腫瘤臨床療效,減輕化療的不良反應(yīng)。大量的臨床試驗證明，中藥在腫瘤放化療中有增敏、增效、減毒的作用，是中醫(yī)克服化療耐藥的重要手段。

2．1參芪扶正敗毒丸于華香等針對臨床中,中、晚期卵巢癌以氣血不足、脾腎兩虛為多見的情況，擬定了具有補益氣血、解毒利濕、消痰散結(jié)、理氣化瘀之功的參芪扶正敗毒丸與化療藥物配合治療卵巢癌。臨床能夠顯著提高化療完成率,改善臨床癥狀,提高患者的生活質(zhì)量,增強機體的免疫功能,延長患者的生存期。治療后局部病灶變化(CR+PR+NC),明顯優(yōu)于對照組的(P0．01);3年、5年的生存率,顯著優(yōu)于對照組的(P0．05,P0．01)。

2．2扶正消瘤顆粒賈彤等應(yīng)用扶正消瘤顆粒在體外有一定的抗腫瘤作用，并有增效之功。MMT顯示本方有一定量效關(guān)系和時效關(guān)系，濃度愈大，作用時間愈長，效果愈明顯;TUNEL和透射電鏡及FCM均提示了細(xì)胞凋亡的發(fā)生，而Westemblot的結(jié)果則顯示了細(xì)胞凋亡的發(fā)生與bcl一2兒ax比率的下調(diào)有關(guān)，使細(xì)胞增殖受到抑制。

2．3理沖生髓飲韓鳳娟等隨機設(shè)單純化療組和理沖生髓飲加化療組針對NK細(xì)胞活性、T淋巴細(xì)胞亞群、紅細(xì)胞C3b受體等指標(biāo)進(jìn)行臨床研究。臨床觀察證明本方不但可以減輕化療藥物的毒副反應(yīng),保障化療的順利進(jìn)行,而且在增強卵巢癌患者細(xì)胞免疫、體液免疫功能的同時達(dá)到抗腫瘤的作用。

2．4益氣養(yǎng)陰煎齊聰?shù)葢?yīng)用益氣養(yǎng)陰煎合并化療有助于提高卵巢癌患者的機體免疫狀況。經(jīng)服益氣養(yǎng)陰煎合并化療后,OKT4及OKT4/OKT8比值明顯提高(P0．01)。

2．5中藥消積煎劑潘玉真等研究發(fā)現(xiàn)消積煎劑與順鉑之間存在著協(xié)同增敏作用，其作用強度呈現(xiàn)對藥物濃度的正相關(guān)性。形態(tài)學(xué)觀察可看到，實驗處理后人卵巢癌CAOV3/cDDP細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡現(xiàn)象。其作用機制可能與消積煎劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。

2．6海馬生髓丸韓鳳娟等通過對移植瘤的抑瘤率、光、電鏡技術(shù)及細(xì)胞凋亡調(diào)控基因P53,BCL-2等免疫組化的研究，表明海馬生髓丸具有一定的抗腫瘤作用，可以抑制S180荷瘤鼠的腫瘤生長，明顯增強SKOV3卵巢癌模型鼠DDP的殺傷腫瘤作用，對腫瘤細(xì)胞的凋亡具有明顯促進(jìn)作用。并且海馬生髓丸能夠上調(diào)p53蛋白表達(dá)；而可顯著下調(diào)BCL-2蛋白表達(dá)，說明海馬生髓丸同p53這種抑癌基因具有協(xié)同作用。

2．7增免抑瘤合劑黃宗瀚等實驗發(fā)現(xiàn)化療組、合并組、中藥組大鼠的bcl-2陽性面積、OD值及bcl-2/bax比值均較模型組明顯下降(P0．01),而化療合并中藥治療后bcl-2下降最顯著(P0．01),提示中藥合并化療能明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其原因可能與中藥能增強化療藥物敏感性,降低耐藥有關(guān)。

2．8鴉乳劑崔勇志等研究提示適當(dāng)濃度的鴉乳劑可提高化療藥物對CAOV3細(xì)胞的毒性作用，其機理可能為鴉乳劑中的不飽和脂肪酸使癌細(xì)胞的-SH基含量低下，細(xì)胞膜變薄，從而增加對抗癌藥物的通透性，提高藥物在癌細(xì)胞內(nèi)的濃度，增強細(xì)胞毒性作用。也可能由于鴉乳劑的小油滴與癌細(xì)胞有較好的親和力，有助于藥物與癌細(xì)胞的接觸，增加抗癌藥向癌細(xì)胞內(nèi)滲入的機會，產(chǎn)生殺滅或抑制癌細(xì)胞的效果。

2．9扶正祛邪方藥張軍等應(yīng)用中藥血清藥理學(xué)的實驗方法,利用大鼠制備含藥血清,采用細(xì)胞排染法和3H摻入法觀測含藥血清對39例卵巢癌新鮮實體瘤細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果顯示：實驗所用復(fù)方中藥可抑制人卵巢癌新鮮實體瘤細(xì)胞的增殖。各病理類型中,隨含藥血清濃度的增加,抑制率增高,P0．05。同一種卵巢腫瘤病理類型中,含藥血清處理組細(xì)胞增殖cpm值明顯低于空白血清組,P0．05;而且不同濃度含藥血清組cpm值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0．05)。

3結(jié)語

目前中藥逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的實驗研究越來越多,但主要以體外實驗研究為主,單體從藥物研究的角度出發(fā),按照對腫瘤耐藥有效藥物的同科屬或化學(xué)結(jié)構(gòu)相似進(jìn)行篩選,復(fù)方從經(jīng)驗方或?qū)ΜF(xiàn)有的國家批準(zhǔn)的中藥制劑進(jìn)行逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的研究,探討其新的藥理作用。

中藥在腫瘤的治療中，有增敏、增效、減毒的作用，其逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的研究已取得一定的成果，具有重要的理論與實用價值。由于腫瘤產(chǎn)生耐藥的機制相當(dāng)復(fù)雜，如不同腫瘤細(xì)胞對同一種藥物可以有不同的耐藥機制，而同一腫瘤對同一種藥物也可能有多種耐藥機制。目前已經(jīng)證明具有逆轉(zhuǎn)作用的中藥的研究大多集中在單體成分目前大多數(shù)的研究均為體外試驗，許多試驗結(jié)果還需動物實驗及臨床的驗證。尤其是著力于復(fù)方中藥逆轉(zhuǎn)劑多靶點、多階段的研究對提高化療效果，延長癌癥患者的生存期和生活質(zhì)量，具有深遠(yuǎn)的意義。

參考文獻(xiàn)

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