過(guò)山蕨總黃酮對(duì)血栓閉塞性脈管炎模型大鼠的改善作用

過(guò)山蕨總黃酮對(duì)血栓閉塞性脈管炎模型大鼠的改善作用

鐵角蕨系有兩種植物，主要分布在亞洲和印度洋。在中國(guó)，有一種叫過(guò)山蕨的植物，也被稱為黑加侖草和金針草。主要產(chǎn)于中國(guó)東北、華北、西北、內(nèi)蒙古等地。歷代草本植物中沒(méi)有記載。民間用過(guò)山蕨全草治療外傷出血、子宮出血、脈管炎、神經(jīng)性皮炎、腦栓塞引起的偏癱以及糖尿病并發(fā)癥等。現(xiàn)代藥理研究表明,過(guò)山蕨提取物對(duì)兔耳血管、蟾蜍后肢血管以及家兔后肢血管有擴(kuò)張作用,其有效部位為總黃酮。血栓閉塞性脈管炎多發(fā)生在20~40歲青年,以男性患者居多,且在北方地區(qū)發(fā)病率較高。目前臨床治療脈管炎多以擴(kuò)張血管藥物、抗血小板聚集藥物為主,但作用單一、針對(duì)性不強(qiáng),療效不盡理想。本實(shí)驗(yàn)觀察過(guò)山蕨總黃酮對(duì)大鼠血栓性閉塞性脈管炎的影響,為其臨床應(yīng)用以及研發(fā)對(duì)血栓性閉塞性脈管炎療效確切的單味中藥新藥制劑提供參考。1材料表面1.1試劑與儀器過(guò)山蕨總黃酮,由山東省醫(yī)藥工業(yè)研究所中藥室提供,批號(hào)20101201,紫外分光光度法測(cè)得過(guò)山蕨總黃酮以山柰酚量計(jì)達(dá)73%。脈管復(fù)康片,規(guī)格0.6g,天津同仁堂集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào)Z12020023。月桂酸,規(guī)格250g,質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%,批號(hào)F20100330,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。肝素鈉注射液,規(guī)格2mL∶1.25萬(wàn)單位,由天津生物化學(xué)制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào)20091109。甲醛,分析純。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物syxkWistar大鼠,60只,雄性,體質(zhì)量(280~320)g,由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(魯)20100004。1.3主要設(shè)備LBY—NJ4血小板聚集儀、C2000型血凝儀(北京普利生儀器有限公司),DMLS2型顯微鏡(Leica公司)。2方法2.1物患下肢足跖部的變大鼠經(jīng)股動(dòng)脈注射月桂酸0.1mL,約15min后動(dòng)物患肢足爪部開始變蒼白,有的甚至青紫,皮膚溫度降低,動(dòng)脈搏動(dòng)減弱或消失,次日受累的足趾變黑,并逐漸向上發(fā)展,形成壞疽和木乃伊化。少數(shù)動(dòng)物手術(shù)后表現(xiàn)為患肢疼痛、跛行和曳行現(xiàn)象。2.2總黃酮高、中、低劑量2組正常動(dòng)物分組造模3d后,肉眼觀察并根據(jù)壞疽和木乃伊化程度評(píng)分,按評(píng)分結(jié)果隨機(jī)將大鼠分為模型組,過(guò)山蕨總黃酮高、中、低劑量(7.2、3.6、1.8mg/kg)組,脈管復(fù)康片(648mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照組,另設(shè)正常動(dòng)物對(duì)照組,每組10只。給藥組每天ig給藥1次,給藥體積為0.005mL/g,模型組和對(duì)照組ig等體積的純水,連續(xù)7d,給藥速度約0.5mL/s。2.3觀察指標(biāo)2.3.1病變局限標(biāo)準(zhǔn)肉眼觀察體征變化,參照王軍等的方法并采用分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí):Ⅰ級(jí),病變局限于趾甲部;Ⅱ級(jí),病變局限于趾部;Ⅲ級(jí),病變局限于足爪部;Ⅳ級(jí),病變局限于膝關(guān)節(jié)以下;Ⅴ級(jí),病變發(fā)展到膝關(guān)節(jié)以上。2.3.2足跖部血栓及血栓分級(jí)取大鼠右下肢,4%甲醛固定3d后用10%硝酸脫鈣,足趾、踝關(guān)節(jié)上、下及股部4個(gè)部位橫斷切片,HE染色,觀察血栓形成數(shù)目,進(jìn)行分級(jí),0級(jí),無(wú)血栓;Ⅰ級(jí),1個(gè)血栓;Ⅱ級(jí),2~3個(gè)血栓;Ⅲ級(jí),4個(gè)以上血栓。2.3.3凝血酶原時(shí)間大鼠腹主動(dòng)脈取血,經(jīng)抗凝等處理后檢測(cè)全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞壓積、血漿凝血酶時(shí)間(TT)、血漿凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、血漿纖維蛋白原(FIB);計(jì)算紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)和紅細(xì)胞變形指數(shù)。2.3.4統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS13.0軟件,組間血液流變學(xué)指標(biāo)和凝血指標(biāo)的差異性比較采用方差分析,等級(jí)數(shù)據(jù)采用等級(jí)檢驗(yàn),率的比較采用χ2檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1各組大鼠病變情況比較1周內(nèi)各組部分大鼠患側(cè)出現(xiàn)程度不同的壞疽部分脫落,模型組的病變最嚴(yán)重,過(guò)山蕨總黃酮高劑量組和脈管復(fù)康片組大鼠病變最輕,與模型組比較差異有顯著性(P<0.05、0.01)。結(jié)果見表l。3.2蕨類總黃酮對(duì)血栓閉塞性脈管炎大鼠血液流變學(xué)的影響連續(xù)給藥7d后,各給藥組大鼠血小板聚集率、血液流變學(xué)指標(biāo)、血栓分級(jí)和凝血指標(biāo)未見明顯改善。結(jié)果見表2~5。4過(guò)山蕨總黃酮的擴(kuò)張外周血管作用機(jī)制血栓性閉塞性脈管炎的病因至今尚不清楚,一般認(rèn)為與吸煙、寒冷、潮濕、外傷、感染、營(yíng)養(yǎng)不良、激素紊亂、遺傳、自身免疫功能紊亂等有關(guān)。近10余年的研究發(fā)現(xiàn),自身免疫因素在血栓性閉塞性脈管炎發(fā)病中所起的作用日益受到重視。血栓性閉塞性脈管炎患者血清中IgG、IgA和IgM明顯增加,而補(bǔ)體CH50和C3則減少,由此形成的免疫復(fù)合物沉積于患者的血管導(dǎo)致血管炎癥反應(yīng)和血栓形成。目前臨床治療脈管炎多以擴(kuò)張血管藥物、抗血小板聚集藥物為主,作用單一、針對(duì)性不強(qiáng),治療效果不盡理想。過(guò)山蕨中主要化學(xué)成分為黃酮類和有機(jī)酸類。本實(shí)驗(yàn)表明過(guò)山蕨總黃酮高劑量(7.2mg/kg)對(duì)血栓性閉塞性脈管炎具有良好療效。對(duì)過(guò)山蕨總黃酮擴(kuò)張外周血管作用機(jī)制的初步分析表明,過(guò)山蕨總黃酮有阻斷α受體和興奮β受體的作用,具解除體表皮膚黏膜血管(α受體)和骨骼肌血管(β受體為主)痙攣的作用,有利于改善病變肢體的全面血液循環(huán)。過(guò)山蕨