最低檢測限與教學(xué)課件

最低檢測限與31、園日涉以成趣，門雖設(shè)而常關(guān)。32、鼓腹無所思。朝起暮歸眠。33、傾壺絕余瀝，窺灶不見煙。34、春秋滿四澤，夏云多奇峰，秋月?lián)P明輝，冬嶺秀孤松。35、丈夫志四海，我愿不知老。最低檢測限與最低檢測限與31、園日涉以成趣，門雖設(shè)而常關(guān)。32、鼓腹無所思。朝起暮歸眠。33、傾壺絕余瀝，窺灶不見煙。34、春秋滿四澤，夏云多奇峰，秋月?lián)P明輝，冬嶺秀孤松。35、丈夫志四海，我愿不知老。最低檢測限與線性范圍試驗(雙縮脲法測定血清總蛋白)教學(xué)要求與目的掌握：1.線性試驗的原理、用途。2.最低檢測限的定義及其評價方法。3.血清總蛋白的測定原理及操作方法。熟悉：1.可報告范圍、分析測量范圍的概念。2.生物檢測限與功能靈敏度的概念。3.血清總蛋白測定的臨床意義。（二）實驗試劑

1、雙縮脲試劑2、標(biāo)準(zhǔn)液

本試劑盒為總蛋白50g/L氫氧化鈉

酒石酸鉀鈉

硫酸銅碘化鉀

（三）操作方法

1、操作參數(shù)：波長：540nm溫度：37℃測定模式：終點法

2.操作步驟（ul）BSUDH2O20標(biāo)準(zhǔn)液20血清20雙縮脲試劑100010001000

混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。3、計算血清總蛋白(g/L)=測定管吸光度標(biāo)準(zhǔn)管吸光度×蛋白標(biāo)準(zhǔn)液濃度（50g/L）參考值：60－83g/L（四）注意事項

嚴(yán)重溶血和黃疸可使測定結(jié)果偏高,可作標(biāo)本空白管消除。2.脂肪乳糜干擾比色，可加丙酮離心。 3.右旋糖酐可使測定產(chǎn)生混濁影響結(jié)果。4.靈敏度較低。1.精密度較好、準(zhǔn)確度較高，WHO推薦方法。（五）方法學(xué)評價3.操作簡便你、快速，成本低廉。2.線性范圍寬（10-120g/L）。（六）臨床意義1.蛋白濃度升高（1）血液濃縮：脫水、外傷性休克等。（2）蛋白質(zhì)合成增加：多發(fā)性骨髓瘤、免疫增殖病等。（3）蛋白質(zhì)合成障礙：如肝臟疾病。（1）蛋白丟失：如腎病綜合征。2.蛋白濃度降低（2）攝入不足：營養(yǎng)不良。

二、檢測低限試驗檢測低限（LLD）：指當(dāng)標(biāo)本中不含有待測分析物時，反應(yīng)響應(yīng)量可能出現(xiàn)的數(shù)值范圍，即單次測量可達(dá)到的非空白檢測響應(yīng)量對應(yīng)的分析物量。生物檢測限（BLD）：某樣品單次檢測可能具有的最小響應(yīng)量剛大于空白檢測低限響應(yīng)量時，該樣品內(nèi)含有的分析物濃度或其它量值。功能靈敏度（FS）：以日間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度確定為檢測系統(tǒng)或方法可定量報告的分析物的最低濃度或其它量值。（一）原理

選擇合適的空白標(biāo)本，該標(biāo)本與待測標(biāo)本的區(qū)別在于不含有待測物質(zhì)，一般用處理過的標(biāo)本或一般標(biāo)本，在分析步驟中省去關(guān)鍵試劑或操作。本次實驗采用蒸餾水作為空白標(biāo)本，采用雙縮脲法進(jìn)行多次測定，求出吸光度的均值及標(biāo)準(zhǔn)差，計算最低檢測限。（二）操作步驟（ul）BSU（1----10）DH2O20標(biāo)準(zhǔn)液20雙縮脲試劑100010001000

混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。（三）計算1.計算10次測定的平均吸光度及標(biāo)準(zhǔn)差。2.計算最低檢測限：平均吸光度+3S3.將吸光度值轉(zhuǎn)換成濃度單位。LLD=A低/A標(biāo)×C標(biāo)可報告范圍（RR）：指可以報告的所有結(jié)果的范圍，包含兩種類型的范圍，即分析測量范圍和臨床可報告范圍。三、線性范圍試驗分析測量范圍（AMR）：指對沒有進(jìn)行任何預(yù)處理（稀釋、濃度等）的標(biāo)本，由檢測系統(tǒng)直接測量得到的待測物的可靠結(jié)果范圍，在此范圍內(nèi)一系列不同樣本分析物的測量值與其實際濃度（真值）呈線性比例關(guān)系。也即線性范圍。臨床可報告范圍（CRR）：指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍，患者樣本可經(jīng)稀釋、濃縮或其它預(yù)處理。（一）原理

線性范圍是指系統(tǒng)最終輸出值（濃度或活性）與被分析物濃度或活性成比例的范圍。線性范圍的測定即測定濃度曲線接近直線的程度，它反映整個系統(tǒng)的輸出特征。

本試驗使用不同濃度的總蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，用雙縮脲試劑測定各自的濃度，以標(biāo)準(zhǔn)液預(yù)期濃度為橫坐標(biāo)，測得濃度為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，即可繪制出一條直線，即計量反應(yīng)曲線。（二）試劑1.蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（50g/L）2.混合血清（100g/L）3.雙縮脲試劑（三）操作步驟

各測定管均測定雙份，混勻，37℃水浴10分鐘，在540nm波長處，用空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。（ul）BSU1U2U3U4U5DH2O20161284標(biāo)準(zhǔn)液20血清48121620試劑1000100010001000100010001000（四）記錄實驗數(shù)據(jù)（五）評價1.目測法：是評估幾個不同濃度樣本的多次測量均值與實際值之間是否具有肉眼上的直線關(guān)系。沒有用到統(tǒng)計學(xué)方法來驗證線性。

2.平均斜率法：是采用最小二乘法直線回歸作統(tǒng)計分析方法。以總蛋白濃度預(yù)期值為橫坐標(biāo)，測定值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，若所有實驗點在坐標(biāo)紙上呈明顯直線趨勢，建立回歸方程y=a+bx，要求a接近于0，b在0.97~1.03之間，若滿足此條件，則可直接判斷該測定方法是否在所要求的線性范圍。若a較大，b>1.03或<0.97則認(rèn)為在高濃度或低濃度處的實測值和預(yù)期值間有較大偏差。試著舍去某組數(shù)據(jù)，另作回歸分析，直到a接近于0，b在0.97~1.03之間，此時縮小的分析范圍是真實的可報告范圍。下次課預(yù)習(xí)內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（賴氏法測定ALT)謝謝！6、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力?！官e諾莎

7、自知之明是最難得的知識?！靼嘌?/p>

8、勇氣通往天堂，怯懦通往地獄?！麅?nèi)加