二氫楊梅素的穩(wěn)定性研究

二氫楊梅素的穩(wěn)定性研究

騰茶又名紅葡萄屬植物，是一種又名“漢d-maoya”的野生藤本植物。它是屬于葡萄科的一種野生藤本植物。它是所有植物的一種。它嘗起來又甜又淡，很新鮮。具有清熱解毒、散風(fēng)除濕、強(qiáng)筋骨骼等功效。自古以來,壯族和瑤族人民將其幼嫩莖葉經(jīng)過殺青、揉捻、烘干保健茶,具有營(yíng)養(yǎng)豐富、回味甘甜、清熱解毒、生津止渴、潤(rùn)喉散痰等特點(diǎn),用于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型肝炎、瘡癤等癥,夏天泡茶數(shù)日不餿,有“神茶”之稱?；瘜W(xué)研究表明,藤茶是一種富含黃酮類化合物的罕見植物,有效部位黃酮總量達(dá)30%左右,其中主要成分為二氫楊梅素(Dihydromyricetin,簡(jiǎn)稱DMY)。藥理研究表明,DMY能對(duì)抗去腎上腺素和高K+所致的兔胸主動(dòng)脈條的收縮反應(yīng)及顯著擴(kuò)血管和鈣阻滯作用,具有消炎、抑菌、止咳、鎮(zhèn)痛、消脂及抗脂質(zhì)過氧化等功效。因此,DMY具有廣泛的應(yīng)用前景。由于DMY的結(jié)構(gòu)中具有六個(gè)羥基,結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定,其自身往往易氧化成低活性甚至沒有活性的氧化產(chǎn)物,特別是在天然植物原料加工過程中,發(fā)生自動(dòng)氧化對(duì)其活性損失很大,因此了解影響其自動(dòng)氧化的因素,對(duì)保證DMY活性具有重要的理論意義和實(shí)際指導(dǎo)意義。儀器與試藥BF-KNAUER高效液相色譜儀(K501高壓輸液泵,K2501紫外分光檢測(cè)器,BF2002色譜工作站,北京北分瑞利分析儀器(集團(tuán))有限責(zé)任公司);Scout百分之一電子天平(梅特勒-托利多常州衡器有限公司);FA2104萬(wàn)分之一電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠);METTLERTOLEDO320SpH計(jì)(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)。二氫楊梅素(DMY)對(duì)照品為從湖南江華產(chǎn)藤茶中分離得到,經(jīng)UV,IR,MS,1H-NMR光譜分析鑒定結(jié)構(gòu),歸一化方法檢測(cè),含量在99.0%以上;所用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。方法與結(jié)果1流動(dòng)相、脫氣曲線色譜柱:江蘇漢邦公司LichrospherC18柱(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.1),應(yīng)用前經(jīng)過0.45μm微孔濾膜抽濾,超聲脫氣;流速:1.0mL·min-1;進(jìn)樣量:20μL;柱溫:25℃;檢測(cè)波長(zhǎng):290nm。2酶活劑精密稱取0.05g的DMY對(duì)照品置50mL量瓶中,加入50%的乙醇定容至刻度,配成1mg·mL-1的照品貯備溶液。精密吸取該對(duì)照品貯備溶液0.1,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6mL置25mL量瓶中,加甲醇至刻度搖勻,配制成4.0,8.0,16.0,32.0,48.0,64.0μg·mL-1系列濃度溶液。在上述色譜條件下,進(jìn)樣20μL,以DMY的峰面積(A)對(duì)DMY的濃度(C,μg·mL-1)進(jìn)行線回歸處理,得方程:A=6.59×104C+3.64×103,r=0.9993,線性范圍為4.0~64.0μg·mL-1。3復(fù)進(jìn)樣峰面積rsd精密吸取同一濃度的DMY對(duì)照品溶液20μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,峰面積的RSD為1.2%。精密吸取同一批樣品溶液20μL,每隔1h測(cè)1次,連續(xù)測(cè)5次,RSD為1.6%。表明本試驗(yàn)重復(fù)性及穩(wěn)定性均良好。4影響dmy溶液穩(wěn)定性的研究4.1dmy在不同ph值的緩沖溶液中的降解用Tris-HCl及Tris-NaOH配制成pH值為3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0的緩沖溶液。精密量取11份5mL的1mg·mL-1DMY溶液分別置于50mL量瓶中,除其中1份用蒸餾水定容至刻度外,剩余10份分別加入不同pH值的緩沖溶液至刻度,搖勻配制成DMY含量為0.1mg·mL-1的系列溶液,在37℃水浴中自然散射光下密封放置,測(cè)定DMY在不同pH下的紫外吸收光譜,結(jié)果見圖1。同時(shí)pH3.0~8.0的緩沖溶液配置的樣品于0,3,5,7,14,21,28d定期取樣1mL,真空凍干,以HPLC流動(dòng)相定容1mL,HPLC法測(cè)定在不同pH值下DMY的保存量。以濃度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖,結(jié)果見圖2。從圖1看出,在pH≤8條件下的DMY水溶液的最大吸收峰均在290nm,在pH9.0~12.0下290nm特征峰消失,而在325nm處出現(xiàn)最大吸收峰。此結(jié)果說明,pH≥9.0時(shí)DMY因處于堿性環(huán)境而發(fā)生自動(dòng)氧化作用,生成了其他成分。圖2表明,DMY在不同pH值條件下降解屬一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。按動(dòng)力學(xué)一級(jí)反應(yīng)的數(shù)學(xué)模型,計(jì)算不同pH值下的DMY降解的動(dòng)力學(xué)方程及降解速度常數(shù)及半衰期見表1。由該表可見,pH≤5時(shí)DMY較穩(wěn)定。4.2動(dòng)力學(xué)反應(yīng)模型取DMY含量為0.1mg·mL-1的pH值為4.0的緩沖溶液各6份,分別在4℃,37℃,45℃,65℃,85℃保溫處理并定期取樣1mL,真空凍干,以HPLC流動(dòng)相定容1mL,HPLC法測(cè)定DMY的保存量,以濃度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖,結(jié)果見圖3。從圖3可見,pH值為4.0的DMY緩沖溶液在不同溫度下降解屬一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)。按動(dòng)力學(xué)一級(jí)反應(yīng)的數(shù)學(xué)模型,計(jì)算pH值為4.0的DMY緩沖溶液在不同溫度下降解的動(dòng)力學(xué)方程及降解速度常數(shù)及半衰期見表2。由該表可見,pH值為4.0的DMY緩沖溶液在室溫環(huán)境下比較穩(wěn)定。4.3金屬離子穩(wěn)定性測(cè)定稱取FeCl3,CuSO4,AlCl3,用pH4.0的Tris-HCl緩沖溶液分別配置成含F(xiàn)e3+,Al3+,Cu2+金屬離子0.25mmol·L-1的溶液。量取2.5mL的1mg·mL-1的DMY溶液5份,分別置于25mL量瓶中,其中3份分別加入上述含不同金屬離子的溶液1mL,而后5份溶液均用pH4.0的Tris-HCl緩沖溶液定容至刻度。取其中1份未加任何金屬離子的溶液室溫避光放置,剩余4份溶液于室溫自然散射光下放置,定期取樣1mL,真空凍干,以HPLC流動(dòng)相定容1mL,HPLC法測(cè)定DMY的保存量,結(jié)果見表3。從表3可見,經(jīng)過室溫在散射光下放置28d后,DMY的含量由起始的100μg·mL-1下降至77.8μg·mL-1,同等條件但避光放置則DMY下降較少,89.7μg·mL-1,說明光照射對(duì)DMY的穩(wěn)定性有一定的影響;不同金屬離子對(duì)DMY穩(wěn)定性有不同的影響,其中Fe3+和Al3+的影響較為顯著,一周后分別使DMY的含量由起始的100μg·mL-1下降至58.9和67.4μg·mL-1,而Cu2+使DMY的含量下降至89.5μg·mL-1,影響相對(duì)較小。ph值對(duì)dmy活性的影響DMY為一弱酸性物質(zhì),在影響因素考察實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),pH值、溫度、不同金屬離子、光線對(duì)DMY穩(wěn)定性有明顯影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DMY在pH≤4的弱酸性條件下能穩(wěn)定存在,隨著pH值的增加,會(huì)加速氧化,特別是pH≥9的堿性條件下會(huì)立即反應(yīng)氧化。溫度的升高,Fe3+,Al3+,Cu2+等金屬離子的存在以及光線均可以加速DMY的氧化。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示,為使DMY能較長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)