脈管復(fù)康片抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用研究

脈管復(fù)康片抗凝血、鎮(zhèn)痛、抗炎作用研究

止血阻滯性脈管炎和深部靜脈血栓形成屬于中醫(yī)學(xué)的“脈關(guān)節(jié)痛”和“脫離疽”范疇。其發(fā)病特點是在腸道功能不全的基礎(chǔ)上，感覺寒冷或潮濕，然后堵塞經(jīng)絡(luò)，阻止氣血，陽氣不能進(jìn)入四肢邊緣，導(dǎo)致壞疽。中醫(yī)目前治療該病以活血祛瘀中藥為主。脈管復(fù)康片是由乳香、沒藥、郁金、丹參、雞血藤等中藥制備而成,功效活血化瘀,通經(jīng)活絡(luò),止痛生肌,臨床用于瘀血阻滯,血脈不暢引起的脈管炎、硬皮病、動脈硬化性下肢血管閉塞癥[2~4]。本研究旨在通過抗凝、鎮(zhèn)痛、抗炎實驗研究脈管復(fù)康片活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、止痛生肌的功效。1材料表面1.1實驗動物ICR小鼠,雄性,18-22g,由斯貝福(北京)實驗動物科學(xué)技術(shù)有限公司提供,合格證號:SCXK(京)2011-0004。1.2原料與生產(chǎn)設(shè)備脈管復(fù)康片:由天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司提供,批號C90031,生產(chǎn)日期2013020。阿司匹林片:拜耳醫(yī)藥保健有限公司,國藥準(zhǔn)字J20080078,批號BJ04335,有效期至2016.7.10,有效期60個月。1.3試劑冰醋酸,分析純(500mL/瓶),北京化工廠生產(chǎn),生產(chǎn)批號20130108。1.4儀器和用品計數(shù)器;計時器;電子天平;7mm打孔器;微量移液器;1mL注射器;載玻片;4號注射針頭。2方法2.1動物凝血時間測定取ICR小鼠,按隨機(jī)數(shù)表方法將動物分為5組,分別為溶液對照組,阿司匹林組20mg/kg,脈管復(fù)康片2g成藥/kg,脈管復(fù)康片1g成藥/kg,脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件,12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng),自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后,灌胃給藥,灌胃劑量為0.2mL/10g,每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度,溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥5天,于第5天給藥60min后,用毛細(xì)管眼眶取血,滴于載玻片上,血滴直徑約0.5mm,立即用秒表記時,每隔10s用清潔的4號注射針頭自血滴邊緣向里輕輕撥動,觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止即為凝血時間。記錄凝血時間。2.2小鼠單次給藥后大鼠皮膚急性毒性試驗ld50取ICR小鼠,按隨機(jī)數(shù)表方法將動物分為5組,分別為溶液對照組,阿司匹林組200mg/kg,脈管復(fù)康片2g成藥/kg,脈管復(fù)康片1g成藥/kg,脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件,12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng),自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后,灌胃給藥,灌胃劑量為0.2mL/10g,每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度,溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥3天,于第3天給藥90min后,每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液(0.1mL/10g,i.p.,醋酸溶液臨用前配制),立即將小鼠放入觀察箱中觀察。觀察標(biāo)準(zhǔn):腹部內(nèi)凹,伸展后肢,臀部抬高計算為一次數(shù)。記錄小鼠15min內(nèi)的扭體次數(shù)。2.3灌胃和小鼠造模改造取ICR小鼠,按隨機(jī)數(shù)表方法將動物分為5組,分別為溶液對照組,阿司匹林組200mg/kg,脈管復(fù)康片2g成藥/kg,脈管復(fù)康片1g成藥/kg,脈管復(fù)康片0.5g成藥/kg。動物在22±0.5℃恒溫條件,12h為晝夜周期環(huán)境下飼養(yǎng),自由飲水和飲食。適應(yīng)飼養(yǎng)5天后,灌胃給藥,灌胃劑量為0.2mL/10g,每天一次。各組藥物均以0.1%CMC溶液稀釋至所需濃度,溶液對照組給以等體積的0.1%CMC溶液。給藥7天,于第7天給藥60min后,將二甲苯滴于小鼠右耳正反面,0.02mL/只,20min后將小鼠脫頸處死,沿耳廓基線剪下兩耳,用7mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片,電子天平稱重,以左右耳片重量之差為小鼠耳腫脹度(mg),表示炎癥反應(yīng)強(qiáng)度,并計算腫脹抑制率。耳腫脹度(mg)=右耳重量-左耳重量腫脹抑制率(%)=(溶液對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/溶液對照組平均腫脹度×100%。3統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ue0af±SD)表示,SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,組間比較用單因素方差分析(One-wayANOVA),顯著性水平以P<0.05和P<0.01為標(biāo)準(zhǔn)。4結(jié)果4.1組p>0.05顯延長與溶液對照組比較阿司匹林組的凝血時間明顯延長,差異顯著(P<0.05);2g/kg脈管復(fù)康片的凝血時間明顯延長,差異顯著(P<0.05)。見表1。4.2g/ml脈管復(fù)康片的2.2扭體次數(shù)與模型組比較阿司匹林組的15min扭體次數(shù)明顯減少,差異非常顯著(P<0.01);2g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少,差異非常顯著(P<0.01);1g/kg脈管復(fù)康片與0.5g/kg脈管復(fù)康片的15min扭體次數(shù)明顯減少,差異顯著(P<0.05)。見表2。4.3組顯降低情況與溶液對照組比較阿司匹林組小鼠耳腫脹度明顯降低,差異顯著(P<0.05);2g/kg脈管復(fù)康片小鼠耳腫脹度明顯降低,差異顯著(P<0.05)。見表3。5脈管復(fù)康片對小鼠的抑制作用血栓閉塞性脈管炎與血管內(nèi)皮損傷、血流動力學(xué)改變及血液凝固性增高等因素密切相關(guān),這些因素導(dǎo)致微循環(huán)障礙及組織的缺血、缺氧而發(fā)病。疼痛是該病最突出的癥狀,開始時疼痛源自動脈痙攣,常因血管壁與周圍組織中的末梢感受器受刺激引起。當(dāng)動脈內(nèi)膜發(fā)生炎癥并因血栓引起動脈閉塞后,即可產(chǎn)生缺血性疼痛。血栓閉塞性脈管炎受損血管呈一種非動脈粥樣硬化、非化膿性炎癥狀態(tài)。研究顯示血栓閉塞性脈管炎患者內(nèi)皮依賴性血管舒張功能減弱,炎性介質(zhì)水平明顯升高,在疾病急性期,血管損傷以血栓形成和炎性反應(yīng)為主。HalachevaK等研究證實血栓性脈管炎患者血管壁中白細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞浸潤明顯,內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間粘附分子-1、血管細(xì)胞粘附分子-1和E選擇素明顯升高,TNF-α在單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞頂部呈陽性。脈管復(fù)康片組方由丹參、雞血藤、郁金、乳香、沒藥五味中藥組成。本藥組方中丹參活血祛瘀、涼血消癰,既針對血瘀的病因,又針對脈管炎易引起感染而涼血消癰以抗炎;雞血藤行血補(bǔ)血、舒筋活絡(luò);郁金活血、止痛、行氣既針對病因又針對疼痛癥狀;乳香、沒藥消腫生肌、活血止痛,起到對證及促進(jìn)肌肉生長作用。全方共奏活血化瘀,痛經(jīng)活絡(luò),止痛生肌之效。有研究報道丹參具有降低血小板聚集,抗凝血、抑制纖維細(xì)胞增殖的作用,丹參還可通過抑制細(xì)胞對IL-1、IL-6和TNF-α等炎癥介質(zhì)的釋放環(huán)節(jié)使機(jī)體產(chǎn)生明顯抗炎作用。Li等研究9種藤本植物的抗炎作用時發(fā)現(xiàn),雞血藤乙醇提取物(除去多酚類化合物)對除COX-2以外的與抗炎作用有關(guān)的酶均具有抑制作用,表明雞血藤具有一定的抗炎作用。有研究表明郁金提取物具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用,鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與降低炎癥細(xì)胞因子的表達(dá),參與抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。鄭杭生等研究表明乳香、沒藥提取物中揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛作用,醇提部分則可以明顯增強(qiáng)揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛效果。陳婷等實驗證實乳香和沒藥配伍可增強(qiáng)抗炎效應(yīng)。凝血時間主要反映凝血因子被激活至纖維蛋白形成所需的時間?？鼓獙嶒灲Y(jié)果顯示脈管復(fù)康片可以延長小鼠凝血時間的作用,說明脈管復(fù)康片可影響小鼠內(nèi)源性凝血途徑產(chǎn)生抗凝作用,具有活血化瘀功效。腹腔注射醋酸可刺激小鼠腹膜引起持久的疼痛反應(yīng),致使小鼠出現(xiàn)“扭體反應(yīng)”,醋酸扭體實驗結(jié)果表明脈管復(fù)康片可減少小鼠扭體次數(shù),