氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定金柑中咪鮮胺及其代謝物2,4,6-三氯苯酚

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定金柑中咪鮮胺及其代謝物2,4,6-三氯苯酚

金柑橘，又名金橙色，皮細(xì)膩脆。它具有獨(dú)特的油膩風(fēng)味和刺激性。它充滿了vc和維生素，深受人們喜愛。咪鮮胺又稱撲霉靈、丙滅菌、施?？耍沁溥蝾悘V譜農(nóng)藥殺菌劑，其抑制麥角甾醇的生物合成，對(duì)多種作物子囊菌和半知菌病害的防效顯著，其可防治稻瘟病、葉斑病、赤霉病、炭疽病、褐斑病、蒂腐病、青綠霉病、黑腐病等病害蘋果本實(shí)驗(yàn)中的金柑經(jīng)3種質(zhì)量濃度咪鮮胺溶液、2種浸泡時(shí)間進(jìn)行保鮮處理。實(shí)驗(yàn)建立氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gasu2005chromatography-tandemu2005massu2005spectrometry,GC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定金柑中咪鮮胺和2,4,6-三氯苯酚含量的方法，并采用該方法分別測(cè)定室溫貯藏2u2005h、1u2005d、3u2005d、5u2005d、7u2005d、14u2005d、21u2005d金柑樣品中咪鮮胺和2,4,6-三氯苯酚的含量，分析不同浸泡質(zhì)量濃度和浸泡時(shí)間的處理對(duì)金柑中咪鮮胺及其代謝物2,4,6-三氯苯酚殘留量的影響及其隨時(shí)間變化的動(dòng)態(tài)特征，并評(píng)估浸果安全期后金柑中咪鮮胺和2,4,6-三氯苯酚的慢性和急性膳食風(fēng)險(xiǎn)。1材料和方法1.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的合成金柑于2019年1月22—23日采摘自福建省尤溪縣管前鎮(zhèn)。乙酸乙酯、丙酮、正己烷（均為色譜純），氯化鈉、硫酸鎂、PSA、碳黑（均為分析純）天津市科密歐化學(xué)試劑發(fā)展有限公司；咪鮮胺、2,4,6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度均大于98%）北京振翔有限公司；咪鮮胺水乳劑（質(zhì)量濃度為450u2005g/L）江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司。1.2儀器、試劑與儀器GCMS-TQ8050氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀、Rxi-5Silu2005MS色譜柱（30m×0.25mm,0.25u2005μm）日本島津公司；MS3u2005basic高速渦旋振蕩儀德國(guó)IKA公司；FW100粉碎機(jī)天津泰斯特儀器有限公司；AL204天平瑞士梅特勒-托利多公司；AnkeTDL-5A離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠；turboVapu2005LV全自動(dòng)樣品濃縮儀瑞典Biotage有限公司；PD500-TP均質(zhì)機(jī)英國(guó)PRIMA公司。1.3方法1.3.1金柑胺浸泡液的配制挑選完整無缺陷、無蟲咬、無破損的金柑42.0u2005kg（約1680枚）作為備用樣品，每次浸果用樣品3.5u2005kg（約140枚）。咪鮮胺浸泡液配制方法：將質(zhì)量濃度450u2005g/L的咪鮮胺水乳劑用自來水分別稀釋至1000、500、167倍，其質(zhì)量濃度為450、900、2u2005700u2005mg/L。將金柑樣品完全浸入咪鮮胺浸泡液中，每個(gè)質(zhì)量濃度分別取浸泡2、5u2005min的樣品；對(duì)照樣品直接用自來水浸泡。每處理3次重復(fù)（每種質(zhì)量濃度浸泡液平均分成3份，每份浸泡液?jiǎn)为?dú)浸泡金柑，即獲得3份重復(fù)實(shí)驗(yàn)樣品），樣品撈起自然晾干后，置于室內(nèi)20～25℃貯藏。1.3.2樣品的制備保鮮取樣方法按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，分別取浸泡后室溫貯藏2u2005h、1u2005d、3u2005d、5u2005d、7u2005d、14u2005d、21u2005d的樣品。金柑樣品去除柄，取全果，用粉碎機(jī)磨碎，樣品-20℃冷凍貯存。1.3.3ml離心管稱取樣品10u2005g，精確至0.01u2005g于50mL離心管中。加入20mL乙酸乙酯-正己烷（1∶1,V/V），加1u2005gu2005NaCl均質(zhì)處理0.5u2005min，加4u2005gu2005MgSO1.3.4u2005d進(jìn)樣速率氣相色譜條件：程序升溫，于50℃保持1u2005min，以40℃/min的速率升至200℃，再以15℃/min的速率升至250℃并保持3u2005min；進(jìn)樣口溫度250℃，不分流進(jìn)樣，恒壓流量控制120u2005kPa。質(zhì)譜條件：電子電離源，電離能量：70eV，離子源溫度：200℃，接口溫度：250℃。1.4處理數(shù)據(jù)GC-MS/MS測(cè)定數(shù)據(jù)由GCMSsolutionu20054.3軟件處理。農(nóng)藥慢性、急性膳食風(fēng)險(xiǎn)按式（1）、（2）計(jì)算。式中：HQ2結(jié)果與分析2.1u2005.4,6-三氯苯酚loq的測(cè)定通過樣品加標(biāo)逐級(jí)稀釋的方法信噪比為3時(shí)，確定檢出限（limitu2005ofu2005detection,LOD），信噪比為10時(shí)確定定量限（limitu2005ofu2005quantitation,LOQ）。當(dāng)本實(shí)驗(yàn)中咪鮮胺、2,4,6-三氯苯酚的LOD分別為1.70、0.68u2005μg/kg,LOQ分別為5.0、2.0u2005μg/kg。水果蔬菜中咪鮮胺、2,4,6-三氯苯酚的測(cè)定方法已有報(bào)道，其中采用氣相色譜儀測(cè)定咪鮮胺衍生物的LOD為5u2005μg/kg以標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量離子對(duì)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。咪鮮胺Y=3763.645X-69594.76,R準(zhǔn)確度和精密度通過向未檢出咪鮮胺、2,4,6-三氯苯酚的金柑樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液評(píng)估。咪鮮胺添加50、100、500u2005μg/kg共3個(gè)水平，2,4,6-三氯苯酚添加20、50、150u2005μg/kg共3個(gè)水平，每個(gè)濃度水平測(cè)定7次，測(cè)定回收率。咪鮮胺、2,4,6-三氯苯酚的平均加標(biāo)回收率分別為95.7%、98.1%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relativeu2005standardu2005deviation,RSD）分別為5.14%、3.89%。加標(biāo)量的回收率和精密度能滿足本研究要求。2.2高質(zhì)量濃度浸果處理的殘留量實(shí)驗(yàn)分別比較450、900、2u2005700u2005mg/L共3種浸泡質(zhì)量濃度，于2、5u2005min浸泡時(shí)間的金柑中測(cè)定咪鮮胺的殘留消解動(dòng)態(tài)，結(jié)果如圖1所示，3種質(zhì)量濃度浸果處理金柑中咪鮮胺的殘留量較高。在貯藏21u2005d內(nèi)，咪鮮胺的殘留量均大于等于7.44u2005mg/kg,2u2005700u2005mg/L的高質(zhì)量濃度浸果處理的殘留量更高，均大于10u2005mg/kg，其超出GBu20052763—2021《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對(duì)柑橘類水果的最大殘留限量值在20～25℃室溫貯藏，金柑中的咪鮮胺含量先升高后降低，第3天達(dá)到峰值，450、900、2u2005700u2005mg/L咪鮮胺浸泡2u2005min的金柑中咪鮮胺含量分別達(dá)到9.66、12.22、15.43u2005mg/kg。第3天后，咪鮮胺殘留量降低緩慢。按照農(nóng)藥登記推薦使用方法（450u2005mg/L浸果2u2005min）處理金柑，在農(nóng)藥登記第14天的安全間隔期時(shí)，金柑中咪鮮胺的殘留量為8.18mg/kg，小于最大殘留限量值10mg/kg。若高于推薦質(zhì)量濃度的900、2700mg/L分別浸果2min處理，第14天金柑中咪鮮胺殘留量均高于最大殘留限量值。說明金柑咪鮮胺浸果處理應(yīng)嚴(yán)格控制浸泡液濃度，按照推薦濃度或低于推薦濃度浸果處理，金柑的生產(chǎn)質(zhì)量安全才能符合標(biāo)準(zhǔn)。2.3金柑中2,4,6-三氯苯酚含量的測(cè)定如圖2所示，咪鮮胺浸泡的質(zhì)量濃度和時(shí)間均是影響金柑中2,4,6-三氯苯酚殘留的因素。按照咪鮮胺農(nóng)藥登記使用說明方法（450mg/L浸泡2min）處理，浸泡后2h，金柑中2,4,6-三氯苯酚的殘留量為0.028mg/kg，結(jié)果與FangQingkui等隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，金柑中2,4,6-三氯苯酚殘留量逐漸增加，直至21d,2,4,6-三氯苯酚殘留量仍在增加，2700mg/L咪鮮胺浸泡5min的2,4,6-三氯苯酚殘留量達(dá)0.152mg/kg，此結(jié)果與FangQingkui等2.4風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果咪鮮胺作為采后防腐保鮮劑使用，其在柑橘中的農(nóng)藥登記使用安全間隔期為14d。本實(shí)驗(yàn)對(duì)浸泡后貯藏14d的金柑中咪鮮胺攝入風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果如表3所示，監(jiān)管殘留試驗(yàn)殘留中值（supervisedtrialsmedianresidues,STMR）和最大殘留量（highestresidue,HR）為咪鮮胺殘留量與以咪鮮胺計(jì)的2,4,6-三氯苯酚殘留量之和，其中2,4,6-三氯苯酚殘留量按2,4,6-三氯苯酚與咪鮮胺的分子質(zhì)量比197.5∶376.8換算成咪鮮胺。表3中，HQ3金柑中咪鮮胺殘留風(fēng)險(xiǎn)本實(shí)驗(yàn)建立GC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定金柑中咪鮮胺和2,4,6-三氯苯酚的方法，該方法有較低的檢出限、較寬的線性范圍、準(zhǔn)確度和精密度，能滿足金柑中咪鮮胺和2,4,6-三氯苯酚的準(zhǔn)確定性和定量分析。咪鮮胺浸果處理，金柑中咪鮮胺殘留量先升高后緩慢降低，浸泡質(zhì)量濃度越高、浸泡時(shí)間越長(zhǎng)，咪鮮胺殘留量越大；450u2005mg/L浸泡2u2005min，金柑中咪鮮胺殘留量在咪鮮胺安全間隔期14u2005d為8.18u2005mg/kg，小于柑橘最大殘留限量值；更高浸泡質(zhì)量濃度900、2u2005700u2005mg/L，貯藏14u2005d咪鮮胺殘留量均高于最大殘留限量值。直到21u2005d,2,4,6-三氯苯酚含量隨貯藏期的延長(zhǎng)而不斷升高，450u2005mg/L浸泡2u2005min貯藏至第21天時(shí)，金柑中檢出值為0.