胚胎移植課件

胚胎移植課件2023/6/241第一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五一、胚胎移植概述1.胚胎移植的概念2.胚胎移植技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史3.胚胎移植在畜牧生產(chǎn)上的意義2023/6/242第二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.胚胎移植的概念胚胎移植（embryotransfer,ET）也稱受精卵移植，是指將一頭良種母畜配種后的早期胚胎取出，或者由體外受精及其他方式獲得的胚胎，移植到另一頭同種的生理狀態(tài)相同的母畜體內(nèi)，繼續(xù)發(fā)育成為新個(gè)體，所以又稱之為人工授胎或借腹懷胎。提供胚胎的個(gè)體稱為------供體（donor）接受胚胎的個(gè)體稱為------受體（recipient）2023/6/243第三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2.胚胎移植技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史2.1初始階段1890-1900W.Heape將安哥拉兔和荷蘭兔的受精卵分別移植到比利時(shí)兔的輸卵管內(nèi)，分別獲得仔兔2只。2.2初級(jí)階段1900-1950主要由英美科學(xué)家在家兔、綿羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右。2023/6/244第四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2.3發(fā)展階段1950-1970日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手術(shù)法移植成功。胚胎移植成功率達(dá)70-80%。2023/6/245第五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2.4實(shí)用化初始階段

1970-1980加美開始成立牛胚胎移植公司，1973年牛凍胚移植成功（英）。2.5實(shí)用化研究階段

1982-大規(guī)模胚胎移植、核移植、嵌合體、胚胎分割、性別鑒定、體外受精在英美日德廣泛開展。克隆羊誕生。2023/6/246第六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五3.胚胎移植在畜牧生產(chǎn)上的意義1.提高優(yōu)良母畜繁殖力,加快優(yōu)良品種改良和動(dòng)物育種步伐；2.誘導(dǎo)雙胎；3.瀕危動(dòng)物的拯救與保護(hù)。將胚胎移入同種或近緣種生殖道內(nèi)，以獲得存活動(dòng)物；4.保存遺傳資源、胚胎庫(kù)；5.胚胎移植是胚胎工程操作的重要步驟。2023/6/247第七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五二、胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)與基本原則

1.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)

2.胚胎移植的基本原則2023/6/248第八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.胚胎移植的生理學(xué)基礎(chǔ)成年母畜卵巢上存在數(shù)千到上萬(wàn)個(gè)卵泡，在外源激素作用下，每個(gè)發(fā)情期的卵泡發(fā)育和排卵數(shù)可達(dá)十?dāng)?shù)個(gè)；每個(gè)發(fā)情周期生殖器官都有一個(gè)孕向發(fā)育；早期胚胎處于游離狀態(tài)；胚胎發(fā)育不存在免疫問題；胚胎發(fā)育到一定階段會(huì)與子宮發(fā)生生理和組聯(lián)系；胚胎的遺傳性不受受體的影響；2023/6/249第九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2.胚胎移植的基本原則①種的一致性：供體和受體屬于相同的種②動(dòng)物生理狀態(tài)的一致性：黃體期③解剖部位的一致性：子宮角或者輸卵管2023/6/2410第十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五胚胎移植原則圖解2023/6/2411第十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五三、胚胎移植的技術(shù)程序1、供受體的選擇與飼養(yǎng)管理供體遺傳品質(zhì)優(yōu)秀繁殖性能良好營(yíng)養(yǎng)狀況好，體格健壯無(wú)疾病2023/6/2412第十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五三、胚胎移植的技術(shù)程序受體土種動(dòng)物或者本地品種體格接近，營(yíng)養(yǎng)良好無(wú)疾病繁殖生理特點(diǎn)與供體相似，比如多周期發(fā)情移植前2個(gè)月進(jìn)行編號(hào)和補(bǔ)飼2023/6/2413第十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2.供體超數(shù)排卵SuperovulationorMultipleovulation超排應(yīng)用的主要激素促性腺激素FSH（中科院動(dòng)物所寧波加拿大日本）PMSG（eCG）及APMSG（抗PMSG）LHhCGGnRH（促排3號(hào)）

P4PG（氯前列烯醇Cloprostenol，ICI-80996）三、胚胎移植的技術(shù)程序2023/6/2414第十四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五超排方法：在發(fā)情周期的一定時(shí)期，用PMSG或FSH促進(jìn)卵泡發(fā)育，于發(fā)情開始后12-16h和20-24h各配種（輸精）一次，并于第一次配種后靜脈注射hCG或LH，以便排出多數(shù)卵子。2023/6/2415第十五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/6/2416第十六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五各種動(dòng)物的超排程序牛：供體發(fā)情后913d中的任何一天開始（日本進(jìn)口FSH為9~11天）連續(xù)4d（8次）遞減注射FSH，在FSH注射結(jié)束前1d，上、下午分別注射氯前列烯醇0.6mg和0.4mg綿羊：FSH劑量（150300IU）周期為12天，開始注射，6次3d，遞減，在第4天注射FSH時(shí)，肌肉注射氯前列烯醇0.2mg。2023/6/2417第十七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五山羊：減量法6次注射3d，100IU×1＋75IU×1＋50IU×3＋25IU=350IU或100＋50×4＋25×1=325IU，首次注射后36h撤栓，并在36h和48h分別注射PG0.1mg。各種動(dòng)物的超排程序2023/6/2418第十八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五超排效果好的卵巢黃體2023/6/2419第十九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五超排效果不好的卵巢黃體2023/6/2420第二十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五3.受體的同期發(fā)情對(duì)母畜進(jìn)行同期發(fā)情一般采取兩種手段：一種是延長(zhǎng)黃體期：最常用的方法是進(jìn)行孕激素處理。常用的有孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、炔諾酮、氯地孕酮等。處理方法是皮下埋植、陰道栓、口服和肌肉注射等。另一種方法是縮短黃體期的方法有①注射促性腺激素②注射促性腺激素釋放激素③注射前列腺素等。2023/6/2421第二十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五同期發(fā)情的方法1.孕激素陰道栓法孕激素可通過口服、注射、皮下埋植和陰道放置孕激素緩慢釋放裝置等方法。皮下埋植或陰道放置緩慢釋放裝置使用方便易行、效果可靠、成本低廉，尤其是陰道栓法。2.前列腺素及其類似物處理法對(duì)有功能性黃體的母畜于注射后4896h內(nèi)發(fā)情：一次PG法、二次PG法2023/6/2422第二十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五4、供體配種人工授精自然交配配種次數(shù)應(yīng)比平常多12次2023/6/2423第二十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五5、胚胎回收與鑒定收集胚胎就是在配種或輸精后的適當(dāng)時(shí)間，從超排供體回收其胚胎，以備給受體移植，亦稱胚胎回收或胚胎采集，簡(jiǎn)稱采卵。采卵的效果與采集時(shí)間、方法和檢卵技術(shù)均有關(guān)系。（1）采卵時(shí)間：一般將配種當(dāng)日定為0天，由配種后第二天開始計(jì)算采卵天數(shù)。根據(jù)采集目的不同，決定在第幾天采卵。（2）采卵方法：有手術(shù)法和非手術(shù)法兩種。在大家畜基本上已將手術(shù)法淘汰，但在綿羊、山羊、豬和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由于受解剖特點(diǎn)的限制，一直采用手術(shù)方法。不管用何種方法，一般收集卵子數(shù)只能相當(dāng)于黃體數(shù)的40～80％。

2023/6/2424第二十四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五第一種由宮管結(jié)合部沖向輸卵管。本法沖卵率高，很少損害生殖道。除了豬因?qū)m管結(jié)合部具有閥門樣結(jié)構(gòu)不能采用以外，各種中、小動(dòng)物均可采用。第二種方法是由輸卵管傘沖向?qū)m管結(jié)合部。本法適用于豬，是由一個(gè)插入該處的鈍注射針頭或光滑的細(xì)玻管收集卵子；其缺點(diǎn)是術(shù)后常造成宮角尖端或輸卵管粘連。手術(shù)法采卵2023/6/2425第二十五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五第三種方法是由子宮角尖端沖向子宮角基部。本法用于發(fā)情5天以后收集子宮內(nèi)的卵，其收集數(shù)量比A,B法略少，易引起子宮粘連。沖卵液為杜氏PBS,用量:第一、第二兩種方法用5-l0ml，第三種方法用10-20ml。2023/6/2426第二十六頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五Sμgie創(chuàng)造了一種帶有氣球的非手術(shù)采卵器，可由牛的子宮角采卵，顯著提高了采卵率。Folley和Stewart又相繼改進(jìn)，設(shè)計(jì)出三通路（進(jìn)氣、進(jìn)液、回液）導(dǎo)管采卵器（附圖4），使用更加方便有效，能夠從同一供體反復(fù)收集卵子。沖卵液的用量一般為500ml，裝入輸液瓶?jī)?nèi)，每次放出30-60m1，反復(fù)沖洗子宮角，并回收到集卵杯內(nèi)。沖完一個(gè)子宮角后，再用同法沖洗另一子宮角。非手術(shù)法采卵2023/6/2427第二十七頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/6/2428第二十八頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/6/2429第二十九頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五胚胎的檢查將沖卵液回收之后，盡快置于放大10-15倍的實(shí)體顯微鏡下，檢查收集到的卵數(shù)，并用一細(xì)吸管將卵移至新鮮培養(yǎng)液內(nèi)，在放大40-200倍的復(fù)式顯微鏡下，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，選出適合于移植的正常卵（附圖5）。形態(tài)不正常者（附圖6）及發(fā)育延遲2天以上的卵，都不可用于移植。2023/6/2430第三十頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五顯微鏡下的胚胎2023/6/2431第三十一頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/6/2432第三十二頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五2023/6/2433第三十三頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五胚胎鑒定及短期保存胚胎質(zhì)量鑒定在6080倍立體顯微鏡下。超排處理后，卵巢內(nèi)的卵泡并非同時(shí)排卵，加之超排處理使生殖道內(nèi)的內(nèi)分泌環(huán)境改變，回收到的胚胎發(fā)育程度發(fā)生變化。有的卵子可能未受精或受精后退化。這就需要對(duì)胚胎進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，選出形態(tài)比較正常的胚胎進(jìn)行移植。胚胎分級(jí)A、B、C、D優(yōu)質(zhì)（Excellent）優(yōu)良胚（Good）普通胚（Fair）不良（Poor）胚胎的短期保存常溫保存（2225℃）和低溫保存2023/6/2434第三十四頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五顯微鏡下的胚胎2023/6/2435第三十五頁(yè)，共三十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五6.給受體移植胚胎移植胚胎就是將采取的可用卵移給受體母畜，亦稱卵的移植，簡(jiǎn)稱移卵。移植前受體準(zhǔn)備受體移植前應(yīng)證實(shí)卵巢上有發(fā)育良好的功能性黃體。在羊，有條件時(shí)可以進(jìn)行腹腔鏡檢查，確定黃體數(shù)量、質(zhì)量和在哪一側(cè)；受體在術(shù)前要饑餓1224h術(shù)部在術(shù)前1d剃毛。牛在進(jìn)行非手術(shù)移植前，通過直腸檢查確定是