《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)課件：醫(yī)用顯微鏡基本操作》

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)課件：醫(yī)用顯微鏡基本操作本課程將詳細(xì)講解醫(yī)用顯微鏡的基本操作，包括如何選擇鏡頭、打開(kāi)光源、調(diào)焦、放大倍數(shù)等。什么是醫(yī)用顯微鏡？定義醫(yī)用顯微鏡（medicalmicroscope）是一種專門用于組織切片、病理變異和細(xì)胞學(xué)等觀察的光學(xué)儀器。應(yīng)用主要應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域，用于進(jìn)行腫瘤、炎癥、血液、組織等方面的細(xì)胞和組織形態(tài)學(xué)觀察。醫(yī)用顯微鏡的分類光學(xué)顯微鏡是一種利用透鏡等光學(xué)元件產(chǎn)生放大像的顯微鏡，適用于低倍率放大。電子顯微鏡利用電子束以及電子光學(xué)元件來(lái)選擇性傳輸和放大電子圖像的富含理論和技術(shù)的儀器。立體顯微鏡又稱物鏡顯微鏡或放大型顯微鏡，一般用于從事昆蟲(chóng)標(biāo)本尤其是翅片倫理和植物標(biāo)本等的分類和觀察。醫(yī)用顯微鏡的結(jié)構(gòu)目鏡位于顯微鏡的頂部，用于放大物鏡中的圖像。物鏡位于載物臺(tái)底部，用于對(duì)待觀察物放大。聚光鏡聚集光線并將其聚焦到物鏡上。載物臺(tái)用于放置待觀察的物體或載玻片。鏡頭的選擇及更換選擇鏡頭要根據(jù)樣品、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮退璺糯蟊稊?shù)來(lái)選擇合適的顯微鏡鏡頭。更換鏡頭更換鏡頭時(shí)需要注意，應(yīng)該先將現(xiàn)有的鏡頭卸下，然后將要更換的鏡頭插入。光源的打開(kāi)和調(diào)節(jié)1打開(kāi)光源通常使用手柄開(kāi)關(guān)開(kāi)啟顯微鏡上的燈。2調(diào)節(jié)光源通過(guò)移動(dòng)光源調(diào)節(jié)焦距，以獲得適當(dāng)?shù)恼彰髁炼?。目鏡與物鏡的調(diào)節(jié)1校正目鏡與物鏡在目鏡與物鏡使用前，需要進(jìn)行校正步驟，以確保圖像清晰。2聚焦目鏡與物鏡通過(guò)調(diào)節(jié)聚光鏡和目鏡可以調(diào)整觀測(cè)成像的清晰度，保證看到的圖像清晰細(xì)致。調(diào)焦與確定焦距調(diào)焦方法旋轉(zhuǎn)放大調(diào)節(jié)器移動(dòng)載物臺(tái)確定焦距通過(guò)眼睛觀察找到下沉到最底部的位置然后逐漸旋轉(zhuǎn)調(diào)焦裝置，直到將樣品完全對(duì)焦。物鏡的放大倍數(shù)1常見(jiàn)放大倍數(shù)常用物鏡倍率有4x、10x、40x等，不同的物鏡適合不同的細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)工作。2累倍原理累倍原理可以讓不同的物鏡進(jìn)行相乘從而得到較大的放大倍數(shù)，例如：4倍物鏡×40倍物鏡=160倍放大。怎樣觀察組織切片步驟將組織切片放在載玻片上并添加藥劑。將載玻片放在微鏡上并調(diào)整好視野。通過(guò)調(diào)整聚光鏡和目鏡讓組織切片清晰可見(jiàn)。提示觀察組織切片時(shí)建議緩慢調(diào)整顯微鏡，以免樣品移動(dòng)或刮損載玻片。片源的準(zhǔn)備及處理片源準(zhǔn)備處理要進(jìn)行快速冷凍等方法。截取的樣本要盡可能地薄。片源處理可采用光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡等不同手段進(jìn)行處理。通常用碘酒進(jìn)行染色。觀察切片前的準(zhǔn)備工作清潔載玻片使用特制的纖維布或者細(xì)軟的毛刷進(jìn)行清掃，以免留下灰塵影響觀察效果。清潔物鏡物鏡是整個(gè)顯微鏡中最易受到污染的部位，清理時(shí)需要特別細(xì)心和輕柔，使用純棉布進(jìn)行擦拭。有機(jī)載玻片的選擇在選擇有機(jī)載玻片時(shí)需要注意質(zhì)地、厚薄程度及長(zhǎng)度等，也可以根據(jù)實(shí)際需求和預(yù)算控制在合理的范圍內(nèi)。片源與載玻片綁合1步驟將切片與載玻片逐漸接觸，讓其自然粘合。用力壓平樣品與載玻片間的氣泡。2注意事項(xiàng)在綁合間斷或錯(cuò)位時(shí)，可以使用筆尖輕輕壓動(dòng)切片，使其重新定位。若同時(shí)需要染色，染色應(yīng)在綁合完成之后進(jìn)行。切片的染色方法1常用染色方法常用的染色方法有簡(jiǎn)單染色法、結(jié)合染色法和后染色法等，不同染色方法的適用范圍和效果略有差異。2簡(jiǎn)單染色法包括增強(qiáng)對(duì)比度的范德沃有氏染色法和紅藍(lán)二色染色法等，通常用于肝、腎、心肌等的病理組織學(xué)檢查。3結(jié)合染色法包括兩種或以上的顏色，不僅可清晰明了地描繪細(xì)胞核數(shù)目和形態(tài)，還能為纖維組織以及某些分泌細(xì)胞的檢查提供巨大幫助。4后染色法基于不同組織和細(xì)胞分泌出的底物具有與特定染色劑形成復(fù)合物的性質(zhì)，可用于檢測(cè)多種酶類和分子間的相互作用。常用的染色劑介紹蘇木精-伊紅染色法常用于病理組織學(xué)檢查，以強(qiáng)化對(duì)比度，染出不同細(xì)胞核的形態(tài)和構(gòu)造。PAS染色法適用于檢測(cè)聚糖的雜質(zhì)和不純物，特別是血液成份中的糖或蛋白多糖等。免疫組織化學(xué)染色法主要用于檢查組織中的特定分子、蛋白質(zhì)和抗原等，以揭示各種疾病發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制。如何處理不清晰的顯微鏡圖像可通過(guò)調(diào)整聚光鏡和目鏡的焦距、檢查裝置中是否插好純淨(jìng)無(wú)擦傷的鏡頭、調(diào)整光源照射的角度等方法來(lái)糾正顯微鏡圖像的模糊、反光等問(wèn)題。擦拭醫(yī)用顯微鏡的注意事項(xiàng)顯微鏡的各個(gè)組件表面不能使用粗糙纖維質(zhì)物或酒精類溶劑進(jìn)行干擦，建議使用純棉布或者吸水性好的海綿進(jìn)行濕擦，以免留下劃痕或損壞組件。關(guān)閉醫(yī)用顯微鏡后的處理與開(kāi)機(jī)相比，關(guān)閉醫(yī)用顯微鏡時(shí)要更加小心謹(jǐn)慎。建議先降低調(diào)焦裝置，然后關(guān)閉光源，最后慢慢將