鼠疫菌毒力測(cè)定中的錯(cuò)誤概念辨析

鼠疫菌毒力測(cè)定中的錯(cuò)誤概念辨析

害蟲(chóng)是一種自然疾病，發(fā)生在一側(cè)和背面，并能引起人類(lèi)的流行。傳染源主要是嚙齒動(dòng)物,傳播媒介主要是蚤類(lèi)。病原性細(xì)菌致病能力的強(qiáng)弱程度稱(chēng)為毒力。毒力是不同菌株的個(gè)體特征,是指某個(gè)菌株對(duì)某種動(dòng)物能引起某種特異性疾病的能力,是細(xì)菌致病力強(qiáng)弱程度體現(xiàn)。通常病原菌的毒力越大,其致病性就越強(qiáng)。同一種病原菌,它的毒力也有強(qiáng)毒、弱毒和無(wú)毒株之分。鼠疫菌和其他病原微生物一樣,不同的菌株毒力具有明顯的差異。毒力很強(qiáng)的細(xì)菌,只要幾個(gè)菌便可引起易感動(dòng)物發(fā)病或死亡;但毒力弱的即使感染量很大亦不引起易感動(dòng)物發(fā)病。在自然界可以分離到強(qiáng)毒、低毒和弱毒等各種變異型的鼠疫菌株,即使在同一次鼠疫流行和流行的不同時(shí)期所分離的鼠疫菌株,其毒力亦有差異。一般來(lái)說(shuō),在流行的初期和流行高峰期所分得的鼠疫菌毒力較強(qiáng),而流行末期鼠疫菌毒力較弱。另外,就是在同一株強(qiáng)毒菌中也可分離出低毒或弱毒的鼠疫菌變異個(gè)體。在鼠疫監(jiān)測(cè)工作中經(jīng)常從動(dòng)物或人體分離到鼠疫菌株,只要分離到鼠疫菌株就需對(duì)其進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定,其中包括菌株毒力強(qiáng)弱的測(cè)定。在以往的工作中對(duì)鼠疫菌毒力的測(cè)定存在概念的混淆,并且半數(shù)致死量(LD50)計(jì)算公式亦存在弊端。本文擬將在鼠疫菌毒力測(cè)定中涉及到的概念進(jìn)行糾正,并統(tǒng)一LD50的計(jì)算公式和計(jì)算方法,供同仁參考和應(yīng)用。1平均賠償劑量ld50最小致死量(minimumlethaldose,MLD)或稱(chēng)最小致死濃度(minimumlethalconcentration,MLC),系指藥物或微生物在最低劑量組的一群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中引起個(gè)別動(dòng)物死亡的劑量或濃度。半數(shù)致死量(medianlethaldose,LD50)又稱(chēng)半數(shù)致死濃度(medianlethalconcentration,LC50),是指藥物或微生物能引起一群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物50%個(gè)體死亡所需的劑量或濃度。精確的定義指統(tǒng)計(jì)學(xué)上獲得的,預(yù)計(jì)引起動(dòng)物半數(shù)死亡的單一劑量。LD50的數(shù)值越小,表示微生物或毒物的毒性越強(qiáng);反之,LD50數(shù)值越大,微生物或毒物的毒性越低。絕對(duì)致死量(absolutelethaldose,LD100)或稱(chēng)絕對(duì)致死濃度(absolutelethalconcentration,LC100),是指藥物或微生物能引起一群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部死亡的劑量和濃度。2小鼠不得采集總劑量鼠疫菌毒力常用LD50表示,測(cè)定時(shí),豚鼠不得少于5組,每組不得少于3只;小白鼠不得少于5組,每組不得少于10只。感染后飼養(yǎng)觀察不得少于14d,統(tǒng)計(jì)各劑量組死亡數(shù)(系指特異死亡,即在動(dòng)物死亡后有鼠疫病理變化,同時(shí)分離到鼠疫菌),計(jì)算LD50、LD100或MLD。2.1ld50的計(jì)算全國(guó)鼠疫領(lǐng)域內(nèi)以前進(jìn)行毒力測(cè)定時(shí)都是用原教科書(shū)的計(jì)算公式,《鼠疫細(xì)菌學(xué)講義》和《鼠疫病原學(xué)》關(guān)于LD50的計(jì)算公式都是采用試驗(yàn)結(jié)果累計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì),即各組的死亡數(shù)等于劑量小于本組的各組死亡數(shù)加上本組死亡數(shù),計(jì)算死亡率,然后按下列公式計(jì)算:LD50=Da+X50?Ma(Ma+1)?MaDa+X50-Μa(Μa+1)-ΜaDa為累計(jì)結(jié)果中死亡率低于50%的臨界劑量Ma為剛小于50%的死亡率(Ma+1)為剛大于50%的死亡率X為劑量差2.2lgld50的標(biāo)準(zhǔn)誤采用改良寇氏法計(jì)算LD50和可信限,計(jì)算各劑量組死亡率,然后按下列公式計(jì)算:LD50=Log?1[Xm?i(∑P?0.5)LD50=Log-1[Xm-i(∑Ρ-0.5)lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤(Sx50)計(jì)算公式如下:Sx50=i×∑P?∑P2n?1?????????√Sx50=i×∑Ρ-∑Ρ2n-1式中符號(hào):Xm為最大劑量組劑量的對(duì)數(shù)i為相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)劑量之差,即:lgd3-lgd2=lgd2-lgd1P為各組死亡率,用小數(shù)表示,∑P為各組死亡率的總和。n為每組動(dòng)物數(shù)Sx50:lgLD50的標(biāo)準(zhǔn)誤,x50=lgLD50LD50的95%可信限=lg-1(x50±1.96Sx50)LD50的平均可信限=LD50±(LD50高限-LD50低限)/23討論3.1mld100的算法MLD有時(shí)也見(jiàn)試驗(yàn)者提及,但其概念混淆或錯(cuò)誤,可能是沿用其他人的習(xí)慣用法或做法。MLD的正確含義是最低劑量組的一群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中引起個(gè)別動(dòng)物死亡的劑量。也就是說(shuō)在最低劑量組中只要有動(dòng)物死亡,這組劑量就稱(chēng)為MLD,而不是這組動(dòng)物全部死亡。作者見(jiàn)到提及MLD的試驗(yàn)者所用的數(shù)據(jù)則是引起一群實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部死亡的劑量,即LD100的數(shù)據(jù)和概念,也就是將LD100誤說(shuō)為MLD。因此建議做鼠疫菌毒力測(cè)定時(shí)切記更改習(xí)慣的錯(cuò)誤概念和用法,無(wú)論闡述MLD還是LD100都應(yīng)遵循正確的概念。3.250.50計(jì)算公式3.2.1ma2-ma在測(cè)定鼠疫菌毒力時(shí),常用的動(dòng)物是小白鼠,一般要求每組小白鼠為10只。原計(jì)算公式的分子部分是(50-Ma),而Ma為剛小于50%的死亡率。如果在試驗(yàn)中遇到小劑量組無(wú)死亡,而本組死亡數(shù)是50%,或者劑量小于本組的各組死亡數(shù)加上本組死亡數(shù)是50%時(shí),則原計(jì)算公式無(wú)法應(yīng)用,因?yàn)樵?jì)算公式的分子部分(50-Ma),即(50-50)=0。改良寇氏法更適用于LD50的計(jì)算。3.2.2ld50的標(biāo)準(zhǔn)誤計(jì)算及合理性驗(yàn)證改良寇氏法是采用對(duì)數(shù)計(jì)算的形式,即各組的劑量和兩組劑量值之差都是用對(duì)數(shù)進(jìn)行計(jì)算,各組死亡率用小數(shù)表示。使得計(jì)算容易,無(wú)死亡數(shù)是50%時(shí)無(wú)