草莓組織培養(yǎng)與脫毒技術(shù)研究

草莓組織培養(yǎng)與脫毒技術(shù)研究

草莓是薔薇科的一種草本植物。在世界小漿果生產(chǎn)中,草莓榮舉首位。草莓是結(jié)果最快、成熟最早、株體最小、周期最短、管理方便、病蟲較少、加工容易,便于調(diào)控的一種果樹。它一般栽后數(shù)月即可成熟收獲,早春5月上市供應(yīng),填補水果的淡季市場。它還可以進行促成栽培或在一年內(nèi)多次生產(chǎn),周年供應(yīng)。草莓繁殖主要靠葡匐莖分株提供種苗,效率較低,不利于優(yōu)良品種推廣,而且在長期無性繁殖中,植株往往積累多種病毒,導(dǎo)致種苗退化,產(chǎn)量和品質(zhì)下降,已成為阻礙草莓生產(chǎn)的主要問題。應(yīng)用離體培養(yǎng)技術(shù),不僅可以快速繁殖大量優(yōu)質(zhì)草莓種苗,有利于品種提純和更新,而且可用于脫除病毒和無病毒種苗的繁殖,加快新品種的推廣。1999年~2002年,我們在靈寶草莓櫻桃專家大院進行草莓組織培養(yǎng)與脫毒試驗研究,利用培育出的脫毒草莓苗在靈寶市建立草莓園200hm2,生長結(jié)果良好。1外植體培養(yǎng)1.1植株的剪去、消毒草莓莖尖培養(yǎng)常用匍匐莖的頂端作為外植體,它的數(shù)量能保證,操作也方便。6~7月份是匍匐莖發(fā)生最多的季節(jié),當(dāng)生長到15~20cm長的時候從健壯的植株上,剪去長5cm左右,帶有頂端的匍匐莖,用水沖洗,除去塵土,隨后在75%的次氯酸鈉溶液中,進行5~7min的表面消毒。由于匍匐莖表面茸毛多,易附著氣泡會降低滅菌效果,因此需用消毒的鑷子在其周圍攪動數(shù)次,再用無菌水多次沖洗,在超凈工作臺上,應(yīng)在解剖鏡下剝?nèi)デo尖外面的幼葉,切取莖尖,莖尖切取的長度為0.2mm左右,接種到培養(yǎng)基上。1.2花粉愈傷組織的分離誘導(dǎo)花藥產(chǎn)生愈傷組織,選取花粉發(fā)育為單核期花蕾,5~7℃低溫處理1~2d,經(jīng)75%酒精浸數(shù)秒鐘,再經(jīng)0.1%升汞消毒10~15min,用無菌水沖洗3~5次,剝?nèi)』ㄋ庍M行接種培養(yǎng)。誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基為MS+NAA2mg/L,蔗糖30g/L,瓊脂6~7.5g/L,pH5.8?；ㄋ幗臃N后20~60d,出現(xiàn)愈傷組織,開始多數(shù)在花絲斷口處出現(xiàn),有的從藥壁產(chǎn)生,有的整個花藥愈傷組織化。經(jīng)1個月左右,由變褐色的花藥裂口處長出花粉愈傷組織,質(zhì)地有的致密,有的疏松,色澤有的鮮明,有的暗褐。將直徑2mm左右組織致密,色澤鮮明呈顆粒狀的愈傷組織轉(zhuǎn)移到附加BA0.5mg/lMS培養(yǎng)基上,誘導(dǎo)愈傷組織分化芽莖,分化一般需40~50d。2ba濃度對乳腺癌增殖的影響草莓的增殖培養(yǎng)為MS培養(yǎng)基,草莓培養(yǎng)的激素用量一般比較低,以BA0.5mg/L、NAA0.02mg/L較好。BA濃度過高,形成的芽叢生長會停滯,呈蓮座狀,當(dāng)BA濃度過低時,形成的芽少,但芽長勢好。在培養(yǎng)過程中,應(yīng)根據(jù)腋芽增殖數(shù)量和苗的生長狀況,來調(diào)整BA的用量,增殖數(shù)量少時,可適當(dāng)提高BA濃度,增殖數(shù)量多而苗的生長差時,應(yīng)適當(dāng)減少BA的用量。培養(yǎng)基中的糖以30mg/L為宜,瓊脂7~8g/L,pH5.8。3培訓(xùn)條件在低溫、短日照條件下,草莓可能進入休眠,所以接種后需要保持適宜的培養(yǎng)條件即22~25℃的溫度,18h光照和3000Lx的照度。4擴大繁殖培養(yǎng)基草莓生根比較容易,在繼代培養(yǎng)中,有些苗也會發(fā)根,但為了使生根整齊,可把健壯的植株轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中,其余植株轉(zhuǎn)入新鮮的繼代培養(yǎng)基中擴大繁殖。生根培養(yǎng)以1/2MS為基本培養(yǎng)基,除去BA,不添加任何激素的生根最好,根多而且長。5試苗的覆蓋、保濕和栽培技術(shù)在瓶內(nèi)生根培養(yǎng)的試管苗,直接移栽到田間,不易成活,需經(jīng)過溫室或大棚過渡移栽進行鍛煉,使其逐步適應(yīng)田間環(huán)境條件,最后移栽到田間,以提高成活率。生根培養(yǎng)至試管苗根長2~3cm時,將瓶塞除去,在溫室里放置3~4d進行鍛煉。用大口罐頭瓶做培養(yǎng)瓶時,除蓋后,會因溫度降低過快,試管苗出現(xiàn)失水萎焉現(xiàn)象,需將瓶蓋再蓋上,或有塑料薄膜覆蓋,待試管苗恢復(fù)正常時,再逐漸去蓋。鍛煉后,將苗從瓶中取出,洗去基部的培養(yǎng)基,移栽到盛有園土摻砂土或蛭石的塑料缽內(nèi),置于塑料大棚或溫室中,再加塑料薄膜拱棚保濕,保持85%的相對濕度和22~25℃,7~10d后,試管苗長出新葉、發(fā)出新根,可逐步放風(fēng),降低拱棚內(nèi)的濕度,最后除去塑料薄膜,經(jīng)過20~30d的過渡移栽,可移至田間。過渡移栽的管理,主要是控制小環(huán)境的溫度、濕度和光照,過強的光照會使棚內(nèi)溫度過高,需進行遮蔭。其次是防病,濕度過高易引起苗期病害,除及時放風(fēng)外,要噴灑殺菌劑。此外,葉面噴肥可使小苗生長健壯,有利移栽成活。草莓在低溫、短日照條件下即進入生理休眠,在鍛煉階段必須保持長日照和較高的溫度,移栽的季節(jié)應(yīng)安排在初夏,否則要加照明補充光照,延長光照時間達16h,最低溫保持18℃以上。6草莓病毒的主要種類許多草莓品種,因病毒發(fā)生嚴(yán)重,生長衰弱,產(chǎn)量下降與品質(zhì)變劣,病毒的發(fā)生和危害已成為我國草莓生產(chǎn)上急需解決的問題。目前我國鑒定明確的草莓病毒及其類似病害有7種,其中草莓斑駁病毒(sMoV)、草莓皺縮病毒(SCrV)、草莓鑲脈病毒(SVBV)和草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)4種已使大部分草莓受到侵染,約減產(chǎn)20%~50%。解決草莓病毒病害的主要途徑是培養(yǎng)脫毒與原種、并建立脫毒苗繁殖與推廣體系,定期更新田間種苗。脫毒苗原種是應(yīng)用脫毒技術(shù)對優(yōu)良草莓品種脫除病毒,并進行病毒檢測鑒定、確認(rèn)為無病毒時,方可作為原種保存和繁殖。為了防止蚜蟲傳播病毒,脫毒苗的原種母株應(yīng)保存在網(wǎng)室或試管內(nèi),并應(yīng)用離體繁殖技術(shù),擴大繁殖,利用組培苗在田間產(chǎn)生的匍匐莖進一步擴繁,培育生產(chǎn)草莓果實用的種苗。草莓的病毒檢測,通常用小葉嫁接法,利用指示植物癥狀表現(xiàn),來判斷帶毒情況。6.1對草莓病毒的檢測從被檢草莓植株上,采集長成不久的葉,除去兩邊的小葉,中央小葉帶1~1.5cm長的葉柄,把它削成楔形作接穗。再除去指示植物復(fù)葉中間的小葉,在葉柄中央部切開1~1.5cm,插入接穗,包扎后,罩塑料薄膜袋,或放在高濕度的室內(nèi)。若被檢植株帶有病毒,嫁接后1~2月,在新展開的葉片、匍匐莖或老葉上,會出現(xiàn)病毒癥狀。用指示植物檢測草莓病毒,關(guān)鍵是提高嫁接成活率。選用壯苗和較粗的指示植物葉柄,成活率較高;用待檢株成熟的葉片葉柄楔形削面,長1~1.5cm較易成活;嫁接在低齡葉片比老齡葉片上的成活率高;嫁接后要保濕,適宜的溫度為20~25℃(王國平,1991)。6.2草莓病毒指的是植物6.2.1草坪感染病毒smov在指示植物UC5的葉片上,出現(xiàn)褪綠斑駁,有時產(chǎn)生黃色形狀不整齊的斑駁。在EMC上,則產(chǎn)生黃白斑點和明脈。6.2.2草莓微黃邊病毒smyev在指示植物UC4上,致葉片枯死。在EMC、UC5、AIP和UC10上,表現(xiàn)葉片邊緣失綠,植株矮化。6.2.3草莓粉脈病svbv在指示植物UC5上,表現(xiàn)葉片向背面反卷,在UC6上,葉片沿葉脈出現(xiàn)帶狀褪綠斑,后期變?yōu)閴乃罈l紋或條斑。6.2.4葉片和花紋在指示植物UC4、UC5和UC