染色體畸變分析培訓(xùn)課程課件

染色體畸變分析

（ChromosomeAberrationAnalysis)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室任銳毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課化學(xué)毒物致突變類型?復(fù)習(xí)染色體畸變?nèi)旧w數(shù)目改變基因突變堿基置換移碼突變轉(zhuǎn)換顛換毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課

復(fù)習(xí)遺傳學(xué)終點:基因突變?nèi)旧w畸變?nèi)旧w組畸變DNA原始損傷Ames實驗微核實驗染色體畸變分析染色體畸變分析分子生物學(xué)方法毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課小鼠骨髓細胞染色體畸變分析試驗毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課1.學(xué)習(xí)動物骨髓細胞標本制作。2.了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。一、目的毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。二、原理毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課三、器材與試劑見教材。毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。末次染毒后24h處死動物，收獲細胞。劑量最高劑量最大耐受劑量或，1/3~1/8LD50；最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；陰性對照給予溶劑。4.給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。四、實驗設(shè)計毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課1.注射秋水仙素2.骨髓細胞的制備3.低滲4.固定5.制片6.干燥7.染色五、操作步驟毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課注射秋水仙素骨髓細胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。

低滲：0.4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標記染色：Giemsa染色15min水沖干燥，閱片毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課低倍鏡、高倍鏡和油鏡。計數(shù)100個分裂中期相細胞。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。六、染色體分析閱片毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課低倍鏡、高倍鏡和油鏡。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。染色：Giemsa染色15min最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。七、結(jié)果評價毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課八、組織分工毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課八、總結(jié)毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課掌握正常小鼠的骨髓染色體數(shù)目和形態(tài)。毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課低滲時間十分重要，時間太短則染色體分散不開，無破裂，染色體丟失。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院低滲時間十分重要，時間太短則染色體分散不開，無破裂，染色體丟失。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。骨髓細胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每只小鼠分析100個骨髓細胞。掌握正常小鼠的骨髓染色體數(shù)目和形態(tài)。陰性對照給予溶劑。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。學(xué)習(xí)動物骨髓細胞標本制作。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。染色體畸變分析

（ChromosomeAberrationAnalysis)因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。小鼠骨髓細胞染色體畸變分析試驗?zāi)┐稳径竞?4h處死動物，收獲細胞。染色：Giemsa染色15min哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；染色：Giemsa染色15min陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；末次染毒后24h處死動物，收獲細胞。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。骨髓細胞制備：取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細胞，1500r/min，離心10min，棄去上清。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標記制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標記染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。染色體數(shù)目和染色體結(jié)構(gòu)。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標記固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院陰性對照組給予40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；低倍鏡、高倍鏡和油鏡。動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。動物選擇選用18g~24g雄性健康小鼠，每組6~10只。染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；低倍鏡、高倍鏡和油鏡。制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm~5cm處滴片，每張片子滴2~3滴細胞懸液，使細胞自然分散。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。4%氯化鉀水溶液5ml，37℃低滲30min，1000r/min，離心10min，棄去上清。了解動物體內(nèi)染毒及染色體畸變類型。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。給藥途徑原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；當某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。固定：加入3：1甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以1000r/min離心10min，棄上清。劑量最高劑量最大耐受劑量或，1/3~1/8LD50；每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。低倍鏡、高倍鏡和油鏡。最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的50~100倍；學(xué)習(xí)動物骨髓細胞標本制作。染毒與取樣時間一般染毒一次或多次，多次更為合理。每次離心后棄上清時應(yīng)仔細，注意不要將管底的沉渣吸出，以免最后分析時剩余的細胞數(shù)過少。染