制烏頭炮制前后類和二苯乙烯苷含量變化

制烏頭炮制前后類和二苯乙烯苷含量變化

烏爾是蓼科植物的一個(gè)有效成分。它的有效成分是：一類可以促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，抑制甘油（tg）和膽固醇對(duì)腸道的吸收，從而降低血脂。另一個(gè)有效成分是二苯乙烯胺鈉，它具有減少膽固醇的功能。何首烏炮制前后用法各異,作用亦不同,探明其在炮制前后主要成分的變化是很有必要的。本文采用紫外分光光度法測(cè)定了何首烏炮制前后蒽醌類和二苯乙烯苷的含量。1藥品、化學(xué)品測(cè)定JASCOV-560分光光度計(jì),JASCO日本分光株式會(huì)社產(chǎn)品;電熱恒溫水浴鍋,江蘇省醫(yī)療器械廠產(chǎn)品;AEL-160電子讀數(shù)天平,日本島津公司產(chǎn)品;TG328A電光分析天平,上海天平儀器廠產(chǎn)品。對(duì)照品大黃素(含量為99.5%),購(gòu)自大連市藥品檢定所,批號(hào)020315;二苯乙烯苷對(duì)照品(含量為99.6%),由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,批號(hào)020803;何首烏,購(gòu)自安徽亳州藥材公司,經(jīng)鑒定為蓼科植物何首烏之塊根;制何首烏按《中國(guó)藥典》(2000版一部)由本室炮制。所用試劑均為分析純:醋酸鎂[Mg(Ac)2],沈陽(yáng)試劑一廠產(chǎn)品,批號(hào)020805;氯仿(CH3Cl),天津市天河化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號(hào)020217;甲醇(CH3OH),公主嶺市化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號(hào)020216。2方法和結(jié)果2.1大黃素溶液配制精密稱取對(duì)照品大黃素2.0mg于10mL量瓶中,用甲醇溶解、稀釋并定容至刻度,即得大黃素溶液,備用。精密稱取對(duì)照品二苯乙烯苷2.5mg于10mL量瓶,用于95%的乙醇溶解、稀釋并定容至刻度,即得二苯乙烯苷對(duì)照品溶液,備用。2.2吸收光譜法的繪制2.2.1紫外分光光度法精密量取大黃素0.5mg于10mL量瓶中。用0.5%Mg(Ac)2溶液顯色,并加0.5%Mg(Ac)2至刻度,在紫外分光光度計(jì)上,以0.5%Mg(Ac)2為空白對(duì)照,在波長(zhǎng)400~700范圍內(nèi)掃描,得吸收?qǐng)D譜。大黃素經(jīng)0.5%Mg(Ac)2顯色后,其在510nm處有一最大吸收峰,可用于含量測(cè)定。2.2.2c.c.乙醇為空白對(duì)照?qǐng)D精密量取二苯乙烯苷對(duì)照品0.3mg于10mL量瓶中,95%乙醇稀釋并加至刻度,以95%乙醇為空白對(duì)照,在200~400nm處掃描,得吸收?qǐng)D譜。二苯乙烯苷的乙醇溶液在波長(zhǎng)310nm處有最大吸收峰。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2.3.1大黃素吸收度計(jì)算精密吸取大黃素對(duì)照品溶液0.1,0.4,0.6,0.8,1.0mL于10mL量瓶中,用0.5%Mg(Ac)2顯色并稀釋至刻度,在510nm處以0.5%Mg(Ac)2為空白,依次測(cè)其吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo),大黃素濃度為橫坐標(biāo),經(jīng)回歸得回歸方程:Y=29.70×10-3X+7.95×10-3,r=0.9993(n=6)。結(jié)果表明,大黃素濃度在2.1~21.0mg/L范圍內(nèi),與吸收度呈良好的線性關(guān)系。2.3.2吸收度的測(cè)定精密吸取二苯乙烯苷對(duì)照溶液50,100,200,300,400μL分別于10mL量瓶中,95%乙醇為空白,依次測(cè)定其吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),經(jīng)回歸得回歸方程:Y=73.00X+0.0420,r=0.9992(n=5)。結(jié)果表明,二苯乙烯苷濃度在1.25~10.0mg/L范圍內(nèi),與吸收度呈良好的線性關(guān)系。2.4日內(nèi)在7d,評(píng)論員7.分別取同一大黃素和二苯乙烯苷對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣,測(cè)定日內(nèi)、日間精密度。結(jié)果:大黃素日內(nèi)RSD為0.95%(n=4),日間RSD為1.92%(n=4);二苯乙烯苷日內(nèi)RSD為0.75%(n=4),日間RSD為2.3(n=4)。2.5加標(biāo)回收率測(cè)定分別精密量取大黃素和二苯乙烯苷對(duì)照品儲(chǔ)備液0.3,0.5,0.9mL和75,250,400μL各5份,分別用0.5%Mg(Ac)2和95%乙醇稀釋至10mL,按上述方法測(cè)定其濃度,計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。2.6游離ac2提取法精密稱取生何首烏、制何首烏各0.5g于索氏提取皿中,加入氯仿150mL,提取4h,至氯仿回滴液無(wú)色,游離蒽醌提盡,過(guò)濾,揮干氯仿,以0.5%Mg(Ac)2溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,反復(fù)操作3次。并加0.5%Mg(Ac)2至刻度。在510nm處,以0.5%Mg(Ac)2為空白,測(cè)定吸收度,數(shù)據(jù)代入回歸方程求得游離蒽醌的含量。上述過(guò)濾后殘?jiān)?加95%乙醇200mL,水浴回流4h,使二苯乙烯苷及結(jié)合蒽醌提取安全,過(guò)濾,回收部分乙醇,定容于50mL量瓶中(A)。取2mL置于20mL量瓶中,以95%乙醇定容。在310nm處,以95%乙醇為空白,測(cè)其吸收度,求得二苯乙烯苷的含量,結(jié)果見(jiàn)表2。3結(jié)合型衍生物的含量現(xiàn)代藥理研究已證實(shí),制何首烏具有增強(qiáng)免疫、改善記憶障礙及抗衰老等作用,而生何首烏有一定的毒性,長(zhǎng)時(shí)間服用可引起動(dòng)物消瘦、倦怠、動(dòng)作遲緩和死亡。通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較,制何首烏中游離蒽醌的含量高于生何首烏中游離蒽醌的含量,而生何首烏中結(jié)合蒽醌的含量則明顯高于制何首烏,提示生何首烏中有瀉下作用的結(jié)合型蒽醌衍生物炮制后水解成無(wú)瀉下作用的游離蒽醌衍生物,而后者具有滋補(bǔ)作用;生何首烏中二苯乙烯苷的含量略高于制何首