應(yīng)用細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)胎兒染色體異常診斷的研究

應(yīng)用細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對(duì)胎兒染色體異常診斷的研究

2包含術(shù)語和定義適用于本文件。2.1產(chǎn)前細(xì)胞遺傳咨詢cytogeneticpratati胞語狀位通過細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),對(duì)胎兒來源的細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的分析檢查,從而對(duì)其是否存在染色體異常做出診斷。2.2核分析中一個(gè)特定數(shù)量和形狀的染色體稱為核型對(duì)中期細(xì)胞顯帶染色體標(biāo)本進(jìn)行染色體計(jì)數(shù)和帶型模式分析,稱為核型分析。2.3染色體計(jì)數(shù)chromos在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定數(shù)量的中期細(xì)胞中具有著絲粒的染色體數(shù)目。2.4分析細(xì)胞計(jì)數(shù)lceels在鏡下、或計(jì)算機(jī)處理圖像、或根據(jù)照片對(duì)顯帶標(biāo)本中期細(xì)胞中每一條染色體的形態(tài)進(jìn)行分析的細(xì)胞數(shù)量。2.5核分析細(xì)胞數(shù)量karypedlls根據(jù)ISCN1995或ISCN2005規(guī)則對(duì)一個(gè)細(xì)胞的染色體照片或者計(jì)算機(jī)處理圖像進(jìn)行分組、排隊(duì)、配對(duì)并進(jìn)行形態(tài)分析的細(xì)胞數(shù)量。2.6需要分析的細(xì)胞數(shù)量用于評(píng)估標(biāo)本中具有或缺少某一特殊細(xì)胞遺傳學(xué)特點(diǎn)而需要分析的細(xì)胞數(shù)量。一般是由于患者有某種臨床病史,或在分析過程中發(fā)現(xiàn)有1到2個(gè)異常細(xì)胞。評(píng)估細(xì)胞數(shù)通常由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人規(guī)定,本標(biāo)準(zhǔn)中另有說明的除外。2.7收集coloy2.8異?？寺bormalcone2.9異常的染色體卓異常細(xì)胞的染色體發(fā)生了數(shù)目或者結(jié)構(gòu)變異,統(tǒng)稱為染色體異常。2.10染色體病chromosamaodse2.11非整體同意器人類體細(xì)胞為二倍體(diploid),含46條染色體,任何不成倍增加或者減少的染色體異常個(gè)體均統(tǒng)稱為非整倍體。2.12mosac結(jié)合3收縮語言3.1iscnl9954開展臨床工作4.1對(duì)于新生兒的財(cái)產(chǎn)要素應(yīng)先對(duì)他體非計(jì)算機(jī)醫(yī)療機(jī)關(guān)進(jìn)行產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷門診工作應(yīng)由經(jīng)過專門培訓(xùn)的、有資質(zhì)的醫(yī)師承擔(dān)。在孕婦進(jìn)行遺傳咨詢或者婦產(chǎn)科產(chǎn)前咨詢時(shí),醫(yī)師應(yīng)了解孕婦的個(gè)人史、既往史、孕產(chǎn)史、遺傳病家族史、產(chǎn)前診斷指征,幫助孕婦正確理解胎兒可能罹患染色體病的風(fēng)險(xiǎn),以及該染色體病的臨床表現(xiàn)。同時(shí),還應(yīng)讓孕婦理解采取介入性取材手術(shù)可能發(fā)生的各種并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于年齡在35歲以上,或者符合其他產(chǎn)前診斷指征的孕婦,均應(yīng)推薦其做產(chǎn)前診斷。細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷指征:35歲以上的高齡孕婦:產(chǎn)前篩查出來的胎兒染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦;曾生育過染色體病患兒的孕婦;產(chǎn)前B超檢查懷疑胎兒可能有染色體異常的孕婦:夫婦一方為染色體異常攜帶者;醫(yī)師認(rèn)為有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷的其他情形。介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)包括絨毛取材術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)和經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù),分別應(yīng)在孕10～13+6周、16～13+6周和孕18周之后進(jìn)行。醫(yī)師應(yīng)選擇合適的時(shí)期和方法進(jìn)行產(chǎn)前診斷,手術(shù)前醫(yī)師應(yīng)正確掌握產(chǎn)前診斷及取材手術(shù)的適應(yīng)證和禁忌證,并完成必要的檢查。4.2產(chǎn)前診斷的局限性產(chǎn)前診斷手術(shù)取材之前應(yīng)按照知情同意、孕婦自愿的原則,醫(yī)務(wù)人員事先告知孕婦或其家屬本次產(chǎn)前診斷的目的和必要性,講清細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷的局限性、穿刺取材手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)。醫(yī)師只對(duì)已簽署知情同意書,并同意接受產(chǎn)前診斷的孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷手術(shù)及其相關(guān)檢查。知情同意書見附錄A。醫(yī)師在術(shù)前談話及知情同意書中應(yīng)向孕婦說明細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)的局限性,即常規(guī)染色體檢查不能診斷染色體微小結(jié)構(gòu)改變、單基因遺傳病、多基因遺傳病、環(huán)境以及藥物導(dǎo)致的胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常。如因細(xì)胞培養(yǎng)失敗而無法得到結(jié)果,則有再次取材的可能。4.3產(chǎn)前診斷數(shù)據(jù)和樣本采集4.3.1產(chǎn)前診斷和診斷病歷的格式4.3.1.1.孕婦的一般情況孕婦的姓名、年齡、民族/種族、產(chǎn)前診斷指征、末次月經(jīng)日期(公歷)、是否雙胞胎或多胞胎、是否有異常妊娠史以及聯(lián)系方法。4.3.1.妊娠合并合并癥妊娠期異常情況、妊娠期感染情況、是否有其他妊娠合并癥,是否有取材手術(shù)的禁忌證、超聲檢查資料、血清學(xué)產(chǎn)前篩查結(jié)果以及其他與產(chǎn)前診斷相關(guān)的病史資料和術(shù)前檢查結(jié)果。4.3.1.3.產(chǎn)品前后診斷及合同保存規(guī)格和期限4.3.2孕產(chǎn)婦妊娠合并心臟病產(chǎn)前診斷流程醫(yī)師在了解孕婦情況,確認(rèn)符合適應(yīng)證、無禁忌證,并簽署知情同意書后,實(shí)施取材手術(shù)。當(dāng)孕婦有取材手術(shù)的禁忌證,但又確有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷時(shí),醫(yī)師應(yīng)向孕婦詳細(xì)說明可能發(fā)生的手術(shù)并發(fā)癥及相應(yīng)的解決辦法。在孕婦做出要求手術(shù)的決定,醫(yī)師制定相應(yīng)的應(yīng)急預(yù)案之后才能實(shí)施取材手術(shù)。4.3.2.1一般要求手術(shù)室配備(搶救設(shè)備)、消毒環(huán)境、設(shè)備(B超)、手術(shù)組人員搭配合理。手術(shù)醫(yī)師相對(duì)固定。4.3.2.2.羊膜腔穿刺4.3.2.3.羊毛鉆孔4.3.2.4肚臍b.3手術(shù)：操作步驟見附錄b4.3.3新生兒丟失率羊膜腔穿刺術(shù)一次穿刺成功率99%以上,術(shù)后一周內(nèi)的胎兒丟失率小于0.5%;絨毛取材術(shù)一次穿刺成功率98%以上,術(shù)后一周內(nèi)的胎兒丟失率小于1.5%;經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)一次穿刺成功率90%以上,術(shù)后一周內(nèi)的胎兒丟失率小于2%。4.3.4樣品的標(biāo)記標(biāo)本采集后應(yīng)立即置入有清晰標(biāo)注孕婦姓名和唯一編碼的無菌試管中,及時(shí)送往細(xì)胞遺傳產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室。唯一編號(hào)的編碼規(guī)則由各實(shí)驗(yàn)室制定。5產(chǎn)前診斷的實(shí)驗(yàn)室工作5.1名與產(chǎn)前診斷申請(qǐng)單細(xì)胞遺傳實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后,應(yīng)立即核對(duì)標(biāo)本標(biāo)識(shí)的孕婦姓名與產(chǎn)前診斷申請(qǐng)單和產(chǎn)前診斷病歷、知情同意書是否一致,若同一批標(biāo)本中有同名孕婦,應(yīng)按出生日期區(qū)分。每份標(biāo)本有一個(gè)唯一的編號(hào),在產(chǎn)前診斷標(biāo)本接收登記本上登記。5.2細(xì)胞培養(yǎng)5.2.1一般要求細(xì)胞接種操作應(yīng)在超掙工作臺(tái)進(jìn)行。5.2.2最高與最低溫度控制的關(guān)系應(yīng)定期清洗并檢查培養(yǎng)箱:每個(gè)工作日檢查指示的培養(yǎng)箱內(nèi)溫度和二氧化碳濃度。應(yīng)注明最高與最低溫度控制,應(yīng)制定并張貼出儀器運(yùn)行的合理范圍,當(dāng)讀數(shù)超過合理范圍時(shí)應(yīng)有相應(yīng)處理方案。每周檢查貯氣瓶氣體和實(shí)驗(yàn)室空氣濕度。5.4產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室的一般要求5.5山羊細(xì)胞染色體分析5.5.1一般要求如果細(xì)胞培養(yǎng)不滿意,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在羊膜腔穿刺之日起14天之內(nèi)通知臨床醫(yī)師。5.5.2山羊細(xì)胞染色體分析5.5.2.1.瓶法5.5.2.1.1計(jì)數(shù)至少計(jì)數(shù)在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中平均分布的20個(gè)細(xì)胞,記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。5.5.2.1.2分析至少分析在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中的5個(gè)細(xì)胞,所分析的細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。5.5.2.1.3核分析2個(gè)細(xì)胞,每個(gè)獨(dú)立的培養(yǎng)瓶各分析一個(gè)細(xì)胞。5.5.2.2-原規(guī)律5.5.2.個(gè)細(xì)胞集落至少計(jì)數(shù)在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的器皿中平均分布的15個(gè)細(xì)胞集落中的15個(gè)細(xì)胞,一個(gè)集落計(jì)數(shù)一個(gè)細(xì)胞。如果沒有15個(gè)集落,則至少計(jì)數(shù)10今集落中的15個(gè)細(xì)胞。記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。5.5.2.2.2分析至少分析在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)器皿中的5個(gè)細(xì)胞,所分析的細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。5.5.2.2.3外殼分析2個(gè)細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)有一個(gè)以上的細(xì)胞克隆,則每個(gè)克隆核型分析一個(gè)細(xì)胞。5.5.3評(píng)估和處理山羊移植的真實(shí)性對(duì)羊水細(xì)胞嵌合體的真實(shí)性評(píng)估及處理規(guī)則參見附錄C。5.6毛細(xì)胞染色體分析5.6.1一般要求5.6.2毛細(xì)胞染色體分析標(biāo)準(zhǔn)5.6.2.1.直接方法未培養(yǎng)染色制備方法不建議使用。5.6.2.2.栽培方法栽培瓶法或原法5.6.2.2.1計(jì)算至少計(jì)數(shù)在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中平均分布的20個(gè)細(xì)胞,記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。5.6.2.2.2分析至少分析在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)器皿中的5個(gè)細(xì)胞,所分析的細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。5.6.2.2.3外殼分析2個(gè)細(xì)胞,使用原位法如果發(fā)現(xiàn)有一個(gè)以上的細(xì)胞克隆,則每個(gè)克隆核型分析一個(gè)細(xì)胞;培養(yǎng)瓶法的每個(gè)獨(dú)立培養(yǎng)瓶各分析一個(gè)細(xì)胞。5.7胎兒肚臍采血分析5.7.1探索培養(yǎng)系統(tǒng)5.7.1.1至少應(yīng)建立兩個(gè)獨(dú)立的培養(yǎng)系統(tǒng)。5.7.1.2建議分別培養(yǎng)48h和72h。5.7.1.3最終結(jié)果應(yīng)在從穿刺之日起7個(gè)工作日之內(nèi)獲得。5.7.2肚臍紅細(xì)胞染色體分析標(biāo)準(zhǔn)5.7.2.計(jì)數(shù)至少計(jì)數(shù)在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)瓶中平均分布的20個(gè)細(xì)胞,記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。5.7.2.2分析至少分析在2個(gè)以上獨(dú)立培養(yǎng)的培養(yǎng)器皿中的5今細(xì)胞,所分析細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)。5.7.2.3-外殼分析2個(gè)細(xì)胞,如果發(fā)現(xiàn)有一個(gè)以上的細(xì)胞克隆,則每個(gè)克隆核型分析一個(gè)細(xì)胞。5.8關(guān)于細(xì)胞遺傳的研究5.8.1關(guān)于堅(jiān)果分析、計(jì)數(shù)和異常染色體的命名方法5.8.2最后，書面報(bào)告結(jié)束5.8.3關(guān)于細(xì)胞遺傳因素的報(bào)告：報(bào)告樣本d5.9產(chǎn)前診斷和記錄的數(shù)據(jù)的保存和樣本的保存6老年人患者治療對(duì)產(chǎn)前診斷核型異常的病例應(yīng)進(jìn)行隨訪,盡可能了解胎兒的發(fā)育情況和妊娠結(jié)局,并將隨訪結(jié)果記錄在產(chǎn)前診斷病歷中,盡可能明確染色體核型和臨床表現(xiàn)之間的關(guān)系。參考文獻(xiàn)按GB771487《文后參考文獻(xiàn)著錄規(guī)則》采用順序編碼制著錄,依參考文獻(xiàn)在正文中首次出現(xiàn)的先后順序用阿拉伯?dāng)?shù)字加方括號(hào)以角碼注明,并按引用先后順序排列于文末,一般不超過15篇。各條項(xiàng)目之間的符號(hào)(“,”和“.”等)必須按要求使用(見下面的例子),三個(gè)以上作者保留3位再加“,等”(中文文獻(xiàn))或“,etal”(英文文獻(xiàn));期刊文獻(xiàn)的格式舉例:BrantiganJW,CunninghamBW,WardenK,etal.Compressionstrengthofdonorboneforposteriorlumbarfusion[J].Spine,1993,18:1213-1221.張喆人,蔡春林,葉圣誕,等.110例75歲以上老年人老年人腹部手術(shù)的臨床分析[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,1995,14:336-338.注:頁碼之間連接用“-”(半字線),不能用“～”;起止頁碼注寫完整,不能用“1213-21”的形式;題目后加“[J]”表示來源于期刊文獻(xiàn),注意各條項(xiàng)目之間的標(biāo)點(diǎn)符號(hào)書寫正確。專著文獻(xiàn)的格式舉例:KhanMG.Cardiacdrugtherapy[M].4thed.London:WBSaundersCompany,1995.注:需加出版地項(xiàng)目,二版和二版以上加版次,頁碼之間連接用“-”(半字線),不能用“～”;起止頁碼注寫完整,不能用“1213-21”的形式,如參考全書可不加頁碼項(xiàng)目;題目后加“[M]”表示來源于專著文獻(xiàn),注意各條項(xiàng)目之間的標(biāo)點(diǎn)符號(hào)書寫正確。介入性產(chǎn)前診斷知情同意書A.1羊膜腔穿刺術(shù)知情同意書患者_(dá)_______,_______歲,因___________需要作羊膜腔穿刺術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷胎兒有無異常。羊膜腔穿刺術(shù)是一項(xiàng)相對(duì)安全的中孕期有創(chuàng)性介入性產(chǎn)前診斷技術(shù),存在但不局限于以下醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn):1)孕婦有發(fā)生出血、羊水滲漏、流產(chǎn)的可能。2)穿刺有損傷胎兒的可能性。3)因孕婦子宮畸形、胎盤位于子宮前壁、腹壁太厚、羊水量少等原因,可能發(fā)生羊水穿刺失敗。4)如術(shù)前孕婦存在隱性感染或術(shù)后衛(wèi)生條件不佳,有發(fā)生宮內(nèi)感染及胎兒感染死亡的可能。5)疼痛、緊張等刺激有誘發(fā)孕婦出現(xiàn)心腦血管意外的可能。鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個(gè)體差異以及其他無法預(yù)知的原因,即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下,上述風(fēng)險(xiǎn)仍有可能發(fā)生。醫(yī)務(wù)人員將嚴(yán)格按照醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作,盡最大努力減少上述風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。孕婦方應(yīng)提供真實(shí)有效的病史材料。孕婦方已充分了解該檢查的性質(zhì)、目的、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性,對(duì)其中的疑問已得到經(jīng)治醫(yī)生的解答。經(jīng)本人及家屬慎重考慮后同意接受產(chǎn)前診斷并愿將本次妊娠的最終結(jié)局及時(shí)與醫(yī)方溝通。為確認(rèn)上述內(nèi)容為雙方意思的真實(shí)表達(dá),醫(yī)方已履行了告知義務(wù),孕婦方已享有充分知情和選擇的權(quán)利,簽字生效。孕婦簽字:______日期:_______家屬簽字:________與孕婦關(guān)系:_________醫(yī)生簽字:__________日期:__________妊娠合并心臟病感染風(fēng)險(xiǎn)患者_(dá)_______,______歲,因___________需要行絨毛取材術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷。絨毛取材術(shù)是一項(xiàng)相對(duì)安全的早孕期有創(chuàng)性介入性產(chǎn)前診斷技術(shù),存在但不局限于以下醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn):1)孕婦有發(fā)生出血、流產(chǎn)的可能。2)穿刺有損傷胎兒可能性。3)因孕婦子宮畸形、腹壁太厚、胎盤位于子宮后壁、胎盤太薄等原因,可能發(fā)生絨毛取材失敗。4)如術(shù)前孕婦存在隱性感染或術(shù)后衛(wèi)生條件不佳,有發(fā)生宮內(nèi)感染及流產(chǎn)的可能。5)疼痛、緊張等刺激有誘發(fā)孕婦出現(xiàn)心腦血管意外的可能。鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個(gè)體差異以及其他無法預(yù)知的原因,即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下,上述風(fēng)險(xiǎn)仍有可能發(fā)生。醫(yī)務(wù)人員將嚴(yán)格按照醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作,盡最大努力減少上述風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。孕婦方應(yīng)提供真實(shí)有效的病史材料。孕婦方已充分了解該檢查的性質(zhì)、目的、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性,對(duì)其中的疑問已得到經(jīng)治醫(yī)生的解答。經(jīng)本人及家屬慎重考慮后同意接受產(chǎn)前診斷并愿將本次妊娠的最終結(jié)局及時(shí)與醫(yī)方溝通。為確認(rèn)上述內(nèi)容為雙方意思的真實(shí)表達(dá),醫(yī)方已履行了告知義務(wù),孕婦方已享有充分知情和選擇的權(quán)利,簽字生效。孕婦簽字:_______日期:_________胎兒并發(fā)癥的預(yù)防與處理患者_(dá)________,_________歲,因________需要行經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷。經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)是一項(xiàng)相對(duì)安全的中孕期有創(chuàng)性介入性產(chǎn)前診斷技術(shù),存在但不局限于以下醫(yī)療風(fēng)險(xiǎn):1)孕婦可能發(fā)生出血、胎盤出血、血腫、胎盤早剝、羊水滲漏、胎膜早破、胎死宮內(nèi)、晚期流產(chǎn)等手術(shù)并發(fā)癥。2)胎兒并發(fā)癥包括感染、出血、嚴(yán)重的心動(dòng)過緩、臍帶壓塞或血栓形成,以及穿刺造成的胎兒損傷。3)因孕婦子宮畸形、胎盤位于子宮后壁、腹壁太厚、臍血管異常等原因,可能發(fā)生穿刺失敗。4)如術(shù)前孕婦存在隱性感染或術(shù)后衛(wèi)生條件不佳,有發(fā)生宮內(nèi)感染及胎兒感染死亡的可能。5)疼痛、緊張等刺激有誘發(fā)孕婦出現(xiàn)心腦血管意外的可能。鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個(gè)體差異以及其他無法預(yù)知的原因,即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下,上述風(fēng)險(xiǎn)仍有可能發(fā)生。醫(yī)務(wù)人員將嚴(yán)格按照醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作,盡最大努力減少上述風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。孕婦方應(yīng)提供真實(shí)有效的病史材料。孕婦方已充分了解該檢查的性質(zhì)、目的、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性,對(duì)其中的疑問已得到經(jīng)治醫(yī)生的解答。經(jīng)本人及家屬慎重考慮后同意接受產(chǎn)前診斷并愿將本次妊娠的最終結(jié)局及時(shí)與醫(yī)方溝通。為確認(rèn)上述內(nèi)容為雙方意思的真實(shí)表達(dá),醫(yī)方已履行了告知義務(wù),孕婦方已享有充分知情和選擇的權(quán)利,簽字生效。孕婦簽字:________日期:_______孕產(chǎn)婦妊娠和新生兒體患者_(dá)____,______歲,因______胎兒細(xì)胞培養(yǎng)制備胎兒染色體是進(jìn)行產(chǎn)前診斷的一項(xiàng)技術(shù),在培養(yǎng)、分析過程中可能出現(xiàn)以下情況:1)培養(yǎng)失敗:由于活細(xì)胞數(shù)量少、質(zhì)量差或?qū)m內(nèi)感染等原因?qū)е录?xì)胞生長(zhǎng)較差或不生長(zhǎng),使培養(yǎng)失敗。2)影響檢測(cè)結(jié)果:細(xì)胞生長(zhǎng)較差以及染色體可分析核型過少或形態(tài)較差時(shí),影響分析結(jié)果。3)常規(guī)染色體檢查不能診斷染色體微小結(jié)構(gòu)改變、單基因遺傳病、多基因遺傳病、環(huán)境以及藥物導(dǎo)致的胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常。4)如孕婦術(shù)前存在隱性感染,則細(xì)胞培養(yǎng)可能因感染而失敗,無法得到產(chǎn)前診斷結(jié)果。如因細(xì)胞培養(yǎng)失敗而無法得到結(jié)果,則有再次取材的可能。鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個(gè)體差異以及其他無法預(yù)知的原因,即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下,上述情況仍有可能發(fā)生。醫(yī)務(wù)人員將嚴(yán)格按照醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作,盡最大努力減少上述情況的發(fā)生。孕婦方已充分了解該檢查的性質(zhì),對(duì)其中的疑問已得到經(jīng)治醫(yī)生的解答。經(jīng)本人及家屬慎重考慮后同意接受胎兒染色體檢查并愿將本次妊娠的最終結(jié)局及時(shí)與醫(yī)方溝通。為確認(rèn)上述內(nèi)容為雙方意思的真實(shí)表達(dá),醫(yī)方己履行了告知義務(wù),孕婦方己享有充分知情和選擇的權(quán)利,簽字生效。孕婦簽字:_______日期:__________家屬簽字:________與孕婦關(guān)系:_________醫(yī)生簽字:_______日期:_______附件b附件b介入性產(chǎn)前診斷技術(shù)操作程序新生兒及胎兒術(shù)前準(zhǔn)備B.1.1目的:主要用于有醫(yī)學(xué)指征的孕16周～22周+6的產(chǎn)前診斷。a)孕婦預(yù)產(chǎn)期年齡大于等于35歲;b)孕婦曾生育過染色體異?；純?c)夫婦一方有染色體結(jié)構(gòu)異常者;d)孕婦曾生育過單基因病患兒或先天性代謝病患兒:e)21—三體綜合征、18—三體綜合征產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)者;f)其他需要抽取羊水標(biāo)本檢查的情況。a)先兆流產(chǎn);b)術(shù)前兩次測(cè)量體溫(腋溫)高于37.2℃;c)有出血傾向(血小板≤70×109/L,凝血功能檢查有異常);e)無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。a)認(rèn)真核對(duì)適應(yīng)證及有無禁忌證:b)查血常規(guī),HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、ABO血型和Rh因子,如Rh(—),查間接Coombs’試驗(yàn),告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn),建議準(zhǔn)備抗D球蛋白;c)B超檢查了解胎兒情況以及胎盤附著情況。a)孕婦排空膀胱,取仰臥位,常規(guī)消毒鋪巾;b)超聲定位穿刺部位:c)將穿刺針垂直方向刺入宮腔,拔出針芯,見有淡黃色清亮羊水溢出,接注射器抽取2ml后,更換注射器,抽取羊水,取羊水量不宜多于30mL。插入針芯,拔出穿刺針。術(shù)畢超聲觀察胎心及胎盤情況;d)抽出羊水注入無菌試管,送實(shí)驗(yàn)室接種;e)如兩次穿刺未獲羊水時(shí)應(yīng)終止手術(shù),1～2周后再次手術(shù)。a)向孕婦說明可能發(fā)生的并發(fā)癥:b)囑孕婦若有腹痛、陰道出血、陰道流液等及時(shí)就診;c)禁止性生活2周;d)預(yù)約2周后復(fù)診。毛工夫人術(shù)后管理B.2.1目的主要用于有醫(yī)學(xué)指征的孕10～13+6周期間的產(chǎn)前診斷。絨毛取材術(shù)指征如下:a)孕婦預(yù)產(chǎn)期年齡大于等于35歲;d)孕婦曾生育過單基因病患兒或先天性代謝病患兒;e)21—三體綜合征、18—三體綜合征產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)者:B.2.3絨毛取材術(shù)禁忌證絨毛取材術(shù)禁忌證包括:b)術(shù)前兩次測(cè)量體溫(腋溫)高于37.2℃:c)有出血傾向(血小板≤70×109/L,凝血功能檢查有異常):e)無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。絨毛取材術(shù)術(shù)前準(zhǔn)備包括:a)認(rèn)真核對(duì)適應(yīng)證及有無禁忌證:b)查血常規(guī),HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、ABO血型和Rh因子,如Rh(—),查間接Coombs’試驗(yàn),告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn),建議準(zhǔn)備抗D球蛋白;c)B超檢查了解胎兒情況以及胎盤附著情況。B.2.5.1經(jīng)腹途徑(雙針套管法)操作步驟如下:a)孕婦排空膀胱,取仰臥位,常規(guī)消毒鋪巾;c)在超聲引導(dǎo)下,將引導(dǎo)套針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入胎盤。拔出針芯,將活檢針經(jīng)引導(dǎo)套針內(nèi)送入盤絨毛組織;d)接含2～4mL生理鹽水的20mL注射器,以5mL左右的負(fù)壓上下移動(dòng)活檢針以吸取絨毛組織;f)術(shù)畢超聲觀察胎心及胎盤情況;g)如引導(dǎo)套針兩次穿刺均未穿入胎盤絨毛組織則應(yīng)終止手術(shù),1周～2周后重新手術(shù)。B.2.5.2經(jīng)宮頸途徑操作步驟如下:a)孕婦排空膀胱,取膀胱截石位,常規(guī)消毒鋪巾;c)連接含2mL～4mL生理鹽水的20mL注射器,以5mL～10mL左右的負(fù)壓吸取絨毛組織。取絨毛量一般不超過25mg;d)術(shù)畢超聲觀察胎心及胎盤情況;e)如兩次穿刺均未吸出絨毛組織則應(yīng)終止手術(shù),1周～2周后重新手術(shù)。術(shù)后注意事項(xiàng)如下:a)向孕婦說明可能發(fā)生的并發(fā)癥;b)囑孕婦若有腹痛、陰道出血、陰道流液等及時(shí)就診;d)預(yù)約2周后復(fù)診。手術(shù)前準(zhǔn)備主要用于有醫(yī)學(xué)指征的孕18周以后的產(chǎn)前診斷。經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)指征如下:b)胎兒宮內(nèi)感染的診斷;c)胎兒血液系統(tǒng)疾病的產(chǎn)前診斷及風(fēng)險(xiǎn)估計(jì);B.3.3經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)禁忌證:經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)禁忌證如下:b)術(shù)前兩次測(cè)量體溫(腋溫)高于37.2℃;c)有出血傾向(血小板≤70×109/L,凝血功能檢查有異常);e)無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)前準(zhǔn)備包括:a)認(rèn)真核對(duì)適應(yīng)證及有無禁忌證;b)查血.常規(guī),HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、ABO血型和Rh因子,如Rh(—),查間接Coombs’試驗(yàn),告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn),建議準(zhǔn)備抗D球蛋白:c)B超檢查了解胎兒、臍帶和胎盤情況。經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)操作步驟包括:a)孕婦排空膀胱,取仰臥位,常規(guī)消毒鋪巾;c)在超聲引導(dǎo)下,將穿刺針經(jīng)腹壁及子宮穿刺入臍帶:d)拔出針芯,連接注射器,抽取需要量的臍血,取血量不宜多于5mL。插入針芯后拔針:f)手術(shù)時(shí)間不宜超過20min,如穿刺針兩次經(jīng)皮穿刺均未穿入臍帶則應(yīng)終止手術(shù),1周～2周后重新手術(shù)。B.3.6術(shù)后注意事項(xiàng)術(shù)后注意事項(xiàng)包括:a)向孕婦說明可能發(fā)生的并發(fā)癥;b)囑孕婦若有腹痛、陰道出血、陰道流液、胎動(dòng)異常等及時(shí)就診;c)禁止性生活2周;d)預(yù)約2周后復(fù)診。附件c附件對(duì)羊水細(xì)胞嵌合體的真實(shí)性評(píng)估及處理規(guī)則細(xì)胞計(jì)算機(jī)實(shí)驗(yàn)c.i.3.1和3.2C.1.1.1培養(yǎng)瓶法:每個(gè)培養(yǎng)瓶中計(jì)數(shù)8個(gè)～10個(gè)細(xì)胞,總共16個(gè)細(xì)胞。C.1.1.3在收獲之前,必須計(jì)數(shù)每個(gè)培養(yǎng)瓶或器皿中的克隆數(shù)目,對(duì)于培養(yǎng)瓶法,每個(gè)培養(yǎng)瓶中至少應(yīng)該有12個(gè)克隆才能收獲。C.1.2需要進(jìn)行第二階段的情形當(dāng)最初的工作中發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞時(shí)才需要分析額外的細(xì)胞,而不是在每一份羊水標(biāo)本中都常規(guī)計(jì)數(shù)大量的細(xì)胞。C.1.3第二階段的三種工作程度C.I.3.1高強(qiáng)度的額外工作(extensiveadditionalwork-up)C.培養(yǎng)瓶法:在第二個(gè)培養(yǎng)瓶中再分析10個(gè)細(xì)胞,從第三個(gè)培養(yǎng)瓶中再分析20個(gè)細(xì)胞,總共分析50個(gè)細(xì)胞。需要指出的是,嵌合是在對(duì)原始培養(yǎng)的分析的基礎(chǔ)上提出的,發(fā)現(xiàn)異常的最初的計(jì)數(shù)和分析的細(xì)胞,在評(píng)估嵌合的百分?jǐn)?shù)和可信程度的時(shí)候不被計(jì)算在內(nèi)。如,共計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞,在培養(yǎng)瓶A的10個(gè)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)異常,在培養(yǎng)瓶B和C中共計(jì)數(shù)40個(gè),只在后40個(gè)細(xì)胞中進(jìn)行評(píng)估。C.原位法:額外檢查24個(gè)集落中的細(xì)胞。C.1.3.2中等強(qiáng)度的額外工作(moderateadditionalwork-up)C.培養(yǎng)瓶法:在初始的培養(yǎng)瓶中再檢查10個(gè)細(xì)胞,總共檢查30個(gè)細(xì)胞,如果初始的培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞數(shù)不夠,則需要收獲第三瓶。C.原位法:額外檢查12個(gè)克隆的細(xì)胞。所有的原先檢查過的細(xì)胞都必須重新針對(duì)特異性的異常進(jìn)行檢查。2012年，中國(guó)產(chǎn)品診斷雜志電子應(yīng)用程序的候選人計(jì)劃1.胎兒宮內(nèi)感染;2.產(chǎn)前篩查的策略與評(píng)價(jià);3.雙胎妊娠相關(guān)疾病的臨床診治;附件d規(guī)范附件細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷報(bào)告單式樣胎兒x染色體的檢測(cè)病人姓名性別年齡產(chǎn)前診斷指征:孕婦高齡標(biāo)本類型:羊水標(biāo)本采集日期:方法:原位法染色體分析(320條帶),G顯帶該胎兒羊水細(xì)胞染色體數(shù)目45條,少一條X染色體,建議遺傳咨詢。檢驗(yàn)者:審核者:注:常規(guī)染色體檢查不能診斷染色體微小結(jié)構(gòu)改變、單基因遺傳病、多基因遺傳病、環(huán)境以及藥物導(dǎo)致的胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常。1胎兒染色體檢查所受限制WS322本部分規(guī)定了產(chǎn)前診斷的臨床工作、實(shí)驗(yàn)室工作以及產(chǎn)前診斷病例的追蹤和隨訪的要求。本部分適用于已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu),采用細(xì)胞遺傳學(xué)方法等國(guó)家認(rèn)可的相關(guān)技術(shù),對(duì)孕婦實(shí)施胎兒染色體檢查,從而對(duì)胎兒是否罹患目前細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)可診斷的染色體病作出產(chǎn)前診斷。經(jīng)收獲并染色后貼附在細(xì)胞培養(yǎng)物生長(zhǎng)基底上相對(duì)聚集的細(xì)胞克隆。至少有兩個(gè)細(xì)胞含有相同的額外染色體或染色體結(jié)構(gòu)異常,或至少有3個(gè)細(xì)胞均丟失同一號(hào)染色體。由染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常所引起的疾病稱為染色體。由兩種或多種具有不同核型的細(xì)胞系所組成的個(gè)體稱為嵌合體。AnInternationalSystemforHumanCytogeneticNomenclaturel995,人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制19953.2人類細(xì)胞遺傳國(guó)際命名體制2005AnInternationalSystemforHumanCytogeneticNomenclaturel995,人類細(xì)胞遺傳學(xué)國(guó)際命名體制2005按照重要技術(shù)檔案保存,保存期限至少20年。操作程序參見附錄B.1。操作程序參見附錄B.2。5.3標(biāo)本的備份培養(yǎng)和質(zhì)量控制5.3.1一般要求每份標(biāo)本至少建立兩個(gè)獨(dú)立的培養(yǎng)系統(tǒng)。90%以上的常規(guī)外周血分析應(yīng)在收到標(biāo)本之日起21個(gè)工作日之內(nèi)發(fā)出最終書面報(bào)告。特殊染色和分析可以酌情延遲發(fā)放報(bào)告時(shí)間。有特殊情況時(shí)要及時(shí)與被檢人和送檢單位取得聯(lián)系。每年的診斷失敗率不超過2%。5.3.2G顯帶染色體標(biāo)本應(yīng)達(dá)到320條帶的分辨率5.3.3外周血染色體分析標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù):至少計(jì)數(shù)20個(gè)細(xì)胞,記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常。對(duì)可能有性染色體異常病例的標(biāo)本,至少計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞。分析:分析5個(gè)細(xì)胞,所分析細(xì)胞的染色體分辨率應(yīng)達(dá)到320條帶水平。核型分析:2個(gè)細(xì)胞,如果標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)有一個(gè)以上的細(xì)胞克隆,則每個(gè)克隆核型分析一個(gè)細(xì)胞。5.4.1至少應(yīng)建立兩個(gè)獨(dú)立的培養(yǎng)系統(tǒng)并分別置于不同的培養(yǎng)箱中。5.4.2除了經(jīng)皮臍血管穿刺獲取的臍血標(biāo)本外,其他標(biāo)本應(yīng)有備份培養(yǎng)以備進(jìn)一步研究所需。5.4.3如果需要對(duì)父母的染色體進(jìn)行分析以助于鑒別胎兒染色體異常或異態(tài)性,應(yīng)由同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行上述分析。5.4.4診斷失敗率不應(yīng)超過2%。應(yīng)盡可能明確所有診斷失敗的原因,診斷失敗的記錄以及相應(yīng)整改措施的記錄至少應(yīng)保存一年。5.4.5除了經(jīng)皮臍血管穿刺獲取的臍血染色體分析,90%以上的最終結(jié)果應(yīng)在從接收到標(biāo)本之日起28個(gè)工作日之內(nèi)完成并發(fā)出正式報(bào)告,除非需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。5.4.6不能達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)將標(biāo)本轉(zhuǎn)送到其他實(shí)驗(yàn)室,直至達(dá)到上述要求為止。5.4.7對(duì)異常診斷結(jié)果應(yīng)盡可能進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)隨訪,以對(duì)產(chǎn)前診斷結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)。如果在臨床上采用直接法(未培養(yǎng))染色體制備,則應(yīng)同時(shí)采用培養(yǎng)法(定義為培養(yǎng)時(shí)間在48h以上)染色體制備方法。最終的書面報(bào)告應(yīng)包括細(xì)胞培養(yǎng)的方法。采用ISCNl995或者ISCN2005均可。一般信息:患者姓名、年齡、標(biāo)本采集日期、實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本日期、實(shí)驗(yàn)室編號(hào)、標(biāo)本的唯一編號(hào)、送檢醫(yī)師的姓名。檢查內(nèi)容的報(bào)告應(yīng)包括:產(chǎn)前診斷指征;細(xì)胞培養(yǎng)的方法:顯帶方法、染色體分辨率;對(duì)所分析細(xì)胞的現(xiàn)行ISCN命名;除非有明確胎兒性別的醫(yī)療指征,不得報(bào)告胎兒性別。應(yīng)標(biāo)注實(shí)驗(yàn)室結(jié)果報(bào)告的局限性。至少應(yīng)由兩個(gè)有資質(zhì)的人員對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析和評(píng)估。對(duì)結(jié)果的解釋應(yīng)包括:和臨