南京大學(xué)醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)法

任何強(qiáng)大的公司都不會(huì)給員工安全感，而是用最殘忍方式激發(fā)每個(gè)人變得強(qiáng)大！凡是想辦法給員工安全感的公司都?xì)缋?，因?yàn)閺?qiáng)大的人在溫順的環(huán)境失去了狼性！凡是逼出員工偉大的公司都升騰不息，因?yàn)樵谶@種環(huán)境下，要么變成狼，要么被狼吃掉！最不給員工安全感的公司，其實(shí)給了真正的安全感，因?yàn)楸瞥隽怂麄兊膹?qiáng)大，逼出了他們的成長(zhǎng)，也因此有了未來(lái)！如果真的愛你的員工，就考核他，要求他，逼迫他成長(zhǎng)，如果你礙于情面，低目標(biāo)，低要求，養(yǎng)了一群小綿羊、老油條，這是領(lǐng)導(dǎo)對(duì)員工前途最大的傷害！因?yàn)檫@只會(huì)助長(zhǎng)他們的貪婪、無(wú)知和懶惰。讓下屬因?yàn)槟愣砷L(zhǎng)，擁有正確的人生觀，價(jià)值觀，并具備了完善的品行。不斷的成長(zhǎng)，就是主管對(duì)員工最偉大的愛！分子生物學(xué)研究法

-----DNA、RNA及蛋白質(zhì)操作技術(shù)DNA基本操作技術(shù)將某種分子放到特定的電場(chǎng)中，它就會(huì)以一定的速度向適當(dāng)?shù)碾姌O移動(dòng)。某物質(zhì)在電場(chǎng)作用下的遷移速度叫作電泳的速率，它與電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，與該分子所攜帶的凈電荷數(shù)成正比，而與分子的磨擦系數(shù)成反比（分子大小、極性、介質(zhì)的粘度系數(shù)等）。在生理?xiàng)l件下，核酸分子中的磷酸基團(tuán)是離子化的，所以，DNA和RNA實(shí)際上呈多聚陰離子狀態(tài)（Polyanions）。將DNA、RNA放到電場(chǎng)中，它就會(huì)由負(fù)極→正極移動(dòng)。1．核酸的凝膠電泳(Agarose&Polyacrylamide)在凝膠電泳中，一般加入溴化乙錠（EB）--ethidiumbromide染色，此時(shí)，核酸分子在紫外光下發(fā)出熒光，肉眼能看到約50ngDNA所形成的條帶。Ge捷no但me裳D棗NATo貸ta乎l癢RN津A2.聚合棒酶鏈龍反應(yīng)貨技術(shù)在引瓜物指犧導(dǎo)下奮由酶咸催化資的對(duì)鉤特定丑克隆思或基膨因組DN知A序列鐮進(jìn)行蠢的體幕外擴(kuò)街增反妙應(yīng)。PC猶R儀PC四R技術(shù)糕原理類似撕于DN惕A的天孩然復(fù)臥制過(guò)痰程，年其特秤異性鄰依賴定于與幣靶序粥列兩鋼端互嘆補(bǔ)的酸寡核安苷酸脖引物去。模板DN紡A變性功：加熱摸至94電℃左右君，雙我鏈DN德A解離畢成單因鏈；模板DN旬A與引害物的援退火(復(fù)性)：55科℃左右撥，引再物與墳?zāi)０錎N閃A單鏈此的互蜜補(bǔ)序倆列配綢對(duì)結(jié)養(yǎng)合；引物棉的延友伸：在Ta酒q攔DN敗A聚合洗酶作屢用下爪，以dN毫TP為原味料，士靶序移列為痰模板忠，按婆堿基唉配對(duì)姿與半狼保留號(hào)復(fù)制哄原理量，合殿成一殃條新善的雙懸鏈；重復(fù)疾循環(huán)卸變性--退火--延伸門三過(guò)夠程，序使DN女A擴(kuò)增孟量呈束指數(shù)糕上升據(jù)。PC師R掀pr腦od怪uc謙t示例航電泳乓結(jié)果1本2費(fèi)3惱4玻5萄MM：DN蛾A慨ma甘rk圣er1：為肚陽(yáng)性真對(duì)照2：為搶陰性嫂對(duì)照3-舍5：為巷擴(kuò)增蝴出的DN躲A條帶引物義（pr犁im命er）酶游（Ta檢q盈DN懼A吵po行l(wèi)y魂me毒ra電se）dN湯TP（dA燙TP垮,d釀GT丸P,護(hù)dC耕TP妻,d熱TT在P）模板匪（te介mp靠la代te）Mg2+（ma替gn某es回iu保m）反應(yīng)清五要悠素：引物寒設(shè)計(jì)恭的原堆則①引幣物長(zhǎng)踏度：15雙-3形0個(gè)堿怪基，淚常為20個(gè)堿偏基左步右②引緩物擴(kuò)助增跨湊度：漿以50妄0b能p為宜他，特突定條該件下汁可擴(kuò)疊增10板kb的片少段③引滋物堿什基：G+爹C含量飽以40框-6叼0%為宜,嗓AT權(quán)GC最好散隨機(jī)惰分布④避覆免引烈物內(nèi)描或引虧物間箱出現(xiàn)欺二級(jí)賄結(jié)構(gòu)害，避志免兩賞引物照間互吩補(bǔ)，急特別難是3’端⑤引從物3`端的饒堿基愚要求竊嚴(yán)格醬配對(duì)災(zāi)，特充別是山最末襖及倒齊數(shù)第叼二個(gè)躁堿基⑥引夏物中昌可以錯(cuò)加上割合適俊的酶炒切位均點(diǎn)，躬要作劍酶切辦時(shí)加⑦引能物的小特異唐性，翅引物她應(yīng)與漠核酸兼序列協(xié)數(shù)據(jù)仿庫(kù)的宜其它安序列詞無(wú)明呆顯同復(fù)源性引物算“設(shè)然計(jì)”st骨ep照b指y號(hào)st敏epSo她ur綁ce攏:文獻(xiàn)匪；技在線糟軟件/數(shù)據(jù)糠庫(kù)（pr圍im閣er單b構(gòu)an諒k;頸N麗CB假I）下載型序列催（DN魄A,航R撤NA）用Ol梅ig奸o驗(yàn)證腸評(píng)估械引物引物哈確定縣后，磨對(duì)于熔上游日和下療游引接物分獸別進(jìn)栗行Bl懶as示t分析以，酶及沙其濃跳度Ta稻qDN挪A聚合勁酶注：割無(wú)3`→5`方向座的校絮正活滔性[D祝NA復(fù)制1/火109；PC粒R出錯(cuò)醫(yī)率1/話(2肚×1懸04)]一個(gè)拒典型剖的PC昌R反應(yīng)辨約需濾酶量2.井5懇U濃度進(jìn)過(guò)高愛可引叼起非奇特異產(chǎn)性擴(kuò)屆增，崇濃度箱過(guò)低透則合妄成產(chǎn)窗物量盛減少dN功TP的質(zhì)現(xiàn)量與席濃度dN奸TP使用色注意統(tǒng)：1)保存策：使洞用時(shí)熊應(yīng)配增成高團(tuán)濃度孩，小胡量分指裝，-2慘0℃冰凍青保存予。多主次凍能融會(huì)突使dN注TP降解田；2)使用西量：觀在PC舉R反應(yīng)較中，dN淡TP應(yīng)為20饑-2先00爸um柴ol益/L。3)成分咸配比賽：注違意4種dN所TP的濃墾度要例相等跳；模板破（te飽mp獄la矛te）模板霉核酸沒(méi)的量師與純蔑化程鼻度，赴是PC坦R成敗錯(cuò)的關(guān)儲(chǔ)鍵環(huán)閣節(jié)之武一。Mg棵2+濃度1)船Mg2+對(duì)擴(kuò)馬增特漁異性蹦和產(chǎn)參量有塊顯著拼影響:Mg2+濃度筆過(guò)高香，反捷應(yīng)特歉異性殘降低英；濃貢度過(guò)軍低會(huì)綱降低Ta辯qDN柴A聚合塔酶活請(qǐng)性，丘使反畏應(yīng)產(chǎn)悅物減乘少。2)在一池般的PC允R反應(yīng)論中，劍各種dN戚TP濃度裁為20莫0μ李mo塘l/得L時(shí)，Mg2+濃度鉗為1.袖5～2.杯0籠mm標(biāo)ol泉/L為宜撐；熱循裂環(huán)條貫件的狗選擇PC恰R反應(yīng)巨條件:溫度時(shí)間循環(huán)蛙次數(shù)溫度溝與時(shí)竹間的室設(shè)置●接設(shè)置骨變性-退火-延伸叮三個(gè)擱溫度火點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)泉反應(yīng)障中采泛用三憶溫度隸點(diǎn)法欲：1）93假-9尋5℃變性重；2）40偷-6奶0℃退火但；3）70忽-7前5℃延伸●惱對(duì)于寒較短直靶基賠因（御長(zhǎng)度菊為10奇0～30顧0b米p時(shí)）竹可采指用二頃溫度年點(diǎn)法短，朽一般斬采用94兵℃變性咐，65辭℃左右臉退火襪與延竟伸變性溫度虹與時(shí)買間：變性理溫度侍低，詠解鏈灑不完笛全是擇導(dǎo)致PC和R失敗箏的最炎主要悶原因一般93姜℃～94垃℃馬l撒m接in足以轎使模萄板DN窗A變性?若低懂于93娘℃則需始延長(zhǎng)厲時(shí)間?但溫惜度不雁能過(guò)飯高，梁高溫縮慧環(huán)境火對(duì)酶睬的活邊性有躍影響悉。退火(復(fù)性)溫度金與時(shí)篇間：退火悅溫度片是影贊響PC吹R特異扶性的紹較重緣瑞要因乖素退火室溫度頁(yè)與時(shí)右間，亭取決籌于引絞物的饞長(zhǎng)度刻、堿紗基組奸成及殼其濃漢度，圾還有非模板礙的長(zhǎng)短度當(dāng)塊引物生長(zhǎng)度候?yàn)?5兩-2臟0個(gè)堿仇基時(shí)猛，在幅高離浩子強(qiáng)蛙度中敏反應(yīng)劫（如1M魔N段aC弱l）Tm米=弟4（G+軍C）＋2（A+辟T）復(fù)性冷溫度=T帽m值-（5～10型℃）一般30～60探s勇ec，足碌以使飄引物離與模亂板間壩完全社結(jié)合延伸溫度植與時(shí)庫(kù)間：溫度廣：一般70～75粒℃，常用掙溫度轉(zhuǎn)為72絕℃。時(shí)間難：根據(jù)染待擴(kuò)灰增片歡段長(zhǎng)推度而殼定,1K紛b以內(nèi)超的DN廉A片段養(yǎng)，延化伸時(shí)啊間1m團(tuán)in。特異撕性強(qiáng)反應(yīng)棕特點(diǎn)奪：靈敏核度高簡(jiǎn)便習(xí)、快午速對(duì)模渠板的逝純度逗要求捉低常見襖問(wèn)題裂與對(duì)岡策無(wú)擴(kuò)踐增產(chǎn)兄物模板:含有竄抑制暖物，墳含量偶低Bu增ff禍er對(duì)樣何品不砌合適引物賓設(shè)計(jì)件不當(dāng)狠或者柔發(fā)生頓降解退火示溫度撓太高嬌，延睬伸時(shí)合間太什短現(xiàn)象：正對(duì)鼠照有液條帶幼，而路樣品僻則無(wú)非特執(zhí)異性扯擴(kuò)增PC劉R擴(kuò)增凡后出賀現(xiàn)的防條帶怕與預(yù)濁計(jì)的烤大小哪不一園致；或者同時(shí)申出現(xiàn)惡特異惱性擴(kuò)圓增帶去與非材特異江性擴(kuò)吧增帶圖。引物特異首性差,模板或引貿(mào)物濃說(shuō)度過(guò)挎高酶量過(guò)螺多Mg福2+濃度勞偏高退火溫度犧偏低循環(huán)次數(shù)井過(guò)多拖尾現(xiàn)象規(guī)：產(chǎn)霉物在揪凝膠壘上呈Sm吊ea石r狀態(tài)

M

1

2模板不純盾或降呼解Bu繡ff承er不合兩適退火溫度想偏低酶量過(guò)拉多dN材TP、Mg旺2+濃度滔偏高循環(huán)次數(shù)建過(guò)多假陽(yáng)踩性（篩足選轉(zhuǎn)妹基因灶、檢催測(cè)基著因表鞭達(dá)情幟況)原因敘：靶序喬列或殿擴(kuò)增討產(chǎn)物麥的交知叉污客染現(xiàn)象較：空白堵對(duì)照盾出現(xiàn)茫目的線擴(kuò)增廚產(chǎn)物操作伍時(shí)防屆止將虛靶序棗列吸叫入加榮樣槍君內(nèi)或船濺出驕離心績(jī)管外伐；除不怕能耐連高溫候的物華質(zhì)外貿(mào)，所陷有試置劑器篇材均稼高壓膨消毒伙。離物心管贊及槍牲頭等釀一次拒性使鋒用。各種禮試劑般先進(jìn)威行分池裝，帽低溫友貯存牲。*實(shí)時(shí)飽定量PC漿R*晴R樂(lè)T-棋PC謎R席re險(xiǎn)al掉-t刃im塑e級(jí)PC潛R由于PC會(huì)R技術(shù)瘋具有釋極高吐的敏緞感性弟，擴(kuò)寨增產(chǎn)圾物總肅量的搏變異恩系數(shù)兆常常旁達(dá)到10犁%-箱30扎%。20世紀(jì)90年代轟末期扔出現(xiàn)谷了實(shí)畢時(shí)定唐量PC緩R技術(shù)率，利崖用帶唐熒光攔檢測(cè)帶的PC軍R儀對(duì)廁整個(gè)PC熊R過(guò)程儉中的攏擴(kuò)增DN收A的積螞累素僅來(lái)繪穩(wěn)制動(dòng)武態(tài)變稈化圖困，從消而消軋除了策在測(cè)皮定終度端產(chǎn)艙物豐惰度時(shí)攝有較策大變佳異系胳數(shù)的坦問(wèn)題菌。實(shí)時(shí)纏定量PC路R反應(yīng)深在帶遠(yuǎn)透明疏蓋的京塑料劉小管遮中進(jìn)遣行，蟻激發(fā)烘光可棉以直疫接透從過(guò)管溪蓋，瞇使其筍中的厭熒光城探針凱被激朽發(fā)。熒光碧探針面事先競(jìng)被混罵合在PC遇R反應(yīng)世液中藝，只捎有與DN杜A結(jié)合發(fā)后，晶才能甚夠被貓激發(fā)月出熒堂光。裳隨著非新合投成目個(gè)的DN滋A片段睜的增盼加，神結(jié)合云到DN鞋A上的問(wèn)熒光封探針控，即蓋被激態(tài)發(fā)產(chǎn)崖生的厚熒光壞相應(yīng)煤增加哥。實(shí)時(shí)酒定量PC擦R例如廁：熒暖光染款料SY膏BR裕G苗re右en雀Ⅰ僅能闊與雙主鏈DN級(jí)A結(jié)合么，被初激發(fā)箏出綠棟色熒膛光，坡其熒截光強(qiáng)懶度反糧映PC閘R產(chǎn)物格的產(chǎn)毅量。SY律BR忙G斤re謙en所Ⅰ做探順針的廚實(shí)時(shí)膜定量PC登R實(shí)驗(yàn)SY鞠BR左G相re番en睬Ⅰ做探攜針的培實(shí)時(shí)器定量PC原R實(shí)驗(yàn)Ta流qm燒an探針稿法RN擇A基本贏操作頂技術(shù)總RN綢A的提龍取RN畜A提?。核贸馄髅蠼j(luò)和試蜂劑必耕需經(jīng)攤高溫穴滅菌鎮(zhèn)或DE沉PC處理To軋ta陰l蝕RN抗A1.制備RN寒A的關(guān)絲式鍵—防止監(jiān)內(nèi)外錦源RN批as館e的作轟用1)RN覺(jué)as嗚e的特萄點(diǎn)：抓抗酸斷抗堿,具很面廣pH作用猜范圍;抗高姿溫嚴(yán)頂寒(0蕩~6蝕5℃均具鑒活性杠）；裂抗變往性劑2)解決我辦法炸：外偏源RN似as且e—低溫難，焦吉磷酸蜓二乙絨酯(D牲EP竹C)處理攻所有喚溶液更（Tr滲is姨·H夸Cl除外運(yùn)）和珠器皿昨，操索作者主帶手基套內(nèi)源RN遺as裳e—高溫冤抽提澤，強(qiáng)永蛋白逗質(zhì)變酷性劑掉，RN芽as宿e抑制純劑，重蛋白貓酶K等2.總RN什A的制刷備根據(jù)渴所用很蛋白泡質(zhì)變決性劑廁種類婚不一碼樣分貝為以是下三融種制誤備方溪法：1）熱德苯酚押抽提丙法2）胍成鹽法澆：異迷硫氰免酸胍瓶和硫鑼氰酸已胍3）Li癢Cl詠/尿素澇法實(shí)驗(yàn)扣室常四用方住法：腹異硫播氰酸途胍-苯酚最抽提湊法Tr漲iz赤ol試劑敬是使盲用最火廣泛貪的抽院提RN鴉A專用批試劑以，主編要有挺苯酚艱和異硫性氰酸產(chǎn)胍組否成。Tr借iz占o(jì)l試劑翻可以洞迅速出破壞亞細(xì)胞傷結(jié)構(gòu)理，使蛛存在鼓于細(xì)槍胞質(zhì)震及核痰內(nèi)的RN名A釋放鉗出來(lái)置，并節(jié)是核奶糖體離蛋白冬與RN坑A分子男分離歷，還音能保頌證RN慘A的完悔整。使用Tr寨iz駱ol試劑未提取RN居A具體期實(shí)驗(yàn)越過(guò)程材料脹處理液氮廊研磨傻，勻封漿，漲加Tr憑iz乳ol試劑閃，進(jìn)蠟一步尤破碎拴細(xì)胞面并溶觸解細(xì)烘胞成姐分氯仿抽抽提強(qiáng)，離箭心，戶分離發(fā)水相大和有犬機(jī)相收集沿水相異丙棒醇沉帥淀，正得到肥比較齒純的RN敗ARNA的濃度和純度可以通過(guò)測(cè)定其OD和OD來(lái)判斷260280OD為1時(shí)，斑相眼當(dāng)于奸濃度夠?yàn)?0詠μg狼/m呢LOD徐/好OD如果遺在，板表示段所提皇取的RN首A純度勻較好OD犁/度OD低于1.勻8，樣咱品中俊則混黃有蛋蓬白質(zhì)楊或酚盡污染26率026邊026棍028菜028范0mR壁NA的純?cè)捇婧私浼?xì)胞煙的mR干NA分子博最顯但著的勻結(jié)構(gòu)總特征喝是具醉有實(shí)驗(yàn)例中常揚(yáng)用寡宜聚（dT）-纖維到素柱椒色譜擱法獲協(xié)得高參純度mR杠NA。5`端帽壩子結(jié)取構(gòu)—m爪G3`端po趟ly飾A尾巴7寡聚判（dT）-纖維灣素柱羽色譜霧法獲欺得高闊純度mR裳NA當(dāng)RN預(yù)A流經(jīng)濾寡聚能（dT）-纖維殖素柱藍(lán)時(shí)，帖在高柱鹽緩菠沖液必的作卷用下證，mR片NA被特灣異性漆結(jié)合卡在柱衣子上宵，再用也低鹽微溶液葵會(huì)蒸部餾水穗洗脫mR炒NA。經(jīng)過(guò)晶兩次槳寡聚帥（dT）-纖維墊素柱認(rèn)后可印得到處較高喚純度梅的mR機(jī)NA憐.cD顛NA的合曾成主要昨包括燈第一第鏈和憑第二弓鏈cD酬NA的合電成。第一冬鏈cD蒙NA的合帳成是路以mR第NA為模今板，父反轉(zhuǎn)擁錄成cD與NA，由童反轉(zhuǎn)數(shù)錄酶障催化速，該壤酶合度成DN亭A時(shí)需比要引雄物引挺導(dǎo)，侄常用培的引撐物是ol智ig夕o蛙d騰T。ol巡壽ig北o四d路T引物點(diǎn)一般爺包含12奸-2溝0個(gè)脫獵氧胸柄腺嘧源啶核遍苷酸夠，后哀面加裹一個(gè)竟連接積引物瘋（通擁常是Xh腫oⅠ等酶光切位竄點(diǎn)）俗以便般于克撓隆構(gòu)煎建.cD談NA的合愉成DN聞A變異講（eg椅.印SN糾P）的理論與應(yīng)至用DN敢A多場(chǎng)態(tài)性基因殊組DN沿A中,由不披同堿痰基結(jié)硬構(gòu)的等位轎基因所形辱成的服多態(tài)橡性產(chǎn)生礎(chǔ)機(jī)制點(diǎn)蘋突胳變--擠-ＤＮ皺Ａ序亮列多卸態(tài)性插入勇或缺揉失--圍-ＤＮ薯Ａ長(zhǎng)耳度多械態(tài)性存在鳥部位編陡碼商區(qū)非編織碼區(qū)DN兼A遺傳俗標(biāo)記是特側(cè)定的旱堿基郵序列遵循曠孟德婦爾遺更傳規(guī)閉律遺酬傳具有向終身濃不變求的遺境傳特桑征SN饒P指基深因組DN膊A序列詢中由陸于單莊個(gè)核律苷酸昏（A,姻T,投C,慘G）的旋突變站而引爬起的缸多態(tài)秤性。染色螞體DN認(rèn)A同一豎位置舒上的腥每一想個(gè)堿熔基類倘型叫議做一愈個(gè)等殼位位縱點(diǎn)。SN砌P-猛--咸--飯--豆--宏--穿RF蔬LP喬--前--醋--逗--凳--汗--欲--污--病SS杜R(限制惰性片遺段多栗態(tài)性)（微裂衛(wèi)星擇標(biāo)志澤）根據(jù)SN嚴(yán)P在基窩因組杜中的模分布絹位置愚可分奔為：基因厘編碼的區(qū)SN輪P（cS耐NP）基因迎調(diào)控?fù)靺^(qū)SN簽P（pS鞠NP）基因革間隨始機(jī)非寒編碼制區(qū)SN耗P（rS側(cè)NP）同義cS殿NP，即SN績(jī)P所導(dǎo)田致的杯編碼桂序列語(yǔ)改變齡并不餡影響蛛其所礙翻譯胸的蛋墊白質(zhì)惕的氨差基酸庫(kù)序列亮，突遺變堿叛基與朽未突伍變堿顯基的趣含義屋相同非同晌義cS暫NP，即SN騰P所導(dǎo)捏致的拆編碼姑序列脹改變準(zhǔn)可使待以其兼為模道板翻孟譯的夢(mèng)蛋白興質(zhì)的演氨基昏酸序扭列發(fā)循生改迅變，請(qǐng)從而繩影響出蛋白握質(zhì)功能SN蛛P的檢骨測(cè)技然術(shù)常用闊技術(shù)換：限制鋤性酶待切片罷段長(zhǎng)仔度多謹(jǐn)態(tài)性盆（RF只LP）PC喬R-單鏈握構(gòu)象廟多態(tài)需性（PC苦R-豆SS本CP）毛細(xì)笑管電晴泳變性仰高效肢液相努色譜波（DH仗PL槳C）以上技術(shù)蝕僅能姻判斷SN妖P的有望無(wú)，控而不慮能知教道確雜切的睬堿基飯類型歇，只尺有進(jìn)飾行DN蛾A序列停分析萌才能認(rèn)確認(rèn)似所發(fā)什現(xiàn)的SN階P通過(guò)DN判A測(cè)序疼法獲皂得新伍的SN旋PSN詢P的應(yīng)剪用人類堂基因滅單體大型圖緊的繪染制SN樣P與疾琴病易意感基獻(xiàn)因的輩相關(guān)琴性分蛇析當(dāng)一講個(gè)遺蹄傳標(biāo)喘記的敢頻率防在患嬌者中痕明顯娘超過(guò)律非患焰者時(shí)判，就廊表明梨該標(biāo)懲記可著能與榜這種犁疾病綱有關(guān)議。指導(dǎo)照用藥律與藥鎮(zhèn)物設(shè)再計(jì)由于SN大P能夠耽充分賺反映悼個(gè)體哪間的剪遺傳款差異鉛，所航以通窮過(guò)研絞究SN致P與個(gè)冶體對(duì)鬼藥物柄敏感頂或耐兇受的溉相關(guān)律性研挖究，額可能稅闡明妻遺傳醒因素烘對(duì)藥鉗效的睬英系裳那個(gè)瘡，因瘡此可儉能建佳立與稼基因戲型相辯關(guān)的融治療梳方案賀，對(duì)震患者吃施行粉個(gè)性罰化用遠(yuǎn)藥。DN智A變異基因甚量的遣分析雜合覺(jué)性丟羞失（LO鹿H）基因賢拷貝鉗數(shù)的靈分析RN僑A量的迎分析蛋白環(huán)質(zhì)技相術(shù)We獸st途er第n要bl奇ot定義捐：印跡投法（bl盼ot頁(yè)ti餅ng）是春指將降樣品余轉(zhuǎn)移糖到固鑼相載咐體上混，而應(yīng)后利糖用相紀(jì)應(yīng)的按探測(cè)濃反應(yīng)津來(lái)檢厘測(cè)樣畏品的問(wèn)一種額方法雜。19粉75年，So西ut林he剖rn建立夏了將DN館A轉(zhuǎn)移追到硝正酸纖樓維素蔑膜（NC膜）圍上，亮并利投用DN祝A－RN斑A雜交稀檢測(cè)謹(jǐn)特定胡的DN旁A片段執(zhí)的方徑法，需稱為So翠ut覺(jué)he幻玉rn印跡棋法。而后薪人們累用類之似的死方法對(duì)，對(duì)RN然A和蛋許白質(zhì)暴進(jìn)行理印跡堤分析存，對(duì)RN鋤A的印界跡分歌析稱幼為No蠢rt疫h(yuǎn)e巴rn印跡平法，皆對(duì)單纖向電含泳后派的蛋爐白質(zhì)喉分子缺的印組跡分蠟析稱殃為We甲st狠er喪n印跡獸法，峽對(duì)雙質(zhì)向電匹泳后渡蛋白希質(zhì)分洗子的花印跡蓮分析梅稱為Ea斥st蒙er津n印跡融法We浮st股er斃n緩Bl拋ot基本鮮原理在電堂場(chǎng)的臺(tái)作用紙下將亞電泳瘦分離割的多介肽從競(jìng)凝膠盲轉(zhuǎn)移構(gòu)至一追種固時(shí)相支部持體勝，然耍后用潔這種針多肽釀的特況異抗獻(xiàn)體來(lái)暢檢測(cè)斑。We張st首er插n糕Bl阻ot一般唐流程蛋白犁樣品煮的制竟備SD掩S聚丙魚烯酰欄胺凝膠難電泳轉(zhuǎn)膜封閉一抗種雜交二抗霜雜交底物殘顯色通過(guò)俯有機(jī)艘溶劑謙或水渾溶法鍛制備召總蛋差白水溶搜液提忍取法針對(duì)耕水、避稀鹽皆、稀傾酸或歲堿溶功液中鑒的蛋雁白質(zhì)巷。稀疾鹽和裂緩沖梅系統(tǒng)酒的水準(zhǔn)溶液對(duì)蛋厭白質(zhì)棚穩(wěn)定戲性好如、溶斗解度泰大、頁(yè)是提寇取蛋掛白質(zhì)連最常救用的肌溶劑績(jī)。細(xì)胞編裂解河液：50許m寺mo生l/劉L盤Tr攤is籃-H讓Cl漢,處15怠0律mm瘦ol壁/L益N鏟ac欺l疼,5娃m曬mo焦l/逃L翻ED鎖TA腔,洲1%脅NP腎40，0.潑05辣%爐PM鏡SF，2μ貸g/軟mL若A船pr候ot痰in襖in傷,飾0.俯5μ罪g/遭mL陶L議eu監(jiān)pe火pt遺in，pH勢(shì)8.列0有機(jī)射溶劑抄提取海法對(duì)于等分子轟中非婆極性語(yǔ)側(cè)鏈著較多哀的蛋棄白質(zhì)衣可用譽(yù)有機(jī)肢溶劑攏提取襪，包蠅括乙偵醇、丙酮輔和丁炮醇等管。通過(guò)映層析旦或電羊洗脫然法制澆備目桌的蛋濕白蛋白塊樣品褲的制劃備蛋白盾樣品賢的定何量Br籠ad絹fo苗rd法考馬棉斯亮塊藍(lán)G-梳25慌0有紅真、藍(lán)抖兩種醒不同尚顏色魚的形商式，家在一網(wǎng)定濃驚度的生乙醇餐和酸腦性條飄件下步，可福配成今淡紅田色的秋溶液復(fù)，與痰蛋白膛結(jié)合再后形樹成藍(lán)隨色化貓合物很，該適化合聾物在59稻5n挽m處有賣最大煩吸收害值，欠化合寺物顏猴色深腫淺與永蛋白竊的濃劑度高頸低成腥正比砍。(上樣器量)試劑鴿：考晌馬斯講亮藍(lán)靈工作躺液，0.妹1N鹽酸鞋，雙翼蒸水波，蛋殼白標(biāo)親準(zhǔn)液朝（筋將10肢mg硬/m佛l蛋白楚溶液繞稀釋臘至4.別0m催g/上ml瞧,冷3.魯5m幻玉g/俗ml毛,謀3.匙0m黃g/使ml研,接2.蜻5m模g/碧ml梯,憐2.趕0m鼻g/昨ml澡,彈1.件5m譜g/捉ml脫,旁1.冷0m梅g/悼ml軟,恒0.貨5m示g/膽ml。）管號(hào)012345678ddH2O807070707070707070蛋白標(biāo)準(zhǔn)液01010101010101010樣品101010101010101010HCL101010101010101010SD稿S聚丙芹烯酰扛胺凝則膠電貌泳原理：SD躍S是一熟種離桐子性窮的界屢面活只性劑,它有精強(qiáng)離侮子性伙的硫瘦酸根悅離子劍也帶們有疏水揪性的長(zhǎng)鉆碳鏈.當(dāng)SD糠S與蛋小白質(zhì)垮混合免時(shí),它會(huì)舍以其敵碳鏈杏與蛋疫白質(zhì)萍之疏抬水性胺基酸結(jié)誼合將資蛋白禮質(zhì)包例起來(lái),而以蠻硫酸模根離勇子外之露與胃水分攻子作享用.大多沫數(shù)蛋嫂白質(zhì)和SD后S的平各均結(jié)廊合量營(yíng)是1:里1.哲4氧(以重?cái)懒繛檠詥挝?,而蛋謝白質(zhì)樸結(jié)合固定舊比例之SD誕S後,由於SD呆S帶強(qiáng)粥負(fù)價(jià),使蛋愚白質(zhì)當(dāng)原先黑的帶橡電價(jià)調(diào)微不不足道,且每單位河重量萄之蛋筒白質(zhì)題帶電率價(jià)一錢致(c看ha婦rg時(shí)e桿de祥ns考it黨y)揚(yáng),所以既決定咽不同佩蛋白蒼的泳縣動(dòng)速翠率就眾只剩蜓下分探子大腔小一抗項(xiàng)因勁素丙烯偵酰胺騾和N,陜N’慶-亞甲忍雙丙典烯酰術(shù)胺SD責(zé)S配膠玩的Tr汁is緩沖論液TE功ME帳D過(guò)硫喇酸銨(時(shí)間)Tr粱is陡-甘氨恐酸電當(dāng)泳緩吳沖液凝膠條成份凝膠販濃度帝與蛋敵白分秒離范棵圍凝膠濃度（％）線性分離范圍（KD)1512-431016-687.536-945.057-212不同懷聚丙涌烯酰啟胺凝濁膠濃術(shù)度對(duì)稻不同房誠(chéng)分子貴量的蛋白心質(zhì)混另合物固分離墨能力悄的關(guān)酸系5％10％15％294566972002945669720029456697200轉(zhuǎn)膜膜的選擇尼龍膜硝酸纖維素膜封閉非特異性抗體結(jié)合麻煩簡(jiǎn)單快速封閉非特異性抗體結(jié)合價(jià)格昂貴價(jià)格便宜特殊要求下的選擇需要更高的蛋白結(jié)合率（尼龍膜：480μg/cm2

；硝酸纖維素膜：80μg/cm2

）目的蛋白與硝酸纖維膜的結(jié)合能力弱需要更大的機(jī)械強(qiáng)度轉(zhuǎn)膜半干捷法將凝柔膠和么固相考基質(zhì)樂(lè)象三帆明治極一樣捆加在辣用緩捉?jīng)_液澤濕潤(rùn)濾桶紙之妄間，炕電轉(zhuǎn)10－30彎mi掃n。濕法將凝漂膠和允固相遼基質(zhì)撥夾在謝濾紙既中間逮，浸般泡在生轉(zhuǎn)移晌裝置的議緩沖嗽液中花，電棒轉(zhuǎn)45獎(jiǎng)mi姓n或過(guò)抄夜。轉(zhuǎn)膜谷后檢章測(cè)麗春需紅S染色蛋白駁帶出驚現(xiàn)后熱，于苦室溫監(jiān)用去張離子蠢水漂廚洗硝爛酸纖葛維素蜓濾膜，普換水蹤蝶幾次鹽。印度餡墨汁梁染色只用辦于放晚射性見標(biāo)記云抗體熱或放則射性眾標(biāo)記A蛋白俗探針士的We逝st認(rèn)er壇n印跡散過(guò)程份。封閉脫脂養(yǎng)奶粉撿（5％）BS瞇AWe耗st蝴er畢n哥Bl撒ot膜封暢閉液裹（生周物試畏劑公紀(jì)司提乞供）一抗隱、二繪抗孵巡壽育把硝等酸纖頁(yè)維素判濾膜缺放在起密閉瞧塑料父袋或沾者培慨養(yǎng)皿啟中，給根據(jù)棄濾膜雷面積戲以0.券1m凳l/焦cm問(wèn)2的量松加入狡加入句一抗瘡溶液丑與濾膏膜溫飼育。37珍℃一小技時(shí)，4稱℃過(guò)夜減。倒掉粱一抗譜溶液拾，用PB壺S漂洗貪液濾殃膜3次，染每次10崇mi祝n。加入慢用封此閉液卸配制威的二草抗，抱搖床候上緩五慢搖勸動(dòng)，37憑℃一小升時(shí)，4岸℃過(guò)夜旗。倒掉程一抗訓(xùn)溶液殼，用PB巷S漂洗沾液濾黨膜3次，祝每次10贏mi匙n。二抗組與底緞物反福應(yīng)顯折色辣根粱過(guò)氧份化物概酶法奮（HR淘P）堿性犬磷酸云酶法禽（AP）化學(xué)上發(fā)光樹顯色報(bào)法(HR博P)We揀st皺er別n來(lái)Bl鋪ot常見萌問(wèn)題黎分析SD哈S-腦PA額GE電泳膠不強(qiáng)平？凝膠乎漏液統(tǒng)？膠板陜洗刷暑干凈加入AP蘿S和TE農(nóng)ME笨D的量紀(jì)要合漸適加入差試劑僅后搖瘦勻，器使其析充分溫混合陪，防唯止部乎分膠禮塊聚凳合不襯均勻溫度呈合適部，受眠熱不熄均勻紐奉導(dǎo)致樂(lè)膠聚異合不察均勻兩塊很玻璃雅板底像部要擺對(duì)齊條帶緣瑞比正砍常的妻窄？“微笑”或“倒微祖笑”條帶檢？凝膠對(duì)聚合秤不均衰勻，劑灌膠新時(shí)候孤盡量變混合振均勻匙，動(dòng)尋作輕卷緩拔梳涂子要?dú)q迅速婆，清源洗加晚樣孔餡要小皺心，束以免顛把上靜樣帶貪扭曲樣品陣鹽濃藝度過(guò)然高會(huì)夢(mèng)擠壓異其他偽條帶春導(dǎo)致率寬窄建不一暴，純良化樣械品，族調(diào)整以鹽濃身度膠板技底部吊有氣赤泡會(huì)宅影響破電泳晨效果鳥，應(yīng)吊趕走霜?dú)馀輹x。同陶時(shí)注陷意電吳泳槽零裝置惱是否押合適轉(zhuǎn)膜陳及抗抖體檢雀測(cè)凝膠繳腫脹洋或卷沖曲？條帶墓歪斜芝或漂錫移？單個(gè)柔或多竟個(gè)白少點(diǎn)？轉(zhuǎn)膜翅緩沖楊液過(guò)屯熱？可將起凝膠雜在轉(zhuǎn)腰膜之膨前放持到轉(zhuǎn)退膜緩釋沖液羽中浸憐泡5-跳10躲mi孝n電轉(zhuǎn)薄儀長(zhǎng)誕期使賣用導(dǎo)六致海樸綿變抬薄，“三明厲治”結(jié)構(gòu)妻不緊扛湊導(dǎo)驅(qū)致。促可在姥兩塊歌海綿保之間道墊上忘少許山普通綱的草乎紙確保唉膜和伴膠塊訴之間是沒(méi)有茅氣泡緩沖眼液中壤離子車濃度吩太低層，電圓流或?yàn)㈦妷猴執(zhí)啭o。轉(zhuǎn)彎膜過(guò)別程注她意降揪溫背景聚太高膜沒(méi)有均勻浸濕膜或者緩沖液污染封閉不充分抗體與封閉劑出現(xiàn)交叉反應(yīng)抗體濃度過(guò)高

原因?qū)Σ咿D(zhuǎn)膜前用100%甲醇將膜完全浸濕拿取膜與吸水紙時(shí)要戴手套，更換新鮮轉(zhuǎn)膜緩沖液檢測(cè)一抗、二抗與封閉劑是否有交叉反應(yīng)雜交前檢測(cè)一抗、二抗的工作濃度雙向司電泳裳技術(shù)蛋白磨質(zhì)印孫跡法蛋白佩質(zhì)的朵質(zhì)譜抽分析胃技術(shù)雙向盞電泳堤技術(shù)根據(jù)欺蛋白駐質(zhì)的陷兩個(gè)蒼重要炒特性灣：等電至點(diǎn)相對(duì)候分子脆質(zhì)量電泳累設(shè)備垂直夢(mèng)電泳待系統(tǒng)水平斬電泳藍(lán)系統(tǒng)不同錢分子擱量的捕蛋白罰質(zhì)在腸凝膠緣瑞中運(yùn)省動(dòng)示鄭意圖原位許分析免疫具組織廈化學(xué)免疫肢組織哀化學(xué)獅是指塘在組豈織細(xì)的胞原再位通僚過(guò)抗俗原抗蜂體反房誠(chéng)應(yīng)和寺組織凱呈色勇反應(yīng)胡，借雹助可懇見的川標(biāo)記披物，儲(chǔ)對(duì)相鞋應(yīng)的旅抗原爪或抗植體進(jìn)嫂行定扎位、僅定性判和定紛量檢病測(cè)的勺一種逝免疫耗檢測(cè)相方法突。免疫壇組化兔的全昏過(guò)程抗原蠻的提渠取與豪純化免疫領(lǐng)動(dòng)物疼或細(xì)爹胞融閣合，瓣制備尚特異軋性抗腫體及灶純化標(biāo)記幸物與浮抗體量集合烘形成掛標(biāo)記喇抗體標(biāo)本擾的處辟理抗原漸抗體索反應(yīng)介和呈勸色反慘應(yīng)顯微偉鏡下呆觀察堤結(jié)果組織暢抗原抗體標(biāo)記哲物標(biāo)記晃抗體1熒光2酶3親和永技術(shù)4金標(biāo)組織漿抗原免疫張細(xì)胞哭化學(xué)森反應(yīng)求原理厭：＋標(biāo)記飼抗體標(biāo)記縣的抗海原抗素體復(fù)考合物間接垃法直接沒(méi)法兩種朽免疫來(lái)細(xì)胞直化學(xué)跨反應(yīng)疊方法標(biāo)本判的處聞理標(biāo)本音的主窗要來(lái)礎(chǔ)源：至活體喬組織毯、各版種體跟液、糧穿刺謠液、剖培養(yǎng)懼細(xì)胞標(biāo)本狼的固射定與新保存酶消棋化處捏理組織簡(jiǎn)材料晌處理蹲是獲作得良勤好免狹疫細(xì)懂胞組漸織化解學(xué)分耽析的役保障扭，必淡須保亦證要密檢測(cè)屬的細(xì)府胞或恒組織焦取材腥新鮮駝、固隔定即瘋使及灑時(shí)、避形態(tài)勢(shì)保存曉良好壺、抗嫂原物鞠質(zhì)的槽抗原悲性不邊被破輪壞。標(biāo)本溝的固個(gè)定與蟲保存固定楊的目煩的：來(lái)是細(xì)才胞內(nèi)報(bào)蛋白悔質(zhì)凝射固，牲終止飼胞內(nèi)辨酶活知化反但應(yīng)，岔防止皂細(xì)胞凱自溶詢，保臂持細(xì)買胞固背有形癢態(tài)與缺結(jié)構(gòu)慰，防葉止細(xì)賀胞脫案落，誼去除歇干擾血抗原冤抗體視反應(yīng)無(wú)的類鈔脂，盛最主稱要的會(huì)是保竄存組收織細(xì)往胞的展抗原授性，朗在染瘡色和慘反復(fù)凝清洗傷的過(guò)突程中杰使抗廢原不貪致釋妙放。好的盟固定竹劑：（1）能吩快速距固定都抗原（2）防喉止抗克原物御質(zhì)擴(kuò)煎散（3）固叮定后鹽的抗機(jī)原能嬸被抗沖體識(shí)翼別，型不影因響抗觀原抗顫體反杯應(yīng)傅琦拴博F0粒31撥81點(diǎn)02標(biāo)本合的固新定與退保存抗原固定劑固定溫度與時(shí)間蛋白質(zhì)95％乙醇室溫，3～15min免疫球蛋白丙酮4℃，30min酶四氯化磺4℃

，30min激素1％聚甲醛4℃

，4～5h細(xì)菌丙酮、甲醇室溫，3～10min病毒丙酮，無(wú)水乙醇室溫，5～10min四氯化磺4℃

，30～60min類脂質(zhì)10％甲醛室溫，3～10min細(xì)胞懸液1％聚甲醛室溫，2min各種預(yù)抗原引的固藥定標(biāo)本建的固丸定與字保存冰凍孝切片興和石番蠟切忘片時(shí)購(gòu)免疫梯組化晴中最唱常用遞的制澤片方玩法。冰凍降切片霧制片語(yǔ)方法隆簡(jiǎn)單規(guī)，可禿避免少石蠟聯(lián)切片勿因固硬定、燈脫水銅、浸枕蠟等艙步驟忌造成惱的抗沾原損但失。證迅速點(diǎn)冷凍獸可防凡止冰簽晶的游形成哭，避巾免組津織細(xì)課胞結(jié)閉構(gòu)的棄破壞愛。石蠟旁切片秀是觀磚察組駝織細(xì)宿胞結(jié)你構(gòu)的惕理想魔方法屋，可克用于育陳舊悉石蠟倡包埋找材料接的回駐顧性堆免疫蔥組化勒研究但，切贏片薄珍，有霉連續(xù)搖性，育蠟塊倆可長(zhǎng)據(jù)期保禽存，穴但是緊抗原之的保招存量鳳不如銅冰凍網(wǎng)切片較。酶消趨化處刪理石蠟補(bǔ)包埋爺材料切大都拜用甲頭醛固湯定保絡(luò)存，蛋固定薪過(guò)程狡中由驅(qū)于醛臟鍵形毛成致漫使某系些抗評(píng)原決醉定簇柏被封悄閉，淡染色哈不理測(cè)想，茅甚至笑出現(xiàn)層假陰懶性，灰因而得在進(jìn)余行免宅疫組投化反妹應(yīng)之昨前，母需要遇酶消看化處索理切扁片，璃可使踩抗原顛決定顏簇重噴新裸緒露。常用雄的消殿化酶夸有胰星蛋白義酶、豎胃蛋蘇白酶名、蛋逢白酶K等。抗體計(jì)處理禍與保賞存抗體笨是免字疫組荒化技慰術(shù)的趟首要跟試劑距，通么常選昏用的傭高特夸異性主、高軌效價(jià)鞏的第擺一抗壟體為蠢多克州隆抗鋤體。抗體言稀釋磁的原浪則是浸陽(yáng)性瘡（抗污原）往物質(zhì)頭著色斥應(yīng)鮮辮明，細(xì)背景僵應(yīng)錢竟或不片著色窗?？贵w掘效價(jià)城越高垮，孵慣育時(shí)售間越蠟長(zhǎng)，以方法竊越敏幫感抗砌體稀醫(yī)釋度結(jié)應(yīng)越狐高。免疫草染色標(biāo)記電抗體棚與標(biāo)合本中只抗原言反應(yīng)清并形雀成抗余原抗水體復(fù)謀合物睡；用緩棉沖液尺沖洗卻去未抗結(jié)合軍的成港分；直接館在顯似微鏡杠下觀埋察結(jié)者果（棚免疫賽熒光預(yù)直接拼法）萄，或噴待標(biāo)扣本顯遼色后銅再用扁顯微獅鏡觀濱察結(jié)模果（撫免疫鵝酶直洋接法掉）免疫限染色帽是免包疫組拋化技境術(shù)的蝴關(guān)鍵欠步驟伍。免疫嘴染色對(duì)一豬些特高殊的母標(biāo)本雖需進(jìn)賊一步性進(jìn)行勢(shì)處理扭來(lái)增陷加檢扮測(cè)的偶敏感石性和難特異肆性，魔減少注非特惡異性丟干擾末。1.蛋白剃酶消橋化法采用讀蛋白縱酶消蝴化的而目的精是暴每露抗耕原，鍛增加仙細(xì)胞械和組敲織的血通透肯性，狗以利塑于抗喜體與紙抗原加最大絮限度范的結(jié)數(shù)合。常用那蛋白要酶有蜜胰蛋程白酶中、胃疲蛋白惕酶、舅鏈霉點(diǎn)蛋白雀酶等失。2.非特狂異吸能附法免疫贊組化辭技術(shù)劇中非杰抗原堵抗體穿反應(yīng)挨出現(xiàn)蜜的陽(yáng)理性染橋色成法為非行特異圖性染營(yíng)色。偉防止端非特致異性執(zhí)染色祖的有縣效方旨法是鄉(xiāng)豐采用毒與第僵二抗巴體相調(diào)同的泄動(dòng)物掏源血亭清（甜非免稠疫血余清）雙吸附雀封閉勉底物竹煮至緣瑞上的凡帶電凡荷物撕質(zhì)，傍然后準(zhǔn)再進(jìn)宅行抗某原抗柜體結(jié)槐合反福應(yīng)，澡必要中時(shí)也固可采長(zhǎng)用2%左右申的牛叨或人吩白蛋梨白封盯片，鄰減少宋非特昏異性迷染色襯。免疫俱組化稠染色聲中標(biāo)強(qiáng)識(shí)物驕的選庸擇用量冤微小奔，容鴨易在血光鏡鹿或電直鏡下慮識(shí)別機(jī)體去內(nèi)無(wú)穿同一膛物質(zhì)描或類喜似物運(yùn)質(zhì)物理酷或化砌學(xué)性鍵質(zhì)穩(wěn)姥定，航可與順抗原靈或抗序體結(jié)鳳合，福其結(jié)支合物視也穩(wěn)顫定目前艙常用族標(biāo)識(shí)闊物質(zhì)趙有熒兇光色誰(shuí)素、卷放射偷性同陸位素廳、重威金屬貢、微奮粒子著、酶清等設(shè)立抬對(duì)照豬實(shí)驗(yàn)為確譽(yù)定結(jié)秧果的岡可靠狀性，傍在實(shí)厭驗(yàn)中償必須絲式設(shè)置舉對(duì)照豬。通纖常是洽針對(duì)精第一提抗體必設(shè)立盯對(duì)照事，包蠟括陽(yáng)敬性對(duì)匠照、納陰性宗對(duì)照樂(lè)、替肢代對(duì)窮照、區(qū)空白眾對(duì)照糕、自擺身對(duì)惱照和寫吸收正試驗(yàn)零等。（1）陽(yáng)預(yù)性對(duì)磨照用一哈直抗徑原陽(yáng)孤性的鍬切片賣與待慣測(cè)標(biāo)土本同逼時(shí)進(jìn)依行免央疫細(xì)捉胞化衛(wèi)學(xué)染帶色，廉陽(yáng)性媽對(duì)照昏應(yīng)呈槐陽(yáng)性榴結(jié)果賴，即養(yǎng)為陽(yáng)楚性對(duì)屈照。（2）陰心性對(duì)鐮照用不龜含一物直抗錦原的桐標(biāo)本森作對(duì)贈(zèng)照，咱實(shí)驗(yàn)扎結(jié)果堂為陰淺性，革即為聰陰性辦對(duì)照能。陰恐性對(duì)蔬照中襯還包崇括空銷白對(duì)止照、練替代班對(duì)照漆、吸廣收和孝抑制旦對(duì)照煎等，蓬用以湖排除豪假陽(yáng)面性結(jié)址果。免疫輛組化大的結(jié)就果判粗?jǐn)嗳旧禺愋匀旧翘禺愋匀旧@色部位特定細(xì)胞或間質(zhì)細(xì)胞和間質(zhì)均勻染色或更強(qiáng)顯色定位特定，具有結(jié)構(gòu)性無(wú)特定部位，無(wú)結(jié)構(gòu)性顯色程度同一部位呈不同程度顯色無(wú)分布規(guī)律，某一片均勻著色免疫懼組織律化學(xué)圖的結(jié)永果判挖斷應(yīng)舊非常塊嚴(yán)謹(jǐn)希，陽(yáng)挑性細(xì)宵胞的仰染色索分布屋有三智種類搖型：疤胞漿藥型、粱細(xì)胞文核型憲和細(xì)向胞膜慶表面封型。邪陽(yáng)性貸細(xì)胞糖顯色塞深淺位可反徐映出順抗原釣的濃潑度，進(jìn)并以爸此作賤為定寄性、皮定量宿和定私位的穩(wěn)依據(jù)圓。陽(yáng)性污細(xì)胞瞧的染墻色?？囟ㄎ怀钣诩?xì)塵胞，裂并于謀陰性閱細(xì)胞港間有新明顯賞間隔會(huì)，而吳非特貓異性糞染色蟲常不偉限于妹單個(gè)晨細(xì)胞哭，而嘆是累野及一步片細(xì)悠胞，山兩者族可由念顯著屈區(qū)別趣。幾種抽常用狠的免主疫組分化檢屋測(cè)技衫術(shù)熒光瓦免疫劍組織舊化學(xué)屑技