槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定

槐米中蘆丁及槲皮素的提取分離及鑒定一、簡(jiǎn)介蘆丁也稱(chēng)蕓香苷，廣泛存在于植物界，在槐花米和蕎麥葉中含量較高?；被紫刀箍浦参锘盨ophorajaponica

L.的花蕾，古時(shí)用作止血藥，常用作提取蘆丁的原料。蘆丁有減少毛細(xì)血管通透性的作用，臨床上主要用于高血壓的輔助治療，對(duì)于放射線傷害引起的出血癥也有一定的作用。槲皮素是蘆丁的苷元，廣泛存在于水果（如柑橘類(lèi)）和許多食物如蕎麥、洋蔥等中，具有顯著的抗炎作用。槲皮素可由蘆丁水解制得。槲皮素（Quercetin）

蘆丁（Rutin）目的

1.

掌握黃酮類(lèi)成分的提取分離方法。

熟悉黃酮類(lèi)成分的主要化學(xué)性質(zhì)。

3.

掌握用薄層色譜或紙色譜鑒定黃酮苷及其苷元和糖的方法。

三、基本原理蘆丁為淡黃色、細(xì)小針狀結(jié)晶，含3個(gè)結(jié)晶水，熔點(diǎn)為177-178℃。蘆丁可溶于熱水(1:200),難溶于冷水(1:8000),易溶于熱甲醇(1:7)、冷甲醇(1:100)、熱乙醇(1:30)和冷乙醇(1:300),難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等非極性有機(jī)溶劑。蘆丁結(jié)構(gòu)中有多個(gè)酚羥基,顯弱酸性,故易溶于堿液并呈黃色，酸化后又析出。因此，可用

“堿提酸沉”

法進(jìn)行提取。槲皮素亦為黃色結(jié)晶，熔點(diǎn)為313-314℃。槲皮素溶于熱乙醇(1:23)、冷乙醇(1:300),還可溶于冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶劑,但不溶于石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷和水。

四、儀器與試劑1.

儀器燒杯(100ml,500ml),圓底燒瓶(100ml,150ml),抽濾瓶(500ml),冷凝管，循環(huán)水泵,紫外燈,展開(kāi)缸，點(diǎn)樣毛細(xì)管(1mm),布氏漏斗,長(zhǎng)頸漏斗。2.

試劑0.4%硼砂水,石灰乳,2%硫酸，鹽酸，氫氧化鋇，三氯化鋁，乙醇，甲醇，聚酰胺薄膜，濾紙。

五、展開(kāi)劑及對(duì)照品1.

展開(kāi)劑正丁醇:醋酸:水(4:1:5或4:1:1,上層)，25%醋酸，85%醋酸，乙醇:水(7:3)，氨水。2.

對(duì)照品蘆丁，槲皮素，葡萄糖，鼠李糖。

六、操作方法1.蘆丁的提取和純化(1)提取槐花米20g，置500ml燒杯中，加0.4%硼砂水的沸騰溶液400ml，此時(shí)溶液pH約為6。在攪拌下以石灰乳調(diào)至pH8，加熱，保持微沸30min，加熱過(guò)程中以石灰水補(bǔ)充失去的水分并保持pH8。靜置5-10min

使其涼至室溫，傾出上清液，過(guò)濾，藥渣重復(fù)提取一次。合并濾液，將濾液用鹽酸調(diào)至pH5左右，滴加8滴三氯甲烷，放置過(guò)夜使析出沉淀。抽濾，水洗沉淀3-4次，放置空氣中自然干燥得粗蘆丁。稱(chēng)重，計(jì)算得率。(2)重結(jié)晶

粗蘆丁2g，以50-60ml乙醇加熱溶解，趁熱抽濾。濾液濃縮至20-30ml，放置使析出結(jié)晶，濾取結(jié)晶。母液濃縮至一半體積，放置又析出結(jié)晶。濾取并合并結(jié)晶，用乙醇重結(jié)晶一次，得精制蘆丁。干燥稱(chēng)重，計(jì)算得率。2.

蘆丁的酸水解稱(chēng)取蘆丁1g，置100ml圓底燒瓶中，加2%H2SO4

50ml，小火加熱，微沸回流1h。溶液逐漸由澄清變渾濁，析出細(xì)小的黃色針狀結(jié)晶。反應(yīng)結(jié)束后，放冷，抽濾(注意：保留濾液20ml，以檢查其中所含單糖)。取結(jié)晶，即粗品槲皮素，于100ml圓底燒瓶中，加50%乙醇50ml，加熱回流使溶解，趁熱抽濾，濾液轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中，放置析晶，抽濾，得精致槲皮素。減壓下于110℃干燥可得無(wú)水槲皮素，熔點(diǎn)313-314℃。3.黃酮及糖的薄層鑒定(1)蘆丁和槲皮素的鑒定方法一：紙色譜法。濾紙：新華一號(hào)層析用濾紙(5

x8cm)。樣品溶液：自制蘆丁及槲皮素少量，以適量乙醇加熱(或超聲)溶解。對(duì)照品溶液:蘆丁及槲皮素適量，以適量加熱(或超聲)溶解。展開(kāi)劑：a.

正丁醇-醋酸-水(4:1:5

上層或4:1:1)

b.

25%醋酸水溶液

c.85%醋酸水溶液用毛細(xì)管各吸取樣品和對(duì)照品溶液適量，點(diǎn)于濾紙上，分別用上述展開(kāi)劑展開(kāi)。濾紙吹干后，在可見(jiàn)光及紫外燈(360nm)下觀察色斑，用濃氨水熏濾紙后再在可見(jiàn)光及紫外燈(360nm)下分別觀察色斑變化。方法二：聚酰胺薄層色譜法樣品溶液：自制蘆丁及槲皮素少量，以適量乙醇加熱(

或超聲)溶解。對(duì)照品溶液：蘆丁及槲皮素適量，以適量乙醇加熱(

或超聲)溶解。展開(kāi)劑：乙醇:水(7:3)。用毛細(xì)管各吸取樣品和對(duì)照品溶液適量，點(diǎn)于聚酰胺薄層上，用上述展開(kāi)劑展開(kāi)。展開(kāi)劑吹干后，在可見(jiàn)光及紫外光下觀察色斑，用濃氨水熏濾紙后再在可見(jiàn)光及紫外光下分別觀察色斑變化。（2）糖的紙色譜鑒定濾紙：新華一號(hào)層析用濾紙(5

x8cm)。樣品溶液的制備：取蘆丁酸水解時(shí)保留的濾液20ml，置于50ml燒杯中，分次加Ba(OH)2

細(xì)粉約2.6g，使溶液中和至pH7，濾除生成的BaSO4沉淀，濾液水浴濃縮至1ml，為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備：葡萄糖和鼠李糖對(duì)照品適量，以少量水溶解即得。展開(kāi)劑：正丁醇:醋酸:水(4:1:5

上層或4:1:1)。用毛細(xì)管各吸取供試品和對(duì)照品溶液適量，點(diǎn)于濾紙上，用上述展開(kāi)劑展開(kāi)。展開(kāi)劑吹干后均勻噴以苯胺鄰苯二甲酸鹽試劑，105℃烘5min，葡萄糖和鼠李糖均顯棕色或棕紅色斑點(diǎn)。七、思考題1.

影響蘆丁提取的產(chǎn)量及質(zhì)量的主要因素有哪