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文檔簡介

1.2

基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作流程

目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因目的基因的獲取目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗逆性基因（抗病毒、抗細菌)、人胰島素基因等。1）從基因文庫中獲取目的基因2）利用PCR技術(shù)擴增目的基因3）人工合成目的基因的獲取方法反轉(zhuǎn)錄法化學合成法1）從基因文庫中獲取目的基因基因文庫的概念：將含有某種生物不同基因的很多的DNA片段，導入到受體菌群中儲存，每個受體菌含有這種生物不同的基因?；蛭膸斓姆诸惢蚪M文庫部分DNA文庫（1）構(gòu)建基因組文庫：

將某種生物體內(nèi)的DNA全部提取出來，選用適當?shù)南拗泼?，將DNA切成一定大小的DNA片段，然后將這些片段分別與載體連接起來，導入受體菌中儲存，這個群體包含了這種生物的所有基因。通過對受體菌的培養(yǎng)而儲存基因（2）構(gòu)建cDNA文庫用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段（也叫cDNA），與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群體叫做這種生物cDNA文庫。cDNA合成過程

基因組文庫和部分基因文庫原核細胞的基因結(jié)構(gòu)

RNA聚合酶的作用是催化DNA轉(zhuǎn)錄為RNA。真核細胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)是間隔的、不連續(xù)的。其中，能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子，一般不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子。信使RNA的加工：編碼區(qū)下游編碼區(qū)上游成熟的信使RNA轉(zhuǎn)錄加工初級轉(zhuǎn)錄物剪切內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄部分拼接外顯子轉(zhuǎn)錄部分真核生物基因表達的調(diào)控如何從基因文庫中得到我們所需的目的基因？根據(jù)基因的有關(guān)信息：如基因核苷酸序列或表達的產(chǎn)物或基因的功能等等。（課本p9）2）利用PCR技術(shù)擴增目的基因原理:DNA雙鏈復(fù)制前提:要有一段已知目的基因的脫氧核苷酸序列，以便合成引物。5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5/3/引物ⅡG—G1.加熱至90-95度：DNA解鏈,氫鍵斷裂；2.冷卻至55-60度：引物結(jié)合到互補DNA鏈；3.加熱至70-75度：Taq酶從引物起始進行互補鏈的合成5/3/A—G引物Ⅰ利用PCR技術(shù)擴增目的基因3）人工合成如果基因比較小，核苷酸序列又已知，也可以通過DNA合成儀用化學方法直接人工合成。反轉(zhuǎn)錄法化學合成法基因表達載

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