石大生藥學實驗指導14顯微標本片的制作方法

二、顯微標本片的制作方法生藥的顯微鑒定是使用顯微鏡檢查藥材內(nèi)部構造特征，因此必須將藥材制作成適當?shù)娘@微標本片，才能在顯微鏡下進行觀察。顯微鑒別根據(jù)觀察對象、目的、要求的不同，制作不同的標本片，一般可分為徒手切片、石蠟切片、表面裝片、粉末制片、組織解離片等。一、徒手切片徒手切片法可以直接而又準確地觀察和了解藥材組織的本來面目，其設備簡單、操作方便，不需經(jīng)過復雜的處理，但是，此法對微小、柔軟、硬型或水分過多及肉質(zhì)藥材不易切成薄片以供觀察。1、基本操作=1\*GB2⑴取材：選取材料時要注意有一定的堅韌性，材料不宜太硬或太軟。=2\*GB2⑵切片：先將材料的斷面削平，用左手的姆指和食指夾住材料，材料上端伸出1～2mm的長度，右手執(zhí)刀，刀口向里(刀片可用單面刀片或剃刀)，刀口與材料的斷面平行，切時自左方向右方斜滑，亦可自內(nèi)向外切，同時揮刀要快，用力要均勻，不可拉鋸樣切割。每切1～2片，用毛筆蘸水取下切片放于水中或50～70％乙醇中，同時用水濕潤材料的切面和刀口，不可使之干燥。如材料較薄或較小，可用蘿卜或向日葵莖等解剖一切口將材料在切口內(nèi)夾住再切。選取較好的切片備用或直接放置在載玻片上，在顯微鏡下觀察。2、制片臨時觀察的切片，可自水或乙醇中取出切片，放置在載玻片上，加一滴水或甘油或先滴水或甘油，再放入材料，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。二、永久制片法(略)三、粉末標本片粉末標本片主要用作粉末、丸、散、膏、丹等成藥材料的觀察，所用材料不宜有粗顆?；烊耄駝t可將蓋玻片頂起，不便觀察，故須將材料用三號篩(60目)篩篩過。1、臨時性粉末標本片用解剖針尖挑取少量粉末藥材放置在載玻片的中央偏右一些，根據(jù)需要加入適宜的試液1～2滴，用解剖針或細玻棒(試液為酸或堿時)輕輕攪勻，然后用小鑷子(或蓋片鑷)夾住蓋玻片的一邊，使相對一邊與液面接觸，將蓋玻片輕輕放下(注意放蓋玻片時動作要輕而慢，以免產(chǎn)生氣泡或使材料溢出)，蓋玻片放好后，若有液體溢出，可用濾紙吸去溢出的液體，最后在載玻片左端做上標記。揮發(fā)性強的液體(如乙醇)很容易揮干，制片后須立即觀察。如果要保存標本片達數(shù)小時以上，通常可加稀甘油；如需要保存數(shù)天以上，則應在蓋玻片下及時補加甘油，并防止灰塵落在蓋玻片上。2、半永久性粉末標本片將粉末藥材放在載玻片上，加一滴稀甘油使粉末充分濕潤后，用濾紙吸去過多的甘油，將蓋玻片在酒精燈上略加熱，使蓋玻片稍溫熱，立即用玻棒滴加熔化的甘油明膠1～2滴，并按前法加蓋蓋玻片，注意加甘油明膠的量須適當，不宜過少也不宜過多。標本片應在無塵處放置，待其充分冷卻凝固后用小刀輕輕刮去溢出蓋玻片的甘油明膠，后用濕布擦凈，加貼標鑒，即可使用。如須將經(jīng)過水合氯醛試液透化處理過的粉末標本片改用甘油明膠封藏，則可先將水合氯醛試液盡量濾去，加入1～2滴甘油混勻，再濾去甘油，然后加熔化的甘油明膠封藏。3、永久性粉末標本片粉末一般以能通過《中華人民共和國藥典》五至六號篩為度。方法一：將粉末藥材放在載玻片上，先用無水乙醇充分濕潤，濾去無水乙醇，加二甲苯1滴，使其充分混勻，濾去二甲苯，再加1滴二甲苯，使材料透明，將二甲苯吸去，用加拿大膠封片。方法二：取粉末藥材少量，放置于離心管內(nèi)，加50～70％乙醇使藥材完全被浸沒，用玻棒不斷攪拌，10分鐘后，離心，使粉末沉集于管底，傾去醇液，再加50％灑精，攪拌，傾去醇液，再加無水乙醇二次，每次10分鐘，然后加入純二甲苯(中間更換一次)，使材料透明，攪勻后，用滴管吸取混懸液少量置于載玻片上，滴加加拿大膠，加蓋玻片封藏。永久性粉末片制作時可以染色，染色方法可在脫水、透明之前進行。四、表面標本片需要制作表面標本片的藥材主要是葉片、萼片、花瓣和雄蕊，此外草質(zhì)莖、漿果等的表皮也常需要做成表面標本片觀察其表皮特征。制做表面片，較薄的材料可以進行整體封藏。整體封藏此種制片法適用于很薄的葉片、花瓣、萼片。剪取需要的部分二小片，各約4mm見方，一正一反，放置在載玻片中央，加水合氯醛試液1～2滴，以能完全浸泡材料為宜，加蓋蓋玻片，在小火焰上慢慢加熱，加熱時應使載玻片保持水平狀態(tài)，在火焰上緩緩移動，保持透化液處于微沸狀態(tài)，并隨時補加透化液，注意勿使火焰過猛，加熱到材料略呈透明時，常約需1～2分鐘，可放置待涼，然后在顯微鏡下觀察。如發(fā)現(xiàn)透化不完全，可再反復加熱，直至透明為止。為了防止干燥和水合氯醛試液結晶的析出，可加稀甘油一滴。稍厚的葉片、花瓣等材料，當用上法不能完全透明時，可剪取2mm見方的所需材料，放入試管中，加透化液2～3ml，在沸騰的水中加熱至呈透明狀態(tài)(通常約需20～30分鐘)，將材料小心取出，放在載玻片上，切成大小相近的兩片，一正一反，放置在載玻片上，加透化液或稀甘油1滴，蓋上蓋玻片即可觀察。很厚的葉片、花瓣或莖的表皮材料，用上法直接透化不能使材料透明，因此需要將表皮撕離下來，將撕下的表皮表面朝上，放置于載玻片上，加透化液1滴，加蓋蓋玻片，稍稍加熱，就可使其透化。五、組織解離片法在鑒別生藥時，為了觀察某些單個細胞(如纖維、石細胞、導管等)的完整形狀，可利用化學試劑來進行藥材的組織解離，使胞間層溶解，細胞互相分離，這種方法叫做組織解離。所選用的試劑依所鑒定藥材的性質(zhì)而異，如藥材的木質(zhì)化組織少，可用氫氧化鉀法；如藥材的木質(zhì)化組織較多，則可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在進行組織解離前，應將要解離的材料切成不粗于火柴桿的細長條或小片。1．氫氧化鉀(鈉)法：將少量材料放置在試管中，加50％氫氧化鉀(鈉)溶液適量(應將材料完全淹沒)，加熱，用玻棒擠壓至材料全部離散時為止，傾去堿液，材料用水洗滌后，取少許放置在載玻片上，用解剖針撕開，以稀甘油封藏后觀察。2．硝鉻酸法：將材料切成小薄片放入小玻璃皿中，加20％硝酸與20％鉻酸的等量混合液放置2小時至一日，或以加溫(35℃左右)縮短浸漬時間，然后用水沖洗，取少量材料于載玻片上，用解剖針或鑷子輕壓，使其細胞分離，制成臨時