內(nèi)毒素葡聚糖開展

微生物室新開項(xiàng)目簡介

(1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖)與細(xì)菌內(nèi)毒素1對于侵襲性真菌感染……診斷滯后,治療手段有限基礎(chǔ)疾病病死率很高念珠菌血癥若不治療死亡率可以達(dá)到45-76%，侵襲性曲霉病死亡率高達(dá)55-70%2診斷方法顯微鏡檢查培養(yǎng)血清學(xué)分子生物學(xué)3鏡檢和培養(yǎng)方法敏感性低

血培養(yǎng)：在腫瘤和血液病病人中，50%尸檢證實(shí)深部念珠菌感染的病例血培養(yǎng)陰性。培養(yǎng)結(jié)果陽性僅表示存在某種真菌，區(qū)分定植和感染困難培養(yǎng)時(shí)間長有些標(biāo)本采集困難4非培養(yǎng)方法優(yōu)點(diǎn)快速報(bào)告結(jié)果敏感性提高取材簡便多以真菌在致病狀態(tài)產(chǎn)生的物質(zhì)為檢測標(biāo)志物，結(jié)果陽性提示有致病性定量檢測可判斷感染嚴(yán)重程度及療效評估5非培養(yǎng)診斷的方法簡介真菌細(xì)胞壁成分（1-3）-β-

D-葡聚糖檢測（G試驗(yàn)）真菌抗原檢查半乳甘露聚糖（galactomannan)抗原（GM)甘露聚糖(mannan)抗原隱球菌莢膜多糖抗原（乳膠凝集試驗(yàn)）真菌特異的代謝產(chǎn)物D-阿拉伯糖醇真菌DNA的檢測6深部真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)

EORTC/MSG2008修訂版宿主因素臨床特征病原學(xué)真菌鏡檢真菌培養(yǎng)組織病理學(xué)檢查血清學(xué)檢查方法（間接證據(jù)）CSF隱球菌抗原陽性——確診GM-test,G-test——臨床診斷ClinicalInfectiousDiseases2008;467(1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖)“G”試驗(yàn)8b1,6葡聚糖

磷脂雙分子層幾丁質(zhì)麥角固醇b1,3葡聚糖合成酶mannoproteinsβ1,3真菌細(xì)胞膜、壁結(jié)構(gòu)羊毛固醇C－14去甲基化酶14位還原和7－8位異構(gòu)酶角鯊烯環(huán)氧化酶9(1-3)--D-Glucan生物活性(1-3)--D-Glucan作為真菌細(xì)胞壁成分之一，一旦進(jìn)入機(jī)體后，將引起真菌病，嚴(yán)重時(shí)將會引起嚴(yán)重的深部真菌感染疾病，因此,深部真菌感染對患者的健康與生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅.傳統(tǒng)檢測方法為真菌培養(yǎng)，一是周期長，二是陽性率特別低．主要是抗生素類藥物的濫用所引起．真菌感染出現(xiàn)逐漸上升趨勢．10“G”試驗(yàn)緣何而來？11比濁法反應(yīng)機(jī)理

細(xì)菌內(nèi)毒素 （1-3）

-D-Glucan LAL-RM(反應(yīng)物)因子C 活化因子C

因子B 活化因子B活化因子G 因子G

凝固酶原 凝固酶

凝固蛋白原 凝固蛋白（凝膠）定量濁度儀 TurbidimetrictechniqueGEL12鱟試驗(yàn)是1968年由Levin和Bang建立。其原理是利用鱟的變形細(xì)胞與微量內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的現(xiàn)象，作為判斷試品中細(xì)菌內(nèi)毒素含量的一種方法。13

背面觀

就像是古代武士的心甲

腹面觀

腹部基本呈六角形，

還可以看到它發(fā)達(dá)的附肢

圖2鱟的外形14已知能與鱟試劑發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)有細(xì)菌內(nèi)毒素和β-葡聚糖，但它們的反應(yīng)曲線不一樣。內(nèi)毒素反應(yīng)曲線為S型特征曲線，而β-葡聚糖反應(yīng)曲線為經(jīng)過0點(diǎn)的斜線。15

內(nèi)毒素和β-葡聚糖與鱟試劑反應(yīng)的特征曲線16酵母菌、絲狀真菌細(xì)胞壁成分不僅檢測曲霉菌，還可以檢測念珠菌、鐮刀菌、毛孢子菌、支頂孢屬不能檢測：隱球菌和接合菌美國FDA已批準(zhǔn)，歐洲部分國家已注冊中國SFDA已獲批準(zhǔn)進(jìn)入臨床應(yīng)用敏感性、特異性：90％左右－D－葡聚糖的價(jià)值17美國大多數(shù)研究限于念珠菌菌血癥其他真菌感染（侵襲性曲霉菌?。┑难芯抠Y料少假陽性：血液透析(纖維素濾膜）；接受血制品治療（免疫球蛋白）抗生素對結(jié)果的影響？？－D－葡聚糖的價(jià)值18假陽性問題

污染（無熱源的試管、槍頭和蒸餾水等）血液透析、腹膜透析紗布或其他醫(yī)療物品（外科手術(shù)）某些品牌的靜脈制劑（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）抗腫瘤多糖（香菇多糖）某些細(xì)菌敗血癥患者（尤其是鏈球菌敗血癥）假陽性與應(yīng)用β內(nèi)酰胺類抗生素?zé)o關(guān)對策:動態(tài)監(jiān)測葡聚糖的變化19－D－葡聚糖（G試驗(yàn)）的缺陷標(biāo)本采集不能鑒定何種真菌感染20－D－葡聚糖參考值健康人：<10pg/ml可疑感染：10~20pg/ml深部真菌感染：>20pg/ml