自身抗體檢測(cè)及應(yīng)用課件

自身抗體的檢測(cè)及意義自身抗體的檢測(cè)及意義自身免疫(autoimmunity)

免疫系統(tǒng)針對(duì)自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng)出現(xiàn)自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞的現(xiàn)象自身抗體(autoantibody)針對(duì)自身組織、器官、細(xì)胞及其成分的抗體。自身免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷或功能障礙所致疾病。免疫系統(tǒng)紊亂

幾個(gè)概念自身免疫(autoimmunity)幾個(gè)概念

自身抗體自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動(dòng)性相關(guān)性參與免疫病理性改變損傷自身抗體自身免疫性疾病的重要標(biāo)志常用的檢測(cè)方法間接免疫熒光法（IIF）ELISA免疫印跡法（Western-blot）酶免疫斑點(diǎn)法常用的檢測(cè)方法間接免疫熒光法（IIF）常檢測(cè)的自身抗體類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）抗核抗體（ANA）抗可提取性核抗原抗體（ENA）抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）抗環(huán)瓜氨酸抗體（CCP）抗心磷脂抗體（ACA）常檢測(cè)的自身抗體類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）類(lèi)風(fēng)濕因子

（RHEUMATOIDFACTOR,RF）

抗變性IgGFc的自身抗體，主要類(lèi)型是IgM型

檢測(cè)方法：

1.膠乳顆粒凝集實(shí)驗(yàn)定性、半定量，敏感性和特異性不高，測(cè)定IgM-RF

2.速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE）定量、準(zhǔn)確、快速，測(cè)定IgM-RF

3.ELISA定量、準(zhǔn)確，可測(cè)定不同類(lèi)型的RF類(lèi)風(fēng)濕因子

（RHEUMATOIDFACTOR,臨床應(yīng)用：

（1）RF在多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病陽(yáng)性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價(jià)>80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時(shí)通常提示患者預(yù)后不良。臨床應(yīng)用：（1）RF在多種自身免疫性疾病患者中均可被檢抗核抗體

（ANTINUCLEARANTIBODY，ANA）真核細(xì)胞（如HEp-2細(xì)胞、肝細(xì)胞）的各種細(xì)胞核成分為靶抗原檢測(cè)的自身抗體的總稱(chēng)?？购丝贵w

（ANTINUCLEARANTIBODY，ANAANA概念指抗細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體。廣義：抗核酸（Nucleicacid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗體的總稱(chēng)某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富ANA概念指抗細(xì)胞核成分（DNA，RNA，蛋白質(zhì)和酶）的抗體ANA中性粒細(xì)胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+補(bǔ)體均質(zhì)體LE細(xì)胞LE細(xì)胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等結(jié)締組織病，藥物過(guò)敏，慢活肝等亦可陽(yáng)性。抗DNP取代LE細(xì)胞的檢測(cè)+ANA中性粒細(xì)胞DNP(DNA-Histone)均質(zhì)體LE細(xì)間接免疫熒光法++抗原HEp-2細(xì)胞肝組織切片待檢抗體（血清）抗原—抗體第二抗體間接免疫熒光法++抗原HEp-2細(xì)胞肝組織切片待檢抗體（血清間接免疫熒光法HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）間接免疫熒光法HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（分類(lèi)和命名以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線(xiàn)粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；以抗原的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類(lèi)命名，如抗DNA、抗RNP、抗組蛋白抗體等。分類(lèi)和命名以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗核抗體檢測(cè)方法間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑點(diǎn)法ELISA免疫印跡法

（Western-blot）

抗核抗體檢測(cè)方法間接免疫熒光法ANA譜條法ENA斑點(diǎn)法ANA譜條法ENA斑點(diǎn)法

細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞骨架細(xì)胞周期

均質(zhì)型核糖體型肌蛋白型中心體型斑點(diǎn)型線(xiàn)粒體型波形纖維蛋白型紡綞體型核仁型高爾基體型細(xì)胞角蛋白型紡綞絲型著絲點(diǎn)型溶酶體型原肌球蛋白型中間體型周邊型顆粒型紐帶蛋白型PCNA型核點(diǎn)型(dots)結(jié)蛋白(橋粒)型

IIF檢測(cè)ANA熒光染色模型細(xì)胞核細(xì)胞漿細(xì)胞骨架斑點(diǎn)型（nRNP/Sm）

高滴度的抗U1-nRNP為MCTD的特征。抗Sm抗體對(duì)SLE具有高度特異性。斑點(diǎn)型（SSA/SSB）

抗SSA最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅斑狼瘡（100%）?？筍SB抗體幾乎僅見(jiàn)于女性，可出現(xiàn)于SS和SLE。斑點(diǎn)型（nRNP/Sm）高滴度的抗U1-nRNP為M均質(zhì)型

抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體(histone)抗ssDNA抗體抗核小體抗體(nucleosome)均質(zhì)型抗dsDNA抗體抗組蛋白抗體

抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動(dòng)度相關(guān)。

抗dsDNA抗體SLE特異性抗體，與病情活動(dòng)度相關(guān)。周邊型

可見(jiàn)于膠原病、PBC、CAH等患者

周邊型核點(diǎn)型（DOTS）

見(jiàn)于SLE、SS、PBC、風(fēng)濕病。

抗著絲點(diǎn)型

PSS局限型標(biāo)志抗體。核點(diǎn)型（DOTS）見(jiàn)于SLE、SS、PBC、風(fēng)抗PM-Scl（PM-1）抗體

見(jiàn)于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM/皮肌炎DM/彌漫性PSS）

抗PM-Scl（PM-1）抗體見(jiàn)于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎P抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線(xiàn)粒體抗體（AMA）SLE標(biāo)志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體抗核糖體P蛋白（rib-P）抗體抗線(xiàn)粒體抗體（AMA）SLE抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體偶見(jiàn)于SLE和SS抗Jo-1抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體偶見(jiàn)于抗肌動(dòng)蛋白抗體見(jiàn)于自身免疫性慢性活動(dòng)型肝炎

抗肌動(dòng)蛋白抗體見(jiàn)于自身免疫性慢性活動(dòng)型肝炎

抗ENA抗體譜ENA(extractablenuclearantigen)：可提取核抗原的總稱(chēng)臨床常檢測(cè)的抗ENA抗體譜主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白抗ENA抗體譜ENA(extractablenucl

檢測(cè)方法

雙向免疫擴(kuò)散（ID）對(duì)流免疫電泳（CIE）免疫印跡法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑點(diǎn)法

檢測(cè)方法雙向免疫擴(kuò)散（ID）免疫印跡法

SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測(cè)免疫印跡法SDS電泳轉(zhuǎn)移是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對(duì)系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一組以人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小

熒光染色型

靶抗原

胞漿型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）殺菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)

髓過(guò)氧化物酶（MPO）組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（LF）白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有兩種特性

ANCA熒光染色型與靶抗原熒光染色型靶抗原

胞漿型(c周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（pANCA）主要見(jiàn)于炎癥性腸?。冃越Y(jié)腸炎和克羅恩?。┲苓呅涂怪行粤＜?xì)胞胞漿抗體主要見(jiàn)于炎癥性腸?。冃越Y(jié)腸炎和胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)主要見(jiàn)于Wegener’s肉芽腫及微小多動(dòng)脈炎胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體主要見(jiàn)于Wegener’s肉芽腫及

ANCA臨床應(yīng)用

髓過(guò)氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新月體型腎小球腎炎、過(guò)敏性肉芽腫性血管炎相關(guān)、殺菌/通透性增高蛋白（BPI）主要見(jiàn)于肺部炎癥性疾病并與長(zhǎng)期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系

蛋白酶3（PR3）與Wegener’s肉芽腫（WG）密切相關(guān)。僅cANCA診斷WG的特異性大于90%，聯(lián)合PR3可超過(guò)95%，活動(dòng)期幾乎100%陽(yáng)性。

組織蛋白酶G(Cath-G)白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白(LF)可見(jiàn)于SLE、IBD、PBC、PSC等

ANCA臨床應(yīng)用髓過(guò)氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管

AKA主要見(jiàn)于RA，陽(yáng)性率36%~59%，特異性95%~99%，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的RA類(lèi)型。抗角蛋白抗體（AKA）AKA主要見(jiàn)于RA，陽(yáng)性率36%~59%，特異性9

一組針對(duì)含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體，主要包括抗心磷脂抗體、抗磷脂酸抗體和抗磷脂酰絲氨酸抗體。類(lèi)型：IgG、A、M型，IgG型最常見(jiàn)，其次是IgM型，IgA型與自身免疫性疾病的關(guān)系較小?？沽字贵w（anti-phospholipidantibody,APLA）一組針對(duì)含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體，主要包括抗檢測(cè)方法：

常用ELISA臨床應(yīng)用：在SLE中總陽(yáng)性檢出率達(dá)70%~80%，與病情活動(dòng)顯著相關(guān)；ACA陽(yáng)性者發(fā)生血管炎、溶血性貧血、心臟及中樞神經(jīng)精神系統(tǒng)損傷的幾率明顯。在RA患者陽(yáng)性率為33%~49%。ACA陽(yáng)性是腦出血及腦梗塞的危險(xiǎn)因素。與反復(fù)自然流產(chǎn)和胎兒發(fā)育遲緩有一定的相關(guān)性檢測(cè)方法：常用ELISA

部分自身免疫性疾病中自身抗體的檢出率部分自身免疫性疾病中自身免疫性疾病ANA陽(yáng)性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80潰瘍性結(jié)腸炎26慢性活動(dòng)性肝炎30~40其它風(fēng)濕病20~50ANA在自身免疫性疾病中的檢出率

自身免疫性疾病ANA陽(yáng)性率（%）SLE80~100MCTD9疾病類(lèi)型

抗原類(lèi)型陽(yáng)性率%SLE

dsDNA

30~90

U1-nRNP15~40

Sm5~30

SSA20~60

SSB10~20PCNA3

核糖體（rib）5~20

心磷脂20~40

新生兒LE

SSA

100藥物誘導(dǎo)LE

組蛋白

95

單鏈DNA80系統(tǒng)性紅斑狼瘡

(SLE)SLE抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%)

U1-nRNP

95~100

單鏈DNA

20~50混合性結(jié)締組織?。∕CTD）

抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%)U1-nRNP9抗原類(lèi)型

陽(yáng)性率（%）

IgM-RF

65~90抗角蛋白抗體（AKA）

36~59

單鏈DNA

8

組蛋白

少見(jiàn)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）IgM-RF抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）

SSA

40~95SSB40~95

ssDNA

30~60

唾液腺流出道

40~60

RF

60~80原發(fā)性干燥綜合征（SS）抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）SSA40~95SSB4PSS類(lèi)型相對(duì)應(yīng)的抗原

陽(yáng)性率（%）彌漫型原纖維蛋白

5~10PM-Scl（PM-1）3Scl-7025~75RNA多聚酶Ⅰ4局限型

著絲點(diǎn)

80~95進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥（PSS）PSS類(lèi)型相對(duì)應(yīng)的抗原陽(yáng)性率（%）彌漫型原纖維蛋白

抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）

PM-Scl（PM-1）

8

Jo-1

25~35

Mi-1

10

Mi-2

5

Ku（重疊綜合征）

30~55

單鏈DNA

40~50

PL-7

4

PL-12

3多發(fā)性肌炎/皮肌炎(PM/DM)抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）PM-Scl（PM-1）自身免疫性慢性活動(dòng)性肝炎(AIH)抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）肌動(dòng)蛋白（Actin）40~90ANA(板層素，SSA等)

30~40

肝腎微粒體（LKM-1）

7可溶性肝抗原（SLA）

100線(xiàn)粒體2型（AMA-M2）

5~10

線(xiàn)粒體9型（AMA-M9）

10自身免疫性慢性活動(dòng)性肝炎(AIH)抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）肌動(dòng)原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)抗原類(lèi)型陽(yáng)性率（%）線(xiàn)粒體2型（M2）95線(xiàn)粒體4型（M4