早期剝奪對(duì)大鼠行為與海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mrna表達(dá)的影響

早期剝奪對(duì)大鼠行為與海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子mrna表達(dá)的影響

1小鼠海馬中banf表達(dá)變化臨床研究表明，生命早期刺激與成年期高血壓密切相關(guān)。兒童時(shí)期的虐待和忽視、父母的忽視、長(zhǎng)期與父母的分離等早期創(chuàng)傷經(jīng)歷是導(dǎo)致成年期抑郁癥易感病化的重要因素之一。然而，臨床研究無(wú)法提供足夠的證據(jù)證明它們之間的因果關(guān)系（ciru麗，貝瑞，2003）?；谂R床研究的發(fā)現(xiàn),利用生命早期應(yīng)激建立動(dòng)物模型,將有助于探索成年期抑郁癥發(fā)生的病因?qū)W與神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制(Pryceetal.,2005)。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族,是神經(jīng)可塑性的分子標(biāo)記物(Gr?nlietal.,2006)。正常成年大鼠的海馬有著高水平的BDNF蛋白和mRNA表達(dá)(Conner,Lauterborn,Yan,Gall,&Varon,1997),成年期急、慢性應(yīng)激可以降低BDNF在大鼠海馬的表達(dá),對(duì)海馬結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生影響,長(zhǎng)程抗抑郁藥物治療可以促進(jìn)BDNF合成與信號(hào)傳遞(Cirullietal.,2009;Gr?nlietal.,2006;Murakami,Imbe,Morikawa,Kubo,&Senba,2005)。研究表明早期母愛(ài)剝奪對(duì)大鼠BDNF的表達(dá)有著急性與長(zhǎng)期的影響,出生后第9天的Wistar雄性大鼠在經(jīng)歷母愛(ài)剝奪12h和24h后,下丘腦BDNFmRNA表達(dá)顯著下調(diào),在母鼠回窩后12h恢復(fù)正常,雌性大鼠則無(wú)顯著變化(Viverosetal.,InPress),經(jīng)歷母愛(ài)剝奪的大鼠在成年期海馬BDNF表達(dá)顯著下調(diào)(Rocerietal.,2002)。已有的關(guān)于早期剝奪的研究所采用的大鼠種系為Wistar和Fischer大鼠,實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在種系的差別(Leventopoulosetal.,2009;Leventopoulosetal.,2007;Marmendal,Eriksson,&Fahlke,2006;Mintz,Rüdi-Bettschen,Feldon,&Pryce,2005;Rüedi-Bettschenetal.,2005),本實(shí)驗(yàn)采用比較容易獲得的Sprague-Dawley(SD)大鼠,建立早期剝奪模型,首次觀察早期剝奪是否對(duì)SD大鼠的行為與海馬BDNFmRNA表達(dá)產(chǎn)生影響,探討這些影響是否存在性別差異,探討對(duì)海馬不同區(qū)域的BDNFmRNA表達(dá)的影響是否存在差異,為進(jìn)一步探索早期剝奪導(dǎo)致大鼠神經(jīng)可塑性的改變奠定基礎(chǔ),為干預(yù)和應(yīng)對(duì)生命早期應(yīng)激所誘發(fā)的成年期抑郁癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2材料和方法2.1窩新生大鼠的飼養(yǎng)健康懷孕SD大鼠8只,購(gòu)買(mǎi)并飼養(yǎng)于中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。室溫21±2℃條件下飼養(yǎng),相對(duì)濕度為40%~70%,每天保證12h光照(7:00~19:00),大鼠自由飲水?dāng)z食,四周環(huán)境清潔、安靜。在孕鼠生產(chǎn)的當(dāng)天,記為出生后0天(postnatalday0,PND0),對(duì)每窩新生幼鼠進(jìn)行挑選,剔除不健康的幼鼠,每窩保留12只幼鼠,雌雄各半。將8窩新生大鼠隨機(jī)分成兩組,每組4窩:正常對(duì)照組(non-handling,NH)和早期剝奪組(ED)。正常對(duì)照組的4窩幼鼠常規(guī)飼養(yǎng)。早期剝奪組的4窩幼鼠在PND1-14,每天8:00-12:00將單只幼鼠從窩內(nèi)取出,放置于10cm×10cm×10cm的黑色塑料盒內(nèi),在室溫下(21°C))孤養(yǎng)4h,然后放回母鼠窩內(nèi)(Rüedi-Bettschenetal.,2005)。8窩幼鼠在PND21斷乳,分籠常規(guī)飼養(yǎng)。兩組幼鼠按窩別、性別與體重隨機(jī)各挑選16只,雌雄各半,每周稱(chēng)量體重,剩余幼鼠供其它實(shí)驗(yàn)使用。2.2酶標(biāo)儀和bx1顯微鏡ZH-DSX2型大鼠穿梭箱,淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品,BIO-RADModel550Microplatereader酶標(biāo)儀,美國(guó)伯樂(lè)公司產(chǎn)品。BX51顯微鏡,日本Olympus產(chǎn)品。大鼠BDNF酶聯(lián)免疫試劑盒,AdlitteramDiagnosticLaboratories公司產(chǎn)品,大鼠BDNF原位雜交檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。2.3水/純水消耗試驗(yàn)在大鼠PND36進(jìn)行液體消耗試驗(yàn),之后每周進(jìn)行1次,共進(jìn)行5次,檢測(cè)大鼠的快感缺乏。大鼠稱(chēng)量體重,禁食禁水23h后,進(jìn)行糖水/純水消耗試驗(yàn):每只大鼠同時(shí)給予事先稱(chēng)重的兩瓶水,一瓶1%蔗糖水,一瓶純水,60min后,取走兩瓶進(jìn)行稱(chēng)重,計(jì)算每只大鼠的糖水消耗(g)、相對(duì)糖水消耗[糖水消耗(g)/體重(g)×100%]、糖水偏愛(ài)[糖水消耗(g)/(糖水消耗(g)+純水消耗(g))×100%](Bekris,Antoniou,Daskas,&Papadopoulou-Daifoti,2005)。2.4實(shí)驗(yàn)1:兩室環(huán)節(jié)鏡大鼠12w齡時(shí),按窩別與性別在正常對(duì)照組和早期剝奪組大鼠中隨機(jī)挑選對(duì)電擊反應(yīng)較為一致的大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn),每組8只,雌雄各半,檢測(cè)大鼠的習(xí)得性無(wú)助。試驗(yàn)時(shí)室內(nèi)為暗光,均在14:00~17:00之間進(jìn)行,以避免晝夜節(jié)律(circadianvariance)對(duì)大鼠行為的影響。穿梭箱為長(zhǎng)方形盒(50cm×23cm×23cm),中央用一帶門(mén)(7cm×5cm)隔板分成兩室,大鼠可通過(guò)門(mén)在兩室穿梭,箱底部為可通電的銅柵欄(間隔0.5cm),一室接通電源為電擊區(qū),另一室則為安全室,可通過(guò)開(kāi)關(guān)切換兩室的電擊(電擊區(qū)和安全區(qū)可以進(jìn)行切換),頂部有一聲源。實(shí)驗(yàn)分為訓(xùn)練和測(cè)試兩部分(Rüedi-Bettschenetal.,2005):訓(xùn)練時(shí)對(duì)大鼠進(jìn)行100次不可逃避的足底電擊(0.5mA,2s,間隔40±15s),大鼠被電擊后能迅速穿過(guò)中央隔板上的門(mén)進(jìn)入安全區(qū),即為正確的穿梭反應(yīng),大鼠進(jìn)入安全區(qū)后,通過(guò)開(kāi)關(guān)切換,使安全區(qū)成為電擊區(qū),再次進(jìn)行電擊,如果大鼠不再穿梭至安全區(qū),則在一定時(shí)間間隔(40±15s)后再次進(jìn)行電擊,記錄大鼠在100次不可逃避的足底電擊后的穿梭反應(yīng)次數(shù)。48h后進(jìn)行測(cè)試,每只大鼠接受100次以聲音(12s)為條件刺激的足底電擊(間隔40±15s),每次聲音響10s后,給予大鼠2s的電擊,大鼠在聲音響10s內(nèi)進(jìn)入安全區(qū)為主動(dòng)逃避行為,在被電擊后進(jìn)入安全區(qū)為被動(dòng)逃避行為,在被電擊后不能進(jìn)入安全區(qū)為逃避失敗,記錄每只大鼠的主動(dòng)逃避行為(avoidanceresponse)、被動(dòng)逃避行為(escaperesponse)與逃避失敗(escapefailure)次數(shù),將100次電擊分成10×10次進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。2.5腦梗死超早期溶血法檢測(cè)brnf含量穿梭箱試驗(yàn)結(jié)束后第二天,大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,斷頭后冰塊上取腦,分離海馬,用生理鹽水制成10%勻漿,4000rpm離心10min,取上清液,用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)BDNF的含量。2.6大鼠海馬tki的光鏡觀察BDNFmRNA序列為:(1)CTTACTATGGTTATTTCATACTTTGGTTGC;(2)GCTGAGCGTGTGTGACAGTATTAGTGAGTG;(3)ACACTTCTTGTGTATGTACATTGACCATTA。大鼠12w齡時(shí),兩組各隨機(jī)選取6只大鼠,雌雄各半,腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,斷頭后冰塊上取腦,迅速以4%多聚甲醛固定,常規(guī)脫水,透明石蠟包埋,在海馬部位連續(xù)切片,厚度5μm,取其中1套切片進(jìn)行原位雜交,脫蠟至水,3%H2O2室溫10min去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,3%檸檬酸稀釋的胃蛋白酶消化,加地高辛標(biāo)記的BDNF寡核酸探針雜交,封閉,滴加生物素化鼠抗地高辛,滴加SABC(StreptAvidin-BiotinComplex),滴加生物素化過(guò)氧化物酶,3-32二氨基苯聯(lián)胺(DAB)顯色,脫水,二甲苯透明,封片。光鏡觀察以胞漿呈棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞,用不含探針的雜交液作為陰性對(duì)照。在100倍視野下用ImagePro-Plus顯微圖像分析系統(tǒng),測(cè)定海馬CA1、CA2、CA3與齒狀回(dentategyrus,DG)陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值。2.7方差分析結(jié)果數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示,所有數(shù)據(jù)由SPSS13.0forwindows軟件分析處理。采用2×2×7混合設(shè)計(jì)的方差分析比較組別、性別與時(shí)間對(duì)大鼠體重變化的影響,采用2×2×5混合設(shè)計(jì)的方差分析比較組別、性別與時(shí)間對(duì)大鼠液體消耗的影響,采用2×2×10混合設(shè)計(jì)的方差分析比較組別、性別與試驗(yàn)次數(shù)對(duì)大鼠穿梭箱反應(yīng)的影響,采用2×2的方差分析比較組別與性別對(duì)海馬BDNF含量與BDNFmRNA表達(dá)的影響。p≤0.05為可接受的顯著水平。3結(jié)果3.1大鼠體重和增長(zhǎng)幅度圖1對(duì)正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠體重隨時(shí)間的變化作了比較,兩組之間存在差異。方差分析結(jié)果表明,正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠體重之間有顯著差異,F(1,14)=14.01,p<0.01。雌雄大鼠體重均持續(xù)增長(zhǎng),在不同時(shí)間(PND22、29、36、43、50、57與64)差異顯著,F(6,84)=762.46,p<0.001,時(shí)間與兩組間的交互作用顯著,F(6,84)=2.75,p<0.05,趨勢(shì)對(duì)比研究發(fā)現(xiàn),隨大鼠逐漸生長(zhǎng),雖然早期剝奪組大鼠體重有所增長(zhǎng),但增長(zhǎng)幅度顯著低于正常對(duì)照組。性別與兩組間交互作用不顯著。3.2正常組與早期剝奪組大鼠的血糖行為特征結(jié)果見(jiàn)表1,2圖2所示為正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠糖水?dāng)z入量的變化趨勢(shì),兩組之間存在差異。方差分析結(jié)果表明,兩組大鼠糖水?dāng)z入量之間有顯著差異,F(1,14)=5.98,p<0.05,正常對(duì)照組糖水?dāng)z入量高于早期剝奪組。大鼠在不同時(shí)間(PND36、43、50、57與64)糖水?dāng)z入量差異顯著,F(4,56)=6.25,p<0.001,雄性與雌性大鼠糖水?dāng)z入量有顯著差異,F(1,56)=15.84,p<0.01,雄性大鼠糖水?dāng)z入量多于雌性大鼠。趨勢(shì)分析表明,正常對(duì)照組雄性、早期剝奪組雌性與雄性大鼠糖水?dāng)z入量表現(xiàn)出隨時(shí)間減少的趨勢(shì),其中早期剝奪組雌性大鼠糖水?dāng)z入最少。但時(shí)間與兩組間、性別與兩組間交互作用不顯著。圖3所示為正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠相對(duì)糖水?dāng)z入量的變化趨勢(shì),兩組之間存在差異。方差分析結(jié)果表明,兩組大鼠相對(duì)糖水?dāng)z入量差異不顯著,F(1,14)=3.38,p=0.088。大鼠在不同時(shí)間相對(duì)糖水?dāng)z入量差異顯著,F(4,56)=71.13,p<0.001,隨著大鼠體重的增長(zhǎng),大鼠的相對(duì)糖水?dāng)z入量表現(xiàn)出隨時(shí)間逐漸下降的趨勢(shì)。時(shí)間與兩組間交互作用顯著,F(4,56)=4.06,p<0.01。雄性與雌性大鼠相對(duì)糖水?dāng)z入量有顯著差異,F(1,56)=8.19,p<0.05,隨大鼠生長(zhǎng),雄性大鼠的相對(duì)糖水?dāng)z入量表現(xiàn)出低于雌性大鼠的趨勢(shì)。性別與兩組間交互作用不顯著。圖4所示為正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠糖水偏愛(ài)的變化趨勢(shì),兩組之間存在差異。方差分析結(jié)果表明,正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠糖水偏愛(ài)差異顯著,F(1,14)=8.19,p<0.01,正常對(duì)照組的糖水偏愛(ài)顯著高于早期剝奪組。糖水偏愛(ài)隨時(shí)間變化無(wú)顯著差異,雄性與雌性大鼠糖水偏愛(ài)差異不顯著,時(shí)間、性別與兩組間交互作用不顯著。3.3大鼠主被動(dòng)逃避行為次數(shù)在訓(xùn)練時(shí),正常對(duì)照組雄性大鼠的穿梭反應(yīng)次數(shù)為84.75±10.24,雌性為83.5±7.94,早期剝奪組雄性為69.00±17.83,雌性為72.50±14.89,兩組大鼠有顯著差異F(1,6)=6.97,p<0.05,早期剝奪組大鼠顯著少于正常對(duì)照組。性別與兩組間無(wú)顯著交互作用。測(cè)試時(shí)大鼠的被動(dòng)逃避行為、逃避失敗與主動(dòng)逃避行為次數(shù)見(jiàn)圖5~圖7。圖5所示為被動(dòng)逃避行為次數(shù)隨電擊次數(shù)的變化趨勢(shì),隨電擊次數(shù)增加,大鼠被動(dòng)逃避行為次數(shù)差異顯著,F(9,54)=5.58,p<0.001,兩組大鼠被動(dòng)逃避行為次數(shù)無(wú)顯著差異,F(1,6)=0.06,p=0.882,雄性與雌性大鼠的被動(dòng)逃避行為次數(shù)差異顯著,F(1,6)=6.08,p<0.05,趨勢(shì)分析表明雄性大鼠隨電擊次數(shù)增加被動(dòng)逃避行為逐漸減少,電擊次數(shù)、性別與兩組間交互作用不顯著。圖6所示為逃避失敗次數(shù)隨電擊次數(shù)的變化趨勢(shì),隨電擊次數(shù)增加,大鼠逃避失敗次數(shù)差異顯著,F(9,54)=6.95,p<0.001,趨勢(shì)分析表明正常對(duì)照組雄性與雌性大鼠、早期剝奪組雌性大鼠逃避失敗次數(shù)隨電擊次數(shù)增加逐漸減少,尤以正常對(duì)照組雄性大鼠表現(xiàn)最為突出,早期剝奪組雄性大鼠逃避失敗次數(shù)隨電擊次數(shù)增加逐漸減少的趨勢(shì)不明顯,兩組大鼠逃避失敗次數(shù)無(wú)顯著差異,F(1,6)=1.67,p=0.244,雄性與雌性大鼠的逃避失敗次數(shù)差異不顯著,電擊次數(shù)、性別與兩組間無(wú)顯著交互作用。圖7所示為主動(dòng)逃避行為次數(shù)隨電擊次數(shù)的變化趨勢(shì),隨電擊次數(shù)增加,大鼠主動(dòng)逃避行為次數(shù)差異顯著,F(9,54)=16.26,p<0.001,趨勢(shì)分析表明兩組大鼠主動(dòng)逃避行為次數(shù)隨電擊次數(shù)增加逐漸增多,兩組大鼠主動(dòng)逃避行為次數(shù)無(wú)顯著差異,F(1,6)=0.33,p=0.588,雄性與雌性大鼠的主動(dòng)逃避行為次數(shù)差異不顯著,電擊次數(shù)、性別與兩組間無(wú)顯著交互作用。3.4大鼠海馬brnf含量方差分析結(jié)果表明兩組大鼠海馬BDNF含量差異顯著,F(1,6)=5.99,p=0.05,早期剝奪組大鼠海馬BDNF含量顯著低于正常對(duì)照組,雄性與雌性大鼠海馬BDNF含量差異不顯著,性別與兩組間交互作用不顯著。結(jié)果見(jiàn)表1。3.5海馬ca1區(qū)、ca3區(qū)和齒狀回brna表達(dá)比較圖8所示為40倍視野下大鼠海馬BDNFmRNA的表達(dá),方差分析結(jié)果表明兩組大鼠海馬BDNFCA1區(qū)和CA3區(qū)mRNA表達(dá)差異顯著,F(1,4)=11.83,p<0.05,F(1,4)=9.75,p<0.05,早期剝奪組大鼠海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)BDNFmRNA表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組,早期剝奪組大鼠CA2區(qū)與齒狀回BDNFmRNA表達(dá)低于正常對(duì)照組,但差異不顯著。雄性與雌性大鼠海馬BDNFmRNA表達(dá)差異不顯著,性別與兩組間交互作用不顯著。結(jié)果見(jiàn)表2。4海馬bcnf蛋白表達(dá)與年齡的變化研究結(jié)果表明,經(jīng)歷早期剝奪的SD大鼠表現(xiàn)出一定的抑郁樣行為。在不同的時(shí)間(PND22、29、36、43、50、57與64),早期剝奪組大鼠體重均顯著輕于正常對(duì)照組,表現(xiàn)出體重增加減慢的趨勢(shì)。液體消耗試驗(yàn)中,在糖水可以直接獲得的情況下,早期剝奪組糖水?dāng)z入量與糖水偏愛(ài)均顯著低于正常對(duì)照組,兩組之間相對(duì)糖水?dāng)z入量差異不顯著,可能是由于早期剝奪組大鼠體重較輕所致,早期剝奪的SD大鼠具有快感缺乏的表現(xiàn)。在采用Wistar大鼠的研究中,經(jīng)歷早期剝奪的Wistar大鼠在自由飲用糖水時(shí)的糖水?dāng)z入量沒(méi)有顯著減少,而是在條件化壓桿獲得糖水的試驗(yàn)中,壓桿次數(shù)顯著減少,獲得獎(jiǎng)賞的動(dòng)機(jī)減弱(Pryceetal.,2005)。在穿梭箱試驗(yàn)中,僅在訓(xùn)練時(shí),早期剝奪組大鼠的穿梭反應(yīng)次數(shù)顯著少于正常對(duì)照組,而在測(cè)試時(shí),正常對(duì)照組與早期剝奪組大鼠的被動(dòng)逃避行為、逃避失敗與主動(dòng)逃避行為次數(shù)均無(wú)顯著差異,未表現(xiàn)出明顯的習(xí)得性無(wú)助行為傾向,這一結(jié)果與Wistar大鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致(Rüedi-Bettschenetal.,2005)。在采用Fischer大鼠的研究中,經(jīng)歷早期剝奪的雄性Fischer大鼠的逃避失敗次數(shù)顯著高于正常大鼠,具有習(xí)得性無(wú)助行為傾向(Pryceetal.,2005)。海馬主要包括齒狀回顆粒細(xì)胞層、CA1、CA2和CA3的錐體細(xì)胞層,在本實(shí)驗(yàn)中,早期剝奪組大鼠海馬BDNF含量顯著減少,海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)BDNFmRNA表達(dá)顯著下調(diào),CA2區(qū)與齒狀回BDNFmRNA表達(dá)則變化不顯著,這一結(jié)果說(shuō)明早期剝奪對(duì)海馬不同區(qū)域的BDNFmRNA表達(dá)有不同的影響。成年的雄性SD大鼠在經(jīng)歷慢性溫和應(yīng)激后,海馬CA1區(qū)和CA3區(qū)的BDNF蛋白表達(dá)不受影響,而齒狀回的BDNF蛋白表達(dá)則明顯下調(diào)(Gr?nlietal.,2006)。越來(lái)越多的證據(jù)表明生命早期應(yīng)激可以下調(diào)海馬BDNF的表達(dá)。Liu等報(bào)道母鼠減少對(duì)幼鼠舔舐和喂食行為會(huì)導(dǎo)致大鼠海馬空間學(xué)習(xí)記憶能力下降,海馬BDNF表達(dá)下調(diào),海馬BDNFmRNA表達(dá)的變化在出生后第8天表現(xiàn)明顯而在成年期并不顯著(Liu,Diorio,Day,Francis,&Meaney,2000)。出生后第14天就過(guò)早斷奶的雄性小鼠在3周齡時(shí)表現(xiàn)出海馬BDNF含量降低,而在5周齡和8周齡時(shí)則變化不顯著(Kikusui,Ichikawa,&Mori,2009)。而Roceri等則發(fā)現(xiàn)在出生后2-14天經(jīng)歷多次母嬰分離的大鼠在出生后第17天海馬BDNF表達(dá)上調(diào),在成年期海馬BDNF含量未表現(xiàn)出顯著的變化(Rocerietal.,2004)。生命早期應(yīng)激如何改變海馬BDNF的表達(dá),BDNF的表達(dá)如何因年齡的增長(zhǎng)、應(yīng)激類(lèi)型的不同或暴露應(yīng)激的時(shí)間長(zhǎng)短而表現(xiàn)出不同的變化,目前尚無(wú)定論(Kikusuietal.,2009)。臨床研究提示BDNF表達(dá)與含量變化是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)病與抗抑郁治療發(fā)揮療效的重要因素。抑郁癥患者血漿BDNF含量顯著降低,并且與自殺行為密切相關(guān),長(zhǎng)程抗抑郁治療后,BDNF含量顯著升高,恢復(fù)至正常水平(Aydemiretal.,2006;Kimetal.,2007;Lee,Kim,Park,&Kim,2007)。尸檢發(fā)現(xiàn)接受長(zhǎng)程抗抑郁藥物治療的患者海馬BDNF蛋白表達(dá)相對(duì)于未接受抗抑郁治療的患者顯著增加(Chen,Dowlatshahi,MacQueen,Wang,&Young2001)。神經(jīng)可塑性假說(shuō)是近年來(lái)繼單胺耗竭假說(shuō)、5-HT1A受體敏感性假說(shuō)之后提出的又一抑郁癥病理生理機(jī)制假說(shuō)。生命早期應(yīng)激可通過(guò)介導(dǎo)神經(jīng)元萎縮、神經(jīng)毒性和影響神經(jīng)再生(neurogenesis)等方式對(duì)海馬的神經(jīng)可塑性產(chǎn)生急性和長(zhǎng)期影響,提高抑郁癥的易感性和嚴(yán)重程度(Fenoglio,Brunson,&Baram,2006)。核磁共振成像(magneticresonanceimaging,MRI)研究表明經(jīng)歷兒童期情感忽視的抑郁癥患者海馬與額葉皮質(zhì)體積減小,兒童期情感忽視與大腦結(jié)構(gòu)改變兩種因素并存的抑郁癥患者表現(xiàn)出更嚴(yán)重的病情(Frodl,Reinhold,KoutsoulerisReiser,&Meisenzahl,2010)。BDNF是神經(jīng)可塑性的分子標(biāo)記物,在急性短期應(yīng)激狀態(tài)下,BDNF表達(dá)快速上調(diào),以保持神經(jīng)平衡,這種快速反應(yīng)是具有適應(yīng)性保護(hù)作用的防御策略,但是慢性長(zhǎng)期應(yīng)激所導(dǎo)致的BDNF表達(dá)下調(diào)則可能對(duì)神經(jīng)可塑性造成有害的影響(Calabrese,Molteni,Racagni,&Riva2009)。在應(yīng)激狀態(tài)下,糖皮質(zhì)激素與BDNF表達(dá)之間可能存在相互影響的綜合機(jī)制,抑制海馬的神經(jīng)發(fā)生(neurogenesis)。皮下注射外源性皮質(zhì)酮21d后大鼠海馬BDNF蛋白水平與CA3區(qū)BDNFmRNA表達(dá)均顯著降低(Jacobsen&M?rk,2006)。在生命早期,大腦處于快速發(fā)展階段,對(duì)應(yīng)激的敏感性高在此期間,應(yīng)激誘導(dǎo)糖皮質(zhì)激素水平升高,BDNF表達(dá)下調(diào),可能導(dǎo)致海馬細(xì)胞萎縮、凋亡和齒狀回顆粒細(xì)胞再生受損,更持久的應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致CA3區(qū)神經(jīng)元萎縮,并最終導(dǎo)致海馬體積減小等形態(tài)變化。在女性的一生當(dāng)中,抑郁癥的發(fā)病率高達(dá)5%~20%;在男性的一生當(dāng)中,抑郁癥的發(fā)病率約為3%~12%,抑郁癥的發(fā)病率存在一定的性別差異(Bebbington,2004)。在本實(shí)驗(yàn)中,對(duì)早期剝奪所導(dǎo)致的SD大鼠抑郁樣行為與海馬BDNFmRNA表達(dá)下調(diào)是否存在性別差異也進(jìn)行了比較,但結(jié)果表明早期剝奪對(duì)SD大鼠的這些影響不存在顯著的性別差異。在本實(shí)驗(yàn)中,早期剝奪導(dǎo)致SD大鼠表現(xiàn)出體重增長(zhǎng)減慢和快感缺乏的抑郁樣行為,但沒(méi)有表現(xiàn)出習(xí)得性無(wú)助行為傾向,早期剝奪對(duì)大鼠行為的影響存在種系的差別。目前的研究表明,在單一種系的大鼠研究中,單一的生命早期應(yīng)激模式不能導(dǎo)致大鼠同時(shí)表現(xiàn)出抑郁癥快感缺乏、習(xí)得性無(wú)助、行為絕望與下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(hypothalamicpituitary-adrenal,HPA)活動(dòng)增強(qiáng)等核心癥狀與神經(jīng)生物學(xué)改變,因此基