超聲提取蜘蛛香中總黃酮的工藝優(yōu)化

超聲提取蜘蛛香中總黃酮的工藝優(yōu)化

蜘蛛虱子。其根莖及根入藥,具有理氣和中、散寒除濕、活血消腫等功效,用于治療脘腹脹痛、嘔吐泄瀉、小兒疳積、風(fēng)寒濕痹、腳氣水腫、月經(jīng)不調(diào)、跌打損傷、瘡癤等癥。研究發(fā)現(xiàn),其化學(xué)成分主要含揮發(fā)油、環(huán)烯醚萜類、黃酮類等多種成分。近年來藥理學(xué)研究表明,蜘蛛香中黃酮類化合物具有鎮(zhèn)靜和催眠作用。而有關(guān)蜘蛛香中總黃酮提取方法的研究未見文獻(xiàn)報道。為更有效地開發(fā)和利用藥材資源,充分提取蜘蛛香中所含的總黃酮成分,筆者采用正交設(shè)計的方法進(jìn)行了提取工藝的研究,以期為進(jìn)一步的開發(fā)利用提供參考。1材料和方法1.1儀器、藥品和試劑TU-1800紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);KQ2200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。蜘蛛香于2007年7月采自安徽亳州,經(jīng)江蘇畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物藥學(xué)系中藥教研室鑒定;橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所);其余試劑均為分析純。1.2方法1.2.1橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液配制準(zhǔn)確稱取橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品0.0051g,加甲醇溶解并定容至50ml,即得濃度為0.102g/L的橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于5只10ml容量瓶中,加甲醇定容,以甲醇作空白,于284nm處測吸光度。以吸光度A對橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度C作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。1.2.2樣品溶液的制備將蜘蛛香藥材粉碎并過篩(40～180目),用1∶10的石油醚回流脫脂2次,抽濾,洗滌,再放入40℃條件下的鼓風(fēng)干燥箱中干燥1h左右,備用。稱取1.0g已脫脂的蜘蛛香粉末,加入一定量的溶劑,密塞,搖勻,稱定質(zhì)量,超聲提取,取出放冷,再稱定質(zhì)量,用溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,離心分離,取上清液(溶劑量的1/5)于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干,加30ml甲醇溶解,濾去不溶物,濾液加甲醇定容至50ml,即得樣品溶液。移取1ml樣品溶液,加甲醇定容至10ml,以甲醇作空白,于284nm處測吸光度。并根據(jù)線性回歸方程計算蜘蛛香總黃酮得率。1.2.3影響提取效果的因素選取乙醇濃度、浸泡時間、固液比和超聲時間4個可能影響提取效果的因素做單因素試驗。以總黃酮得率為考察指標(biāo),確定各因素的合適范圍。在考察某一因素對蜘蛛香總黃酮得率的影響時,固定其他因素及水平。1.2.4提取檸蛛香總黃酮的最佳工藝條件的確定在單因素試驗的基礎(chǔ)上,確定乙醇濃度、固液比和超聲時間3個因素進(jìn)行正交試驗(表1),以總黃酮得率為考察指標(biāo),確定提取蜘蛛香總黃酮的最佳工藝條件。1.2.5提取工藝的驗證為進(jìn)一步考察最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性,按優(yōu)化的最佳工藝條件進(jìn)行重復(fù)性試驗3次,分別測定蜘蛛香總黃酮的含量。2結(jié)果與分析2.1標(biāo)準(zhǔn)工作曲線圖1表明,橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)品在5.1～25.5mg/L濃度范圍內(nèi),吸收度與濃度呈良好線性關(guān)系。2.2單因素試驗2.2.1浸泡時間和浸泡時間對提取效果的影響從圖2可看出,隨著浸泡時間的延長,總黃酮得率逐漸升高,但超過24h后,對提取效果的影響不大,為了防止其他成分浸出而產(chǎn)生許多雜質(zhì)成分,浸泡時間最好為24h。2.2.2乙醇濃度對總黃酮得率的影響從圖3可以看出,隨著乙醇濃度的升高,總黃酮得率急劇升高,在乙醇濃度達(dá)到60%時,總黃酮得率達(dá)到最大值,之后隨著乙醇濃度的增加,總黃酮得率又逐漸變低,主要原因是乙醇濃度不同,極性也不同,60%的乙醇極性與黃酮類物質(zhì)的極性相似,隨著乙醇濃度的升高,一些脂溶性物質(zhì)的溶出增加,影響了黃酮類物質(zhì)的浸出。2.2.3溶劑用量的影響一般來說,溶劑用量越大對黃酮類物質(zhì)的溶解能力越強(qiáng),越有利于黃酮類物質(zhì)的擴(kuò)散,提取效果越好。但是溶劑用量過大將給后續(xù)的濃縮等操作帶來不便,同時由于已經(jīng)浸出的黃酮對未浸出的黃酮有協(xié)同浸提作用,溶劑用量過大不利于協(xié)同浸提。圖5表明,當(dāng)固液比為1∶25時總黃酮得率達(dá)到最大值,因此,固液比選取1∶25左右為宜。2.2.4in所需分配的in從圖5可以看出,隨著超聲時間的延長,總黃酮得率先上升后下降,在30min時達(dá)到最大值。原因是時間過短,黃酮類物質(zhì)還未充分溶出,時間在30min時,黃?酮?類?物?質(zhì)?溶出已達(dá)到平衡,再延長超聲時間,一些熱敏性組分被破壞或超聲時間過長溶劑揮發(fā)導(dǎo)致乙醇濃度降低而使總黃酮得率下降。2.3時間及固液比對總黃酮提取的影響正交試驗和方差分析及顯著性檢驗結(jié)果表明,乙醇濃度對蜘蛛香總黃酮的提取效果有顯著影響。超聲時間對總黃酮提取的影響較小,固液比對蜘蛛香總黃酮的提取效果幾乎無影響。由表2可知,3個因素對總黃酮得率的影響大小依次為:乙醇濃度A>固液比C>超聲時間B,提取蜘蛛香總黃酮的最佳工藝條件為A2B1C2即浸泡24h,濃度60%乙醇,固液比1∶20,超聲時間30min。2.4提取工藝的驗證試驗由表3可知,測定的結(jié)果均等于或優(yōu)于正交試驗表中的任何一組,重現(xiàn)性好,說明該工藝穩(wěn)定可行。3最佳工藝條件的確定(1)超聲提取是一種提取效率較高的提取技術(shù),具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點。筆者利用超聲法提取蜘蛛香總黃酮,通過單因素和正交試驗得到的最佳工藝條件為:浸泡24h,濃度60%乙醇,固液比1