保婦康栓對萎縮性支氣管炎模型大鼠陰道上皮細胞修復作用的研究

保婦康栓對萎縮性支氣管炎模型大鼠陰道上皮細胞修復作用的研究

萎縮性陰道也稱為“性陰道”，經(jīng)過期后婦女的發(fā)病率約為45%。從雌激素制劑長期使用的安全角度考慮，臨床上多選擇雌激素配合其他藥物的聯(lián)合用藥方案。保婦康栓對萎縮性陰道炎癥有一定療效，而相關機制報道很少。本研究旨在探討保婦康栓在大鼠萎縮性陰道炎模型中對陰道上皮黏膜的修復機制，為該藥用于萎縮性陰道炎提供依據(jù)。1數(shù)據(jù)和方法1.1sprague-daw采用2020年8月至2020年12月于首都醫(yī)科大學附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院進行相關動物實驗。選取體重在320～350g之間的4個月齡SPF級雌性Sprague-Dawley(SD）大鼠分籠飼養(yǎng)。本實驗經(jīng)中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會（IACUC）審核批準，審批號：ACU19-1613。1.2g/粒國藥保婦康栓（海南碧凱藥業(yè)有限公司，規(guī)格：1.74g/粒，國藥準字Z46020058）主要由莪術油、冰片組成。根據(jù)前期預實驗，保婦康栓大鼠給藥劑量為0.020μg/L/d1.3主試劑兔抗大鼠Toll樣受體（tolllikereceptors,TLR)2及TLR4購自美國cloud-clone公司。1.4實驗方法1.4.1大鼠卵巢前處理40只大鼠隨機分為5組：正常組、模型組、保婦康栓組、雌激素組及復合藥物組，每組8只。大鼠麻醉后在無菌條件下切除雙側(cè)卵巢組織，正常組僅切除卵巢周圍少量脂肪組織。術后第5天行陰道涂片檢查監(jiān)測造模過程1.4.2動物重量和器官指數(shù)稱取大鼠體重、子宮及陰道濕重，器官指數(shù)=器官重量（mg）/體重（g）。1.4.3子宮和陰道的組織發(fā)育子宮及陰道組織應用4%多聚甲醛固定，行石蠟切片HE染色觀察病理學改變，測量陰道黏膜全層厚度及黏膜上皮層數(shù)。1.4.4陰道組織中的tr3-2和tr3-4蛋白免疫組化染色檢測及評分評估TLR-2及TLR-4的表達1.4.5透射電鏡觀察組織超微結(jié)構(gòu)環(huán)氧樹脂包埋的陰道組織塊經(jīng)超薄切片機制成50nm厚電鏡切片，醋酸鈾-枸櫞酸鉛染色，JEM-1200EX透射電鏡下觀察組織超微結(jié)構(gòu)的變化。1.5實驗數(shù)據(jù)的均數(shù)標準差采用SPSS13.0進行數(shù)據(jù)處理，實驗數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示。多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA),P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1重量及器官指數(shù)去勢后大鼠的體重明顯升高（P<0.05），子宮、陰道的重量及器官指數(shù)均顯著下降（P<0.05）。見表1～2。各治療組對陰道重量及器官指數(shù)無顯著作用，而雌激素組及復合藥物組均顯著上調(diào)子宮的重量及器官指數(shù)（P<0.05）。2.2組織病理學檢測正常組大鼠陰道上皮全層結(jié)構(gòu)完整，未見炎細胞浸潤。模型組大鼠陰道壁明顯變薄，陰道黏膜層數(shù)及厚度顯著降低，黏膜層及黏膜下層或全層可見炎細胞浸潤。保婦康栓組、雌激素組及復合藥物組大鼠陰道上皮內(nèi)少許淋巴細胞浸潤，黏膜上皮層數(shù)及厚度顯著增加（P<0.05），且3組在陰道黏膜層數(shù)及陰道上皮厚度差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。2.4陰道組織tlr-2蛋白表達與正常組比較，模型組的TLR-2及TLR-4的表達水平均顯著升高（P<0.05）；與模型組比較，各治療組均能顯著下調(diào)陰道組織中的TLR-2蛋白的表達（P<0.05），各組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與模型組比較，僅雌激素組顯著下調(diào)陰道組織中的TLR-4蛋白的表達（P=0.028），保婦康栓組及復合藥物組較模型組無統(tǒng)計學意義（P=0.104及P=0.085）。3保婦康栓治療渙縮性陰道的臨床效果本研究用去勢大鼠模擬女性絕經(jīng)狀態(tài)陰道黏膜屏障主要由黏液層、上皮糖萼和上皮層3部分組成TLR-2/4在固有免疫反應中發(fā)揮著極其重要的作用，TLR-4主要識別革蘭陰性菌的脂多糖，在正常子宮內(nèi)膜上皮表達，在子宮頸及陰道上皮不表達或表達較低；而TLR-2主要識別革蘭陽性菌的肽聚糖、脂磷壁酸等，在子宮內(nèi)膜的表達低于輸卵管、子宮頸及陰道綜上所述，保婦康栓治療萎縮性陰道炎的療效與雌激素相當，其機制包括：（1）通過促進細胞表面糖萼恢復，增加陰道上皮細胞層數(shù)及黏膜厚度，直接參與受損黏膜屏障的修復（機械屏障）。（2）調(diào)節(jié)TLRs的表達而發(fā)揮其抗炎作用，調(diào)節(jié)陰道局部免疫應答（化學屏障）。2.3細胞外微絨毛樣結(jié)構(gòu)的變化正常大鼠陰道組織中復層鱗狀上皮細胞結(jié)構(gòu)完整，子宮內(nèi)膜表面被覆單層柱狀上皮，連接緊密，胞漿內(nèi)線粒體形態(tài)正常，細胞膜外的微絨毛樣結(jié)構(gòu)表面被覆細胞外衣。模型組中陰道鱗狀上皮變薄，子宮內(nèi)膜上皮中脂質(zhì)變性顯著，兩種