喜樹堿含量測(cè)定方法的改進(jìn)

喜樹堿含量測(cè)定方法的改進(jìn)

氨基乙醇（cpt）是一種抗癌植物藥物，含有糊精環(huán)。其最早是在1966年,由美國(guó)化學(xué)家從喜樹中分離提取而得到純度較高的喜樹堿單體1材料和方法1.1甲基亞和喜樹堿合成制劑喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品(天津希恩思生化科技有限公司);二甲基亞砜(DMSO,天津市永大化學(xué)試劑有限公司);喜樹堿原料藥(天津希恩思生化科技有限公司);去離子水。1.2儀器SQP天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。1.3方法1.3.1喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制精密稱量喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg,加入二甲基亞砜溶解,然后轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中定容,搖勻,即得到濃度為100μg/mL喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液。注意避光,室溫存留備用。1.3.2喜樹堿含量測(cè)定精密稱量喜樹堿原料藥約10mg,加入二甲基亞砜溶解,于100mL的量瓶中定容,搖勻,即得喜樹堿原料藥供試品溶液。注意避光,室溫保存?zhèn)溆谩?.3.3喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸收劑測(cè)定精密移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于10mL量瓶中,然后分別向各個(gè)量瓶中加入二甲基亞砜定容。以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液,在367nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定以上喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度。以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2結(jié)果與分析2.1標(biāo)準(zhǔn)品溶液及二甲基亞的吸收波長(zhǎng)分布在200~400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)溶劑二甲基亞砜和喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行掃描,全波長(zhǎng)掃描結(jié)果見圖1。由圖1可見,喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液在254nm處有最大吸收峰,同時(shí)發(fā)現(xiàn)其在367nm處也有一較大吸收峰;二甲基亞砜在254nm波長(zhǎng)處有明顯吸收,但它在367nm波長(zhǎng)處基本無吸收。因此,試驗(yàn)最終選定367nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。2.2次課中次課外品種以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液,在367nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定“1.3.3”喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度。最終測(cè)定的吸光度依次是0.177、0.357、0.523、0.695、0.855。以喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度x(μg/mL)為橫坐標(biāo),吸光度y為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合線性回歸方程。由此得線性回歸方程為:y=0.0423x+0.0132,r=0.9996。結(jié)果表明,喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在4~20μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(圖2)。2.3甲基亞的測(cè)定準(zhǔn)確量取喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.8mL,共6份,分別置于10mL的量瓶中,加二甲基亞砜定容,以二甲基亞砜溶液為調(diào)零溶液,在367nm處測(cè)吸光度,其結(jié)果見表1。平均吸光度為0.357,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.33%,符合精密度試驗(yàn)要求,說明儀器精密度較好,測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。2.4甲基亞為調(diào)零溶液量取喜樹堿供試品溶液0.8mL共6份,分別置于已編好號(hào)的10mL量瓶中,用二甲基亞砜定容,同時(shí)以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液,在367nm處測(cè)吸光度,試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知,平均吸光度為0.377,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD為0.37%,表明此方法具有良好的重現(xiàn)性。2.5甲基亞的測(cè)定準(zhǔn)確吸取喜樹堿供試品溶液0.8mL,接著轉(zhuǎn)移至10mL的量瓶中,并向其中加二甲基亞砜定容,以二甲基亞砜溶液為空白,在367nm處每隔20min測(cè)定1次吸光度,共測(cè)6次,結(jié)果見表3。由表3可知,平均吸光度為0.357,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.56%,說明此測(cè)定方法穩(wěn)定性較好。2.6標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備取測(cè)得含量的喜樹堿供試品溶液6份,各0.6mL置于10mL的量瓶中,編好序號(hào)。1、2、3號(hào)中分別加入精密量取的喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.6mL,4、5、6號(hào)中分別加入精密量取的喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品0.8mL。接著向各個(gè)量瓶中分別加入二甲基亞砜定容,并且以二甲基亞砜溶液作為空白,在367nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算加樣回收率、平均加樣回收率和RSD,精密度試驗(yàn)結(jié)果見表4。由表4可知,平均加樣回收率為101.76%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.75%,符合加樣回收率要求,說明此方法測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度較好。2.7甲基亞定容準(zhǔn)確量取0.8mL的喜樹堿供試品溶液,置于10mL的量瓶中,加入二甲基亞砜定容。在367nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,平行3次,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可求得喜樹堿原料藥的含量,結(jié)果見表5。由表5可知,喜樹堿原料藥的平均含量為99.10%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.16%。3紫外分光光度法紫外分光光度法是原料藥以及制劑含量測(cè)定常用的分析方法之一。目前對(duì)喜樹堿的含量測(cè)定簡(jiǎn)便快捷的方法是采用紫外分光光度法,采用的測(cè)定波長(zhǎng)為254nm。對(duì)喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,結(jié)果表明,喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品在254nm處有最大吸收峰,同時(shí)它在367nm處也有一較大的吸收峰。結(jié)合唐明珠采取紫外分光光度法在367nm波長(zhǎng)處測(cè)定喜樹堿原料藥含量時(shí),標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0423x+0.0132,r=0.9996,說明喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品濃度與其在367nm處的吸光度之間具有良好的線性關(guān)系。同時(shí)利用標(biāo)準(zhǔn)曲線和紫外分光光度計(jì)得出喜樹堿原料藥的平均含量為99.10%,并且精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性以及加樣回收率均良好,符合含量測(cè)