高效液相色譜法測定咖啡因_第1頁
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高效液相色譜法測定咖啡因第一頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六主要內容一、實驗目的二、實驗原理三、實驗步驟四、注意事項五、數(shù)據(jù)處理第二頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六一、實驗目的1、學習高效液相色譜法分離咖啡因的原理。2、練習高效液相色譜儀的基本操作。3、掌握高效液相色譜法進行定性及定量分析的基本方法。第三頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六二、實驗原理咖啡中含咖啡因約1.2~1.8%,茶葉中含2.0~4.7%,可樂飲料和APC藥片中均含有咖啡因。其分子式為C8H10O2N4,結構式:定量測定咖啡因的傳統(tǒng)分析方法是采用萃取分光光度法。

第四頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六二、實驗原理利用混合物不同組分在固定相和流動相中分配系數(shù)(或吸附系數(shù)、滲透性等)的差異,使不同組分在作相對運動的兩相中進行反復分配,實現(xiàn)分離的分析方法。色譜法第五頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六色譜法分類色譜法氣體超臨界流體氣固色譜(GSC)氣液色譜(GLC)超臨界流體色譜(SFC)膠束電動色譜(MEKC)液液色譜(LLC)吸附色譜(LSC)尺寸排阻色譜(SEC)鍵合相色譜(BPC)離子交換色譜(IEC)親和色譜(AC)毛細管電色譜(CEC)液固色譜(LSC)液體第六頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六高壓泵流動相溶劑廢液色譜柱進樣口檢測器高效液相色譜儀第七頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六保留值定性分析第八頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六校準曲線法定量分析或第九頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六三、實驗步驟1、溶液的配制:

分別取1、2、3、4、5mL100μgmL-1的咖啡因標準儲備液,以超純水稀釋至50mL,即得到20、40、60、80、100μgmL-1的標準溶液。2、繪制標準曲線:待基線平穩(wěn)后,吸取系列標準溶液,分別進樣分析,繪制標準曲線。3、樣品測定:吸取待測樣品進樣分析,根據(jù)其峰面積,依據(jù)標準曲線計算樣品中咖啡因含量。第十頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六1、流動相和樣品溶液需過濾后使用。2、流動相還需脫氣。3、基線平穩(wěn)后才能進樣分析。4、進樣前要清洗微量進樣器。5、實驗結束后要沖洗系統(tǒng)和色譜柱。四、注意事項第十一頁,共十三頁,編輯于2023年,星期六五、數(shù)據(jù)處理1、根據(jù)標準溶液色譜圖進行咖啡因成分的定性;2、繪制標準曲線并打??;2、

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