肝郁脾虛證型乳腺增生病大鼠模型的研究進(jìn)展

肝郁脾虛證型乳腺增生病大鼠模型的研究進(jìn)展

目前，中醫(yī)在乳腺癌增生的實(shí)驗(yàn)研究方面取得了日益深入的成果。在模型方法和實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的選擇上取得了相對成熟的研究成果?，F(xiàn)將近年來的有關(guān)研究進(jìn)展綜述如下。一、不同激素對大鼠乳腺癌活檢指標(biāo)的影響目前可用于復(fù)制乳腺增生病病理模型的實(shí)驗(yàn)動物有Wistar大鼠、SD大鼠、豚鼠、昆明小鼠、新西蘭兔、日本大耳白兔及青紫白兔。造模方法多使用外源性激素造模,造模時(shí)也可先手術(shù)摘除動物的雙側(cè)卵巢;有的單純使用雌激素,有的采用雌激素與孕激素合用。但各家報(bào)道的用藥時(shí)間、用藥劑量、雌孕激素比例等有所不同。陳紅風(fēng)選用清潔級成年未孕SD大鼠,平均體重(323.4±21.83)g,用胃復(fù)安溶液(濃度10mg/ml)灌胃,劑量按成人(每天劑量/50kg體重)×20(倍)×兔體重(kg)計(jì)算,每天1次,連續(xù)20天造成高催乳素血癥的乳腺增生病病理模型。吳建新等觀察不同劑量、不同配方的雌性激素對大鼠乳腺增生病模型的影響。選用雌性未孕SD大鼠,4月齡,200g左右,在麻醉下摘除雙側(cè)卵巢,于手術(shù)后第3周開始分別予以雌酮(E1)10μg、雌二醇(E2)1μg、雌三醇(E3)100μg、孕酮(P)1mg、E21μg+P4mg、E21μg+P1mg、E24μg+P1mg、E110μg+E21μg、E110μg+P1mg。按上述藥物劑量,每日于大白鼠后外肢皮下注射,連續(xù)4周。觀察乳腺組織的形態(tài)學(xué)變化,其中單用一項(xiàng)激素組(E1、E2、E3、P)均未出現(xiàn)乳腺組織的增生變化;其余不同激素組合的組均有乳腺組織的增生變化,其中以E24μg+P1mg劑量組乳腺組織增生最為明顯。而造模2周與4周的組織形態(tài)學(xué)變化無明顯差異。宋愛莉等選用健康未育成年雌性Wistar大鼠,體重180～220g采用大鼠腿內(nèi)側(cè)肌肉注射苯甲酸雌二醇0.25mg/(kg·d),連續(xù)25天,然后肌肉注射黃體酮2mg/(kg·d),連續(xù)5天,復(fù)制成乳腺增生病動物模型。在此基礎(chǔ)上,用夾尾方式激惹大鼠,每天半小時(shí),隔日給予飼養(yǎng)喂養(yǎng),禁食當(dāng)日給予大黃水煎液1g/(kg·d)灌胃,采用病證結(jié)合造模方式,建立肝郁脾虛證型乳腺增生病大鼠的病理模型。倪瑾等選用青紫白兔30只,雌性,未孕,體重2kg左右,前腹切除雙側(cè)卵巢,1周后,肌肉注射雌二醇0.3mg/kg,隔日一次,歷時(shí)30天,造成乳腺增生病的動物模型。二、中藥及復(fù)方治療冠心病合并疾病機(jī)理研究目前有關(guān)本病的動物實(shí)驗(yàn)多從病理組織形態(tài)學(xué)、內(nèi)分泌、免疫功能、血液流變學(xué)以及對有關(guān)基因表達(dá)等方面開展機(jī)理研究,分別從不同角度、層次探討了中藥及復(fù)方對該病的治療作用機(jī)理。1.乳痛靈膠囊對乳腺癌組織結(jié)構(gòu)的影響許多學(xué)者都從病理組織形態(tài)學(xué)角度描述了中藥復(fù)方對乳腺組織增生的抑制作用[4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24]。如倪瑾等觀察了乳痛靈沖劑(柴胡、當(dāng)歸、白芍藥、川楝子、元胡、青皮等)對實(shí)驗(yàn)性家兔乳腺增生病的治療作用。實(shí)驗(yàn)分為模型對照組、小劑量中藥組和大劑量中藥組。造模后,對照組乳腺呈囊性小葉增生,小導(dǎo)管和腺泡擴(kuò)張?jiān)錾?形成許多大小不等的腺腔,腔內(nèi)有許多脂質(zhì)和蛋白質(zhì)積蓄,腺腔直徑平均為206μm,腺泡被水腫的間質(zhì)纖維增生。小劑量中藥組乳腺的小導(dǎo)管和腺泡增生,腺腔形成與模型對照組相似,直徑平均為185μm。間質(zhì)膠原大量增生。大劑量中藥組則表現(xiàn)為小導(dǎo)管、腺泡增生及腺腔形成都較上述兩組為輕,腺體呈收縮狀態(tài),腺腔平均直徑為89μm。間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張,內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,有較多漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤伴血漿蛋白滲出。結(jié)果顯示:服用大劑量乳痛靈沖劑后,腺泡腔縮小,小葉和腺泡數(shù)目減少,體積變小,與對照組相比差異顯著(P<0.05);從電鏡觀察結(jié)果看:服用大劑量乳痛靈沖劑后,胞內(nèi)微絲增多,肌絲和致密斑清晰,這是腺泡有力收縮的組織學(xué)基礎(chǔ),腺泡無囊性擴(kuò)張。以上結(jié)果表明:大劑量乳痛靈沖劑治療乳腺增生病有一定的療效。2.中藥治療對大鼠血清激素含量的影響在激素水平方面,大多選用雌二醇(E2)、孕酮(P)、睪酮(T)、促卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)等指標(biāo)[4,6,7,8,9,10,11,12,14,16,18,20,22,24]。黃霖等運(yùn)用放免法觀察了健乳靈片(鹿角霜、補(bǔ)骨脂、路路通、瓜蔞皮、三棱、蒲公英、乳香等)對動物血清性激素的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型對照組血清FSH、E2含量顯著高于正常對照組(P<0.05,P<0.01)。中藥治療組血清FSH、LH和E2含量與正常對照組之間已無顯著差異(P>0.05),P含量較模型對照組升高(P<0.05),但還顯著低于正常對照組(P<0.01)。鄭陸辛等以系列乳癖合劑治療豚鼠乳腺增生模型,按性周期(發(fā)情前期、發(fā)情期、發(fā)情后期、靜止期)灌服不同中藥,發(fā)現(xiàn)中藥可降低血清E2水平,大劑量組療效更加明顯(P<0.05,P<0.01),而對P、T水平的影響不顯著。3.乳液中pr的抑制劑激素受體被認(rèn)為是激素對靶器官發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的媒介。異常雌激素可能主要通過雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的介導(dǎo)引起乳腺組織增生。石磊等研究了乳鈣膠囊(鹿角膠、仙靈脾等)對實(shí)驗(yàn)性家兔乳腺增生病的治療機(jī)制,發(fā)現(xiàn)該藥可降低乳腺組織ER、增高PR含量。而劉軒等報(bào)道中藥乳寧沖劑(仙靈脾、肉蓯蓉、莪術(shù)、桃仁、郁金等)可通過顯著降低乳腺組織ER、PR含量,使局部對雌激素的敏感性下降而對乳腺組織增生有明顯的抑制作用。4.溫補(bǔ)腎陽、疏肝溶血陳紅風(fēng)采用胃復(fù)安灌胃的方法復(fù)制SD大鼠乳腺增生病模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)立空白對照組、模型對照組、調(diào)攝沖任組、溫補(bǔ)腎陽組、疏肝活血組,每組10只。將中藥復(fù)方乳寧沖劑拆方成調(diào)攝沖任、溫補(bǔ)腎陽、疏肝活血三個(gè)小復(fù)方,分別給予各組灌服。研究結(jié)果表明:調(diào)攝沖任法可通過增加下丘腦多巴胺濃度,抑制單胺氧化酶活性,從而增強(qiáng)多巴胺效應(yīng),降低催乳素水平,達(dá)到治療目的。拆方研究表明調(diào)攝沖任法作用多優(yōu)于補(bǔ)腎溫陽和疏肝活血組,為臨床組方配伍提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。5.t細(xì)胞超敏試驗(yàn)段涇云等以中藥乳瘤散結(jié)丸(香附、三棱、莪術(shù)、紅花等)治療家兔乳腺增生模型。認(rèn)為該藥能明顯提高單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬功能,促進(jìn)T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型皮膚超敏反應(yīng)。林成仁等在研究青香丸(柴胡、香附、浙貝母、當(dāng)歸、白芍藥、王不留行等)對家兔乳腺增生病治療機(jī)理時(shí)發(fā)現(xiàn)該藥可有效抑制因造模引起的胸腺系數(shù)減少,從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫功能。6.乳復(fù)康片對大鼠血清指標(biāo)的影響薛秀安等探討了乳復(fù)康片(香附、木香、柴胡、橘皮、當(dāng)歸、夏枯草等)對模型大鼠血液流變學(xué)的影響。模型組全血黏度(比)、血清黏度(比)、血漿黏度(比)及紅細(xì)胞壓積(%)均顯著高于空白對照組(P<0.05,P<0.01)。乳復(fù)康片各劑量組上述指標(biāo)均有所改善,其中乳復(fù)康片高、中劑量組優(yōu)于低劑量組,大部分指標(biāo)接近正常水平,與模型組相比明顯改善(P<0.05,P<0.01)。石磊等觀察了乳舒膠囊對乳腺增生家兔血液流變學(xué)的影響。給藥4周后,心臟采血測全血黏度、血漿黏度、血沉、壓積、纖維蛋白原、血沉方程K值等指標(biāo)。造模后家兔全血黏度、血漿黏度、血沉比正常對照組顯著增加,壓積比正常對照組顯著減少。中藥治療后,全血黏度、血漿黏度、血沉、壓積基本恢復(fù)到正常對照組水平,大、中劑量中藥組的纖維蛋白原比正常對照組顯著降低。表明該藥有改善乳腺增生家兔血液流變學(xué)的作用。7.小鼠醋酸所致急性滲出性炎的作用楊志剛等研究發(fā)現(xiàn)乳疾靈(雞血藤、仙靈脾、丹參等)對大鼠棉球肉芽腫及醋酸所致急性滲出性炎癥有明顯抑制作用,對小鼠醋酸所致扭體反應(yīng)有鎮(zhèn)痛作用。李穎等報(bào)道了乳康膠囊(當(dāng)歸、穿山甲、丹參、白術(shù)、夏枯草、蒲公英等)可顯著抑制大鼠棉球肉芽腫增生,減少由醋酯引起的扭體次數(shù),緩解二甲苯所致小鼠耳腫脹。8.青香丸治療對血清sod和mda含量的影響有學(xué)者報(bào)道乳腺增生時(shí)自由基增多。林成仁等探討了青香丸對SOD活性及MDA含量的影響。與正常對照組比較,模型組血清SOD活性顯著降低(P<0.01),MDA含量有增加趨勢。與模型組比較,青香丸治療組血清SOD活性明顯增加(P<0.05),但MDA含量無顯著差異。認(rèn)為抗氧自由基損傷和抗脂質(zhì)過氧化損傷可能也是中藥治療乳腺增生病的機(jī)理之一。9.抗增湯作用機(jī)理宋愛莉等發(fā)現(xiàn)中藥抗增湯(香附、橘葉、當(dāng)歸、白芍藥、茯苓、白術(shù)等)具有良好的抑制大鼠腺體增生的作用,且低劑量組療效優(yōu)于高劑量組。其作用機(jī)理可能在于減弱大鼠乳腺組織中的PCNA表達(dá),降低細(xì)胞增殖活性,其效果與三苯氧胺基本相同。同時(shí)可降低Bcl-2基因表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,說明抗增湯也有阻斷及治療乳腺癌癌前病變的作用。另外,還發(fā)現(xiàn)該藥可使大鼠增生的乳腺組織內(nèi)VEGF表達(dá)減弱,MVD計(jì)數(shù)明顯減少,即可影響血管內(nèi)皮生長因子活性,抑制腫瘤血管生成,從而逆轉(zhuǎn)與阻斷良性增生向惡性腫瘤的轉(zhuǎn)化過程。三、乳腺癌增生毒性的研究和實(shí)踐現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為乳腺增生病的發(fā)病主要是內(nèi)分泌失調(diào)所致:即在高雌激素(E2↑)低孕激素(P↓)狀態(tài)長期影響下,乳腺組織即會出現(xiàn)實(shí)質(zhì)細(xì)胞數(shù)量上的增多和形態(tài)結(jié)構(gòu)上的變異。也可由于乳腺局部實(shí)質(zhì)成分的激素受體異常成分不均勻的分布在乳房各部,導(dǎo)致乳房各部的增生程度參差不齊,而且與社會心理因素密切相關(guān)。因此,在生物心理社會醫(yī)學(xué)模式下深入探討慢性應(yīng)激(情志)、中醫(yī)肝與乳腺增生病發(fā)生的機(jī)制及心理因素與生物因素的關(guān)系,對開發(fā)辨證和辨病相結(jié)合的中藥藥物有積極的指導(dǎo)意義。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對乳腺增生病的治療除手術(shù)切除外尚無確切有效的方法,而大量的臨床和動物試驗(yàn)均表明中藥復(fù)方對本病的治療效率很高(總有效率多為90%以上)。因此,篩