2010級中藥資源與開發(fā)

中藥商陸系商陸屬植物商陸(PhytolaccaacinosaRoxb．)和垂序商陸(Phytolaccaameric．)的干燥鞭。別名夜呼，當(dāng)陸，白昌，章柳根，見消 滿．二便不利．臃腫，瘡毒，為歷版藥典收載品種。2從1948年K~nis等從商陸中提取得到一種抗的糖蛋白[11后，國內(nèi)外學(xué)者對商陸1975年Woo等從商陸中分離出一些皂苷類成分，商 phyto—hccagenficacid)l2J隨后，國學(xué)【’ 糖．I(PAP-I)和商陸多糖一Ⅱ(PAP-II)【4l。 【5】分析了商陸的脂溶性成分并鑒定了其中8種組分。分別為2一乙基一正己醇(2一ethyl一1一hexano1)2-甲氧基一4一丙烯基苯酚(2-methoxy-4一propenylpheno1)鄰苯二甲酸二丁蔭(dibutylphthalate)棕櫚酸乙醇(ethylpalmitate)帶狀網(wǎng)翼藻醇(zonaro1)2-單亞油酸甘油醑(2-monolinohin)、油酸乙醇(ethyloleate)、棕櫚酸十四醇(tetradetylpalmitate)。另外．還測定了商陸的微量元素和氨基酸【引，結(jié)果表明商陸中含有16種以上的微量元素，其中銅、鋅、鐵、鈷、錳、鎳、鉻、鉬、釩、硒10種為必須微量元素，鈣、鉀、鎂為必須宏量元15基丁酸，菠菜甾醇，△7一豆甾烯醇。肉蔻豆酸、棕櫚酸等。年Stout等從垂序商陸中得到它的毒性成分商陸毒素(phytolaccatoxin)美商陸皂苷元(phytolaccagenin)【。接著。Woo和Kang分離得到商陸皂苷 果．12一烯．28一酸。另外。美商陸中還含有加利果酸(jaligonicacid)、齊墩果酸(oleanolicacid)、組胺(·tamine)、菠菜甾醇、△7一豆甾烯醇、黃美味草醇(xanthomi．cm1)、美商陸抗蛋白(PAP—R)、美商陸抗真菌蛋白Rl、R2和有絲原(Illitogen)I3J等現(xiàn)將研究較為清楚的商陸和美商陸的皂苷類表1商陸與羹商陸中皂苷類成分的比較商 美商相同成分 E、B、D、G)，美 商陸毒素。2一羥基 商陸皂苷元不同成分 D、FH、K、L、美商陸A、F、Dz、3-氧O、P、Q、J、、．I、、2一代一-nv氧基羰基一23一羥基．30．氫化 丟甲齊j敦桌一12一烯一通過體外實(shí)驗(yàn)商陸皂苷甲EsculentosideA(EsA)對腎細(xì)胞的毒性。方法①采用MTT法檢測商陸皂苷甲對HK-2細(xì)胞(人腎小管上皮細(xì)胞)和Hek293細(xì)胞(人胚腎細(xì)胞)和的影響并計(jì)算IC50值;②以不同濃度的商陸皂苷甲與兩種腎細(xì)胞共培養(yǎng)后，檢測細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(LDH)含量，并采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);③采用Hoechst-PI染色法觀察腎細(xì)胞凋亡;④對腎細(xì)胞內(nèi)氧化指標(biāo)SOD和MDA進(jìn)行檢測;⑤電鏡觀察腎細(xì)胞的損傷情況;⑥采用MDC染色和電鏡觀察檢測腎細(xì)胞發(fā)生自噬的情況。結(jié)果①M(fèi)TT法顯示，商陸皂苷甲對HK-2和Hek293細(xì)胞均有明顯的抑制作用，其IC50分別149．11和351．66μg·ml－1;②150和200μg·ml－1的商陸皂苷甲能升高HK-2細(xì)胞上清中的LDH(P＜0．01)，350μg·ml－1的商陸皂苷甲能升高Hek293細(xì)胞上清中的LDH(P＜0．01)，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)隨著商陸皂苷甲濃度劑量的增加，兩種腎細(xì)胞均有不同程度的變圓、甚至;③Hoechst-PI雙標(biāo)染色結(jié)果顯示，100，150和200μg·ml－1的商陸皂苷甲能使HK-2細(xì)胞不同程度的出現(xiàn)凋亡和壞死的現(xiàn)象，300和350μg·ml－1的商陸皂苷甲能使Hek293細(xì)胞不同程度的出現(xiàn)凋亡和壞死的現(xiàn)象，且以上結(jié)果均存在著一定的量效關(guān)系;④25，50和100μg·ml－1的商陸皂苷甲能使HK-2腎細(xì)胞中SOD和MDA分別出現(xiàn)相應(yīng)的降低和升高、SOD/MDA降低的現(xiàn)象，250，300和350μg·ml－1的商陸皂苷甲能使Hek-293腎細(xì)胞中SOD和MDA分別出現(xiàn)相應(yīng)的降低和升高SOD/MDA降低的現(xiàn)象;⑤電鏡觀察發(fā)現(xiàn)、 g·ml－1的商陸皂苷甲能損傷HK-2腎細(xì)胞的細(xì)胞器并使細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，250，300和350μg·ml－1的商陸皂苷甲能損傷Hek-293腎細(xì)胞的細(xì)胞MDC6．2512．5，25和50μg·ml－1商陸皂苷甲組的HK-2腎細(xì)胞熒光強(qiáng)度均略有增加200，250300μg·ml－1Hek-293觀察發(fā)現(xiàn)以上各組的腎細(xì)胞中均不同程度產(chǎn)生大量空泡出現(xiàn)融和自噬現(xiàn)象式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期；蛋白免疫印跡法(Westernblotting)檢測CDK2、P27的作用rGMC48h后明顯抑制其增殖；IL一117減少了rGMC的G1期細(xì)胞數(shù)并增加了S導(dǎo)的rGMC的G期的細(xì)胞數(shù)并減少了s期的細(xì)胞數(shù)，抑制了IL一1B誘導(dǎo)的rGMC的CDK2的表達(dá)，并促進(jìn)了P27的表達(dá)。結(jié)論rGMC可能是EsA的作用靶細(xì)胞，EsA通／L，10mg／L，20mg／L)刺激rGMC，并設(shè)對照組(不加藥物干預(yù))，4一甲基偶氮四唑藍(lán)(multiply—tabletournamentMTT)法檢測其對rGMC結(jié)果與正常對照組比較EsA(25～5mg／L)作用4872h能夠顯著抑制誘導(dǎo)的rGMC的增殖(P<005或P<001)(0625～20mg／L)內(nèi)EsA對rGMC無明顯細(xì)胞毒性作用(P>005)EsA(25～5mg／L)可顯著抑制rGMC的增殖；腎小球系膜細(xì)胞可能是EsA的作用靶細(xì)胞。對銀屑病患者外周血單個核細(xì)胞產(chǎn)生α腫瘤壞死因子和可溶性2受泌腫瘤壞死因子(TNF-α)和可溶性2受體(SIL-2R)水平的影響，探討其治員，利用EsA分別與脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)協(xié)同刺激PBMC，用雙抗體夾心ABC-ELISA檢測PBMCPBMC釋放可能商陸治療銀屑病的機(jī)制之一。美洲商陸抗蛋白(pokeweedantiviralpro．tein，PAP)是從美洲商陸屬植物phytolaccaacinosa中分離和純化出來的一類具有酶功能的核糖體單鏈?zhǔn)Щ畹鞍?ribosome．inactivatingproteins，RIP)。由于PAP具有特異的細(xì)胞毒特性，具細(xì)白質(zhì)合成的抑制作用以及廣譜抗生物活性。近年來，國內(nèi)外學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，PAP對黃瓜花葉(cuculnb~rmosaic，CMV)、煙草花葉(tobaccomo．saic,，TMV)、南方菜豆花葉(SOU山embeanmosaic，SBMV)、煙草壞死(tobacconecrosis，TNV)等多種“]、脊髓灰質(zhì)炎n、人免疫缺陷 6I”等的。 PAP是從美洲商陸或葉子中提取的一種具有廣譜抗活性的蛋白。體外研究發(fā)現(xiàn)，PAP抗HIV能力與齊多夫定相當(dāng)]。本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建PAP真核表達(dá)質(zhì)粒，將其與具有能力的1．3倍HBV克隆pHBV1．3共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞以研究PAP呤作用。本研究結(jié)果顯示，PAP對HBsAg、HBeAg、HBV均有劑量依賴性抑制到抑制，從而HBsAg和HBeAg水平降低。另一方面由于前組3．5kbmRNA受抑制，以它為模板逆轉(zhuǎn)錄合成的全長HBV負(fù)股和其轉(zhuǎn)譯的多聚反轉(zhuǎn)錄酶也受 究發(fā)現(xiàn)，PAP還能切割超螺旋pBR322ds _4，表現(xiàn)出不可逆的拓?fù)涫Щ钭饔?。HBVccc也是共價閉合環(huán)狀的超螺旋，從理論上推測，PAP也可能通過使ccc模板拓?fù)涫Щ疃l(fā)揮抗HBV作用。PAP抗HBV的作用機(jī)制及其對HBVccc察PAP直接滅活CBV：(1)連續(xù)作用6dPAP對Hela細(xì)胞的50％毒性(2)d01濃度的和1000TCID在胞內(nèi)；(3)實(shí)驗(yàn)的第4,5、6d，0．1至25mg／L-3濃度的PAP作用于了CVB的Hela細(xì)胞發(fā)生了病變結(jié)論在體外細(xì)胞培養(yǎng)上，【1】，，商陸化學(xué)成分和藥理作用的(山西醫(yī)學(xué)藥學(xué)院中草藥教研室太原)【2】，劉星星中藥商陸的藥理及應(yīng)用研【3】，，商陸皂苷甲的腎細(xì)胞毒性作用(中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評價)，【4】印商陸皂苷甲對IL一1l3誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞增殖及CDK2、P27的影響(遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬醫(yī)院腎內(nèi)科