嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)檢測規(guī)程

文件編號(hào)：HAMK-OI--2015版本號(hào)：1.0生效日期：2015年12月30日發(fā)放號(hào)：PAGEPAGE5嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的為了規(guī)范親和柱凈化樣本中嘔吐毒素的操作流程，特制訂本操作規(guī)程。范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于糧食、飼料、食品中嘔吐毒素的檢測。檢出限和定量限項(xiàng)目島津安捷倫樣本檢出限（μg/kg）樣本定量限（μg/kg）樣本檢出限（μg/kg）樣本定量限（μg/kg）DON12.9636.72151503職責(zé)部門名稱部門職責(zé)質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)本制度的實(shí)施。負(fù)責(zé)本制度的監(jiān)督執(zhí)行。程序5.1原理測定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品經(jīng)過提取、過濾后，緩慢的通過嘔吐毒素免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫嘔吐毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測。5.2溶液配制5.2.1PBS緩沖液：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL蒸餾水或去離子水溶解，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.0，再用蒸餾水或去離子水定容至1L。上述PBS緩沖液用于樣品的提取、稀釋，以及親和柱的清洗。5.2.2嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液：先用色譜級(jí)甲醇將高標(biāo)稀釋到5ppm，再用水將其稀釋到1ppm，此時(shí)標(biāo)品的溶劑為20%甲醇，然后再用20%甲醇將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋到500ppb、200ppb、100ppb、50ppb。5.3樣品前處理5.3.1玉米、小麥、面粉、配合飼料、濃縮料、精補(bǔ)料等吸水性較小的樣本將樣品粉碎，稱取25g樣品，加入5g聚乙二醇，加入125mL蒸餾水；高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min（或用搖床200r/min～300r/min劇烈振蕩20min）；用快速定性濾紙過濾，收集濾液；濾液再用微纖維濾紙過濾，并收集濾液作為上樣液；取2.5mL上樣液過免疫親和柱凈化。稀釋倍數(shù)：25.3.2麩皮、豆皮、玉米胚芽粕、米糠等吸水性較強(qiáng)的樣本稱取10g樣品，加入100mL蒸餾水；高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min（或用搖床200r/min～300r/min劇烈振蕩20min）；用快速定性濾紙過濾，收集濾液；濾液再用微纖維濾紙過濾，并收集濾液作為上樣液；取5mL上樣液過免疫親和柱凈化。稀釋倍數(shù)：25.3.3酒類取脫氣的酒類樣品（含二氧化碳的酒類樣品，使用前先攪拌或超聲脫氣）或不含二氧化碳的酒類樣品25g，用PBS緩沖液定容至100mL；高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min（或用搖床200r/min～300r/min劇烈振蕩20min）；用快速定性濾紙過濾，收集濾液；濾液再用微纖維濾紙過濾，并收集濾液作為上樣液；取2mL上樣液過免疫親和柱凈化。稀釋倍數(shù)：25.3.4醬油、醋、醬及醬制品取樣品25g，用PBS緩沖液定容至100mL；高速均質(zhì)（≥