人類X小體Y小體檢測專家講座

試驗九人類X小體、Y小體檢測人類X小體Y小體檢測專家講座第1頁一、試驗?zāi)繕苏莆誜小體、Y小體玻片標片制作方法，繪制X小體、Y小體形態(tài)特征及所在部位。判定個體性別，為深入研究人類染色體畸變與疾病關(guān)系提供基礎(chǔ)方法、為遺傳病臨床診療提供參考。人類X小體Y小體檢測專家講座第2頁二、試驗原理1949年Barr和Bertran在研究貓間期神經(jīng)細胞時，發(fā)覺雌貓體細胞核膜邊緣有一個可被堿性染料染色小體而雄貓沒有。以后發(fā)覺人類正常女性口腔上皮、陰道上皮、皮膚、羊水等細胞中都有一個這么小體，繼而有些人深入發(fā)覺全部哺乳動物雌體細胞中都有一樣一個小體。普通認為這種小體是兩個X染色體中一個在間期發(fā)生異固縮形成，故而將其稱為X小體，X染色質(zhì)，又稱為Barr小體。Barr小體出現(xiàn)在哺乳動物雌性個體細胞細胞核膜邊緣，這主要是因為這條染色體處于失活狀態(tài)所致，Morishima等利用放射性標識方法證實了失活狀態(tài)性染色體與其它異染色質(zhì)（heterochromatin）一樣，在DNA復制時總落后于其它常染色質(zhì)，且大多出現(xiàn)在核膜邊緣。性染色質(zhì)數(shù)目是X染色體數(shù)減1。故能夠依據(jù)X小體有沒有、數(shù)目來判定胎兒性別和性別畸形。Y小體是人類男性體細胞中Y染色體長臂末端顯現(xiàn)明亮小體，是由螢光染料染色后顯示螢光所致。因而稱為Y小體或Y染色質(zhì)。亦可依據(jù)Y小體有沒有、數(shù)目判定胎兒性別和性別畸形

人類X小體Y小體檢測專家講座第3頁三、試驗材料

口腔粘膜（男女）、發(fā)根細胞（女）。

人類X小體Y小體檢測專家講座第4頁四、試驗器具和藥品

1.器具：普通顯微鏡、熒光顯微鏡、恒溫水浴鍋、載玻片、蓋玻片、鑷子、牙簽、濾紙、紗布等。2.藥品：95%乙醇、乙醚、改良堿性品紅、鹽酸喹吖、Macllvaine氏緩沖液、石蠟。人類X小體Y小體檢測專家講座第5頁五、試驗步驟

人類X小體Y小體檢測專家講座第6頁1．X小體觀察

取材:受檢驗者用水漱口數(shù)次，盡可能除去細菌和食物殘渣；用潔凈牙簽從口腔兩側(cè)頰部刮取粘膜，第一次刮取物棄去，將第二次、第三次刮取物涂在潔凈載玻片上。固定:滴加固定液（95%乙醇:乙醚=1:1或直接用乙醇）固定20～30min，空氣干燥。染色制片:滴加1～2滴改良品紅于室溫下染色10～20min（勿使干燥），加上蓋片，墊上濾紙用手指輕輕加壓即可。鏡檢：低倍鏡下計數(shù)100個核膜完整，細胞不重合，無核固縮細胞；并在高倍或油鏡下觀察。若使用女性發(fā)根細胞，需選取帶有毛囊頭發(fā)（約2cm長），再加一滴染液后加上蓋玻片，灑精燈上微熱，靜置5min，后蓋一濾紙壓片。

人類X小體Y小體檢測專家講座第7頁人口腔X小體人類X小體Y小體檢測專家講座第8頁X小體形狀人類X小體Y小體檢測專家講座第9頁2.Y小體觀察

取材固定：

染色制片：制好涂片放入固定液（1份95%乙醇和1份乙醚）固定15～30min；95%乙醇處理20min；0.5%二鹽酸喹吖水溶液染色10min，自來水1min，然后加1～2滴MacIlvaine氏緩沖液（pH5.4～8.0），覆以蓋片。熒光顯微鏡檢驗：用低倍鏡，再用高倍鏡或油鏡觀察。整個細胞發(fā)出熒光者不計。

人類X小體Y小體檢測專家講座第10頁六、試驗結(jié)果

1.X小體：油鏡下可見X小體為一致密濃染小體。輪廓清楚，約1um，常附著于核膜邊緣或靠邊內(nèi)側(cè)，其形態(tài)有三角形、卵形、扁平形等。正常女性間期細胞核中X小體百分比約30%～50%，男性中則偶然可見（2%），且不經(jīng)典。人類X小體Y小體檢測專家講座第11頁六、試驗結(jié)果

2．Y小體：熒光顯微鏡下可見細胞核中有發(fā)亮熒光小體，直徑0.3～0.5um，正常情況下Y小體出現(xiàn)率為25～50%，正常女性無，性異常者，如核型為47，XYY個體，可見兩個Y小體。

人類X小體Y小體檢測專家講座第12頁七、作業(yè)及思索題1.統(tǒng)計X小體頻率，畫2～3個經(jīng)典細胞，示X小體形態(tài)和所處部位。2.計算出現(xiàn)Y小體細胞頻率。3.什么是劑量賠償效應(yīng)？4