第四章植物組織培養(yǎng)技術

04第四章植物組織培養(yǎng)技術2023/12/1第四章植物組織培養(yǎng)技術

植物離體繁殖（propagationinvitro）又稱植物快繁或微繁，是指利用植物組織培養(yǎng)技術對外植體進行離體培養(yǎng)，使其短期內(nèi)獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。一、概念和特點（一）概念I概述

2第四章植物組織培養(yǎng)技術1、繁殖效率高。2、培養(yǎng)條件可控性強。3、占用空間小。4、管理方便，利于自動化控制。5、便于種質(zhì)保存和交換。（二）特點3第四章植物組織培養(yǎng)技術二、植物快繁器官形成方式（再分化形成植株的方式）根據(jù)器官形成方式的不同，將植物器官的再生分為五種類型，即短枝發(fā)生型（不定芽型）、叢生芽發(fā)生型（器官型）、器官發(fā)生性、胚狀體發(fā)生型和原球莖發(fā)生型。第四章植物組織培養(yǎng)技術（一）短枝發(fā)生型（不定芽型）

短枝發(fā)生型是指外植體攜帶的帶葉莖段，在適宜的培養(yǎng)環(huán)境中萌發(fā)，形成完整植株，再將其剪成帶葉莖段，繼代再成苗的繁殖方法。特點：①繁殖率高，利用外植體的芽特別是原受到抑制的腋芽和大量形成不定芽。②能保持該種植物遺傳穩(wěn)定性。③可使繁殖周期長的林木縮短其童年期5第四章植物組織培養(yǎng)技術（二）叢生芽發(fā)生型(器官型)

叢生芽發(fā)生型是指使外植體攜帶的頂芽或腋芽在適宜培養(yǎng)環(huán)境中不斷發(fā)生腋芽而呈叢生狀芽，或者直接從外植體上長出多個從芽，將單個芽轉入生根培養(yǎng)基中，誘導生根成苗的繁殖方法。叢生芽發(fā)生型是大多數(shù)植物快繁的主要途徑，它不經(jīng)過愈傷組織，能使無性系后代保持原品種的特性，在生產(chǎn)中普遍應用。6第四章植物組織培養(yǎng)技術特點：①繁殖率非常高，但繁殖速度較慢。②遺傳性穩(wěn)定。7第四章植物組織培養(yǎng)技術（三）器官發(fā)生型（已講過）是指外植體在適宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，然后經(jīng)過再分化誘導愈傷組織產(chǎn)生不定芽，或外植體不形成愈傷組織而直接從其表面形成不定芽，將芽苗轉移到生根培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)獲得完整植株的繁殖方法。①繁殖速度較快。②遺傳性不穩(wěn)定，已產(chǎn)生變異。③愈傷組織是遺傳轉化、細胞培養(yǎng)或原生質(zhì)體培養(yǎng)的良好材料第四章植物組織培養(yǎng)技術器官發(fā)生型也是許多植物快繁的主要方式。由于不定芽形成的數(shù)量與腋芽數(shù)目無關，其增殖率高于叢生芽發(fā)生型。但經(jīng)過愈傷組織途徑或者多次繼代培養(yǎng)后，容易導致細胞分裂不正常，增加變異植株發(fā)生頻率。如香蕉繼代次數(shù)控制在8代之內(nèi)，再生植株的變異率則可控制在3%左右。9第四章植物組織培養(yǎng)技術表現(xiàn)嵌合性狀的植株通過此方式再生時，往往導致嵌合性狀發(fā)生分離而失去原有價值。如觀賞植物色彩鑲嵌的葉子、帶金邊或者銀邊等性狀的植物，通過器官發(fā)生性途徑再生植株時，可能導致這些觀賞性狀消失。這類植株快繁時，應通過叢生芽途徑進行。10第四章植物組織培養(yǎng)技術ABEC花燭葉片離體培養(yǎng)及植株再生11第四章植物組織培養(yǎng)技術（四）胚狀體發(fā)生型

胚狀體發(fā)生型是指外植體在適宜培養(yǎng)環(huán)境中，經(jīng)誘導產(chǎn)生體細胞胚的繁殖方法，從而形成小植株的繁殖方法。分為間接途徑（經(jīng)愈傷途徑）和直接途徑兩種。胚狀體發(fā)生途徑具有成苗數(shù)量大、速度快、結構完整的特點，因而是外植體增殖系數(shù)最大的途徑。12第四章植物組織培養(yǎng)技術胚狀體發(fā)生型特點：①胚狀體發(fā)生數(shù)量多、速度快、結構完整、繁殖系數(shù)高。②遺傳性穩(wěn)定13第四章植物組織培養(yǎng)技術菊花花瓣體細胞胚胎發(fā)生及體胚發(fā)育過程的掃描電鏡觀察14第四章植物組織培養(yǎng)技術（五）原球莖發(fā)生型

原球莖發(fā)生型是蘭科植物的一種快繁方式，它是指莖尖或腋芽外植體經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生原球莖（即扁球狀體、基部生假根）的繁殖類型。15第四章植物組織培養(yǎng)技術原球莖是蘭花種子發(fā)芽過程中的一種形態(tài)學構造。種子萌發(fā)初期并不出現(xiàn)胚根，只是胚逐漸膨大，以后種皮的一端破裂，腫脹的胚呈小圓錐狀，故稱為原球莖。原球莖是短縮的、呈珠粒狀的、由胚性細胞組成的、類似嫩莖的器官，它可以增殖，形成原球莖叢。由莖尖或腋芽外植體誘導產(chǎn)生原球莖，切割原球莖進行增殖，或停止切割使其繼續(xù)培養(yǎng)而轉綠，產(chǎn)生毛狀假根，葉原基發(fā)育成幼葉，將其轉移培養(yǎng)生根，形成完整植株。16第四章植物組織培養(yǎng)技術17第四章植物組織培養(yǎng)技術植物快繁的程序包括四個階段：無菌（或初代）培養(yǎng)的建立繁殖體增殖芽苗生根小植株的移栽馴化II植物快繁程序18第四章植物組織培養(yǎng)技術一、無菌培養(yǎng)的建立這個階段的任務是母株和外植體的選取、無菌培養(yǎng)物的獲得及外植體的啟動生長，以利于離體材料在適宜培養(yǎng)環(huán)境中以某種器官發(fā)生類型進行增殖。19第四章植物組織培養(yǎng)技術第四章植物組織培養(yǎng)技術21第四章植物組織培養(yǎng)技術二、增殖培養(yǎng)1.培養(yǎng)材料的增殖方式五種方式。(取決于培養(yǎng)目的和材料自身的可能性。)一般大多數(shù)植物采用無菌短枝或腋芽萌發(fā)或誘導不定芽產(chǎn)生，再以芽繁殖芽的方式進行增殖；蘭科植物、百合等則采用原球莖增殖途徑，以保障繁殖材料的遺傳穩(wěn)定性。22第四章植物組織培養(yǎng)技術2.增殖培養(yǎng)基增殖率是植株快速繁殖特別是商業(yè)性繁殖的重要指標。外植體在每次繼代培養(yǎng)中，應能產(chǎn)生最大數(shù)量的有效繁殖體?；九囵B(yǎng)基一般與啟動生長培養(yǎng)基相同，而細胞分裂素和礦物元素的濃度水平則高于啟動生長培養(yǎng)基。一般MS+BA1~3mg/ml+NAA0.1~1mg/ml。23第四章植物組織培養(yǎng)技術3.增殖體的大小和切割方法一般攜帶一個莖節(jié)，但第一次增殖的莖段一般都有2~4個莖節(jié)。莖段可以垂直插入培養(yǎng)基中，但插入的深度不應淹沒莖節(jié)；或水平放入培養(yǎng)基表面，以刺激側芽的萌動。24第四章植物組織培養(yǎng)技術 青花菜增殖 枇杷增殖第四章植物組織培養(yǎng)技術26第四章植物組織培養(yǎng)技術27第四章植物組織培養(yǎng)技術三、芽苗生根

將單個芽苗轉移到生根培養(yǎng)基或適宜環(huán)境中誘導生根。1.離體生根（試管內(nèi)生根）降低無機鹽濃度（1/2MS或者1/4MS），減少或不需要細胞分裂素，增加生長素的濃度。對有些植物，如果芽苗在含有生長素的培養(yǎng)基中生長1～2d，再轉移至無生長素的培養(yǎng)基中，或芽苗在含生長素的生根溶液中浸蘸后直接插入無生長素的培養(yǎng)基中，濕度85%以上，溫度25℃，弱光或黑暗條件。28第四章植物組織培養(yǎng)技術29第四章植物組織培養(yǎng)技術2.活體生根（試管外生根）

芽苗先在生長素中快速浸蘸或在含有相對高濃度生長素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)5~10天，然后在溫室中栽入培養(yǎng)基質(zhì)，經(jīng)常噴霧，給予高濕度環(huán)境，幾天后便可自行生根。

30第四章植物組織培養(yǎng)技術四、移栽馴化

試管小植株的移栽馴化是試管苗從異養(yǎng)到自養(yǎng)的轉變，有一個逐漸適應過程。移栽前需對試管植株進行高光強煉苗，使植株生長粗壯，并打開瓶口，降低濕度，使其逐漸適應外界環(huán)境。1.移栽2.馴化管理31第四章植物組織培養(yǎng)技術１.移栽

首先應洗去小植株根部附著的培養(yǎng)基，避免微生物的繁殖污染，造成小苗死亡。然后將小植株栽入人工配制的混合培養(yǎng)基質(zhì)中，基質(zhì)用保濕又透氣的材料，如蛭石、珍珠巖、粗沙、泥炭等按比例混合，以利小植株生長。幾天后小植株可形成新的功能根系。32第四章植物組織培養(yǎng)技術2.馴化管理

移栽的試管小植株和活體生根的小植株，其濕度的控制十分重要。因試管苗在高濕（90％～100％的相對濕度）環(huán)境中生長，莖葉表面防止水分散失的角質(zhì)層等幾乎全無，根系又不發(fā)達，移栽后難以保證水分平衡，即使根系周圍有足夠的水分也不行。所以，應采用加覆塑料薄膜、經(jīng)常噴霧的方法，提高小植株周圍的空氣濕度，減少葉面蒸騰。同時，逐漸降低空氣相對濕度，使其適應自然環(huán)境條件。33第四章植物組織培養(yǎng)技術移栽小植株還應注意光、溫控制。移栽初期光照強度應較弱，經(jīng)過一段時間適應后，增加光照強度（漫射），如1500～4000lx，甚至10000lx。移栽小植株生長所需的適宜溫度與植物種類有關，喜溫性植物以25℃左右為宜，喜涼性植物則以18～20℃為好。溫度過高導致蒸騰作用加強，水分失衡，微生物滋生等；溫度過低則使幼苗生長遲緩或不易存活。如使基質(zhì)溫度高于空氣溫度2～3℃，則有利于生根和促進根系發(fā)育，提高存活率。34第四章植物組織培養(yǎng)技術此外，在移栽小植株的馴化管理階段，還應防止菌類滋生，適當噴一定濃度的殺菌劑（殺菌靈）可有效保護移栽小植株的正常生長。35第四章植物組織培養(yǎng)技術36第四章植物組織培養(yǎng)技術III影響植物快繁的因素植物快繁的目的是以盡可能高的效率生產(chǎn)試管苗，獲得最大的經(jīng)濟效益。因此，在快繁時應使各種影響因素處于最適合快繁的狀態(tài)。37第四章植物組織培養(yǎng)技術一、外植體外植體的來源：最適的為莖尖、帶芽莖段，也可以利用葉片、子葉、根段、花器官組織等。外植體生理年齡：幼嫩組織分化能力更強。外植體大?。翰荒芴?，否則影響成活率。除非是用于脫毒苗的生產(chǎn)。38第四章植物組織培養(yǎng)技術二、培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基應用最為廣泛。對于某些植物及生根階段，以1/4或1/2MS較好。蔗糖和葡萄糖濃度為2-4%。生根時稍低。植物生長調(diào)節(jié)劑：主要以細胞分裂素和生長素的配合使用，調(diào)節(jié)外植體的生長和分化。另外ABA、GA、CCC等也具有不同的作用。培養(yǎng)基的物理特性：以固體培養(yǎng)較為普遍，也有采用液體培養(yǎng)，如蘭花原球莖的增殖。39第四章植物組織培養(yǎng)技術三、培養(yǎng)條件光照：1000-3000lx，后期可增強。14-16h/d。溫度：與植物的原產(chǎn)地相應。一般為25±2℃。有時可進行高溫或低溫的預處理。濕度：要求環(huán)境相對濕度不能太低，一般在70-80%。氣體：要求培養(yǎng)基及培養(yǎng)瓶通氣良好，同時及時轉接。液體培養(yǎng)要求振蕩培養(yǎng)，促進氧氣交換。40第四章植物組織培養(yǎng)技術四、繼代培養(yǎng)主要指對階段Ⅱ增殖形成的芽叢、胚狀體或原球莖等進行轉接繼代。繼代間隔時間一般為20天左右。41第四章植物組織培養(yǎng)技術五、移栽根系結構不完善的試管苗移栽后不易存活。要求根系結構完整，具根毛，再生根的吸收能力強。葉表皮組織不發(fā)達的試管苗也不易移栽存活。移栽要求打開瓶口馴化2-3天；或在瓶內(nèi)添加一些生長延緩劑如PP333、CCC等培育壯苗。42第四章植物組織培養(yǎng)技術IV植物快繁的商業(yè)化應用

植物快繁最重要的用途是進行植物的商業(yè)化生產(chǎn)。世界上快繁商業(yè)化開始于上個世紀美國的蘭花工業(yè)。我國的香蕉快繁苗占全國組培苗的2/3。其次有甘蔗、蘭花、馬鈴薯、甘薯等。43第四章植物組織培養(yǎng)技術園藝植物種苗工廠化生產(chǎn)44第四章植物組織培養(yǎng)技術

一、商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模及工藝流程1.試管苗生產(chǎn)規(guī)模的確定

商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的確定應以市場需求為標準。

試管苗生產(chǎn)規(guī)模的確定是以無菌工作臺和培養(yǎng)架的數(shù)量來衡量的。年產(chǎn)100萬株，接種室40~50m2，超凈工作臺8~10臺，培養(yǎng)室100-120m2

。45第四章植物組織培養(yǎng)技術2.商業(yè)化實驗室的設計

根據(jù)已確定的生產(chǎn)規(guī)模和組織培養(yǎng)的生產(chǎn)程序，試管苗生產(chǎn)的實驗室應盡量布局合理，使生產(chǎn)程序能連續(xù)、有效地進行。（1）環(huán)境要求遠離污染源（2）水電、交通（3）工藝流程（4）節(jié)能（5）無菌46第四章植物組織培養(yǎng)技術3.商業(yè)化生產(chǎn)的配套設施相應配套設施包括過渡培養(yǎng)室和露地煉苗場。47第四章植物組織培養(yǎng)技術4.商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程試管苗商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程是以其快繁程序為基礎建立起來的，如最成熟的草莓脫毒苗生產(chǎn)流程和葡萄試管快繁流程。通過莖尖脫毒建立起來的草莓商業(yè)化試管苗生產(chǎn)，除必須配備的培養(yǎng)和馴化等條件外，還應增加病毒鑒定室。48第四章植物組織培養(yǎng)技術二、商業(yè)化生產(chǎn)及效益分析1.試管苗增殖率的估算試管苗的增殖率多數(shù)以芽或苗為單位，但原球莖或胚狀體多以瓶為單位。（1）增殖率的理論值是指接種一個芽或一塊增殖培養(yǎng)物，經(jīng)過一段時間培養(yǎng)后得到的芽或苗數(shù)。Y=mXn

（Y—年繁殖數(shù)，m—無菌母株苗數(shù)，X—每個培養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)，n—全年可增殖的周期數(shù)）（2）增殖率的實際值是指接種一個芽或一個苗，經(jīng)過實際繁殖周期，得到的實際芽或苗數(shù)。實際增殖數(shù)與理論增殖數(shù)出現(xiàn)很大差異的原因是：①污染淘汰；②出售、轉讓和實驗所用；③移栽死亡；④培養(yǎng)容器等設備的限制。49第四章植物組織培養(yǎng)技術2.生產(chǎn)計劃的制定和實施（1）生產(chǎn)計劃的制定

商業(yè)化生產(chǎn)計劃制定的依據(jù)是市場對試管苗的種類、品種及數(shù)量的需求及趨勢，實驗室具備的生產(chǎn)條件和規(guī)模。首先應提出全年銷售目標，再根據(jù)實際生產(chǎn)中各個環(huán)節(jié)的消耗，制定出相應的全年生產(chǎn)計劃，一般生產(chǎn)數(shù)量應比計劃銷售的數(shù)量增加20％～30％。

50第四章植物組織培養(yǎng)技術（2）生產(chǎn)計劃的實施

生產(chǎn)計劃實施的步驟為：①準備繁殖材料。②合格繁殖材料的快速增殖。存瓶增殖總瓶數(shù)＝月計劃生產(chǎn)苗數(shù)／每個增殖瓶月可產(chǎn)苗數(shù)

月計劃生產(chǎn)苗數(shù)＝每個操作人員每天可接苗數(shù)×月工作日×人員數(shù)控制試管苗生產(chǎn)中的增殖總瓶數(shù)，便于在一個周期內(nèi)全部更新一次培養(yǎng)基，使增殖材料處于不同生長階段的最佳狀態(tài)，提高其質(zhì)量。51第四章植物組織培養(yǎng)技術

3.產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控如接種狀況、污染率、生長情況、生根苗數(shù)量、出瓶苗質(zhì)量等，并建立試管苗出瓶標準。52第四章植物組織培養(yǎng)技術4.商業(yè)化生產(chǎn)效益分析

通過成本核算可以了解：①生產(chǎn)過程中的各種消耗；②管理工作的質(zhì)量；③各項技術措施的效果；④產(chǎn)品價格的制定標準。53第四章植物組織培養(yǎng)技術

試管苗商業(yè)化的生產(chǎn)成本應包括：①人工費用。②生產(chǎn)物資費用。③設備折舊費用。④水電費用。⑤其他費用。54第四章植物組織培養(yǎng)技術三、降低商業(yè)化生產(chǎn)成本的措施針對試管苗生產(chǎn)所需的費用，應采取相應措施降低生產(chǎn)成本，增強產(chǎn)品競爭力，提高試管苗經(jīng)濟效益。1.提高勞動生產(chǎn)率2.減少設備投資，延長使用壽命3.降低消耗4.降低污染，提高繁殖率和成活率5.簡化培養(yǎng)基55第四章植物組織培養(yǎng)技術四、離體快繁商業(yè)性生產(chǎn)的范圍及應用1．用于稀缺或急需良種植物的繁殖2．用于莖尖脫毒及無病毒苗木試管快速繁殖3．用于自然界無法用種子繁殖或難以保持后代一致的三倍體、單倍體及基因工程植株的快速繁殖4．瀕臨植物的拯救5．用于種質(zhì)的試管保存及交換56第四章植物組織培養(yǎng)技術蘭科植物生產(chǎn)57第四章植物組織培養(yǎng)技術無菌苗快速繁殖58第四章植物組織培養(yǎng)技術無菌苗馴化59第四章植物組織培養(yǎng)技術60第四章植物組織培養(yǎng)技術五、商業(yè)化生產(chǎn)應注意的問題（一）污染

61第四章植物組織培養(yǎng)技術第四章植物組織培養(yǎng)技術1.污染概念：在組培過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。2.污染原因：細菌、真菌為病源菌；污染途徑有外植體帶菌，培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底，操作人員未遵守操作規(guī)程，環(huán)境不清潔。第四章植物組織培養(yǎng)技術（1）真菌污染的特點：污染部分長有不同顏色的霉菌，在接種后3～10天才能發(fā)現(xiàn)。（真菌菌落大，顏色多樣，表面呈毛絨狀，嗅之一般有霉味，真菌會產(chǎn)生菌絲）原因：周圍環(huán)境不清潔超凈工作臺的過濾裝置失效培養(yǎng)用器皿的口徑過大等為了減少損失，提高工作效率，必須在每個操作環(huán)節(jié)注意防止污染的發(fā)生。

3.污染特點第四章植物組織培養(yǎng)技術（2）細菌污染的特點：菌斑呈粘液狀物，而且在接種后1～2天即可發(fā)現(xiàn)。（細菌菌落小，表面呈乳脂狀光澤，嗅之一般有酸臭味，細菌污染沒有菌絲）原因：材料帶菌培養(yǎng)基滅菌不徹底操作人員未遵守操作規(guī)程因此接種人員的手應經(jīng)常用70%灑精擦凈，鑷子和接種針在使用前必須在火焰上燒紅。第四章植物組織培養(yǎng)技術4.預防措施（1）防止材料帶菌：避免陰雨天在室外采集外植體；材料預培養(yǎng)。（2）嚴格外植體滅菌（3）接種用具滅菌徹底（4）嚴守無菌操作規(guī)程（5）保持培養(yǎng)室清潔（6）做好超凈工作臺檢修、養(yǎng)護第四章植物組織培養(yǎng)技術防止材料帶菌的措施（1）用莖尖作外植體時，可在室內(nèi)或無菌條件下對枝條先進行預培養(yǎng)。

枝條→水洗凈→插入無糖的營養(yǎng)液或自來水抽枝，以這種新抽的嫩枝條作為外植體接種。這樣便可大大減少材料的污染。在無菌條件下對采自田間的枝條進行暗培養(yǎng)，待抽出徒長的黃化枝條時采枝，經(jīng)滅菌后接種也可明顯減少污染。第四章植物組織培養(yǎng)技術（2）多次滅菌法：如咖啡成熟葉片的滅菌即用這種方法。首先除去主脈（因主脈與支脈交界處常有真菌休眠孢子存在），同時去掉葉的頂端、基部和邊緣部分，這樣可大大減少污染；其次，將切好的外植體放入1.3%的次氯酸鹽溶液中（商品漂白粉25%的溶液），滅菌30min；第三，在無菌蒸餾水中沖洗3次；第四，將材料封閉在無菌的培養(yǎng)皿中過夜，保持一定溫度；第五，次日將葉片用2.6%次氯酸鈉滅菌30min，然后，用蒸餾水洗3次。對層積過的種子也可用多次滅菌法，在種子吸脹前后都要滅菌，在層積貯藏的第一周還應增加1次滅菌處理。第四章植物組織培養(yǎng)技術（3）多種藥液交替浸泡法對容易污染而難滅菌的材料：1.取莖尖、芽或器官外植體，用自來水及肥皂充分洗凈，表面不可附著污垢、灰塵，用剪刀修剪掉外植體上無用的部分，剝?nèi)パ可削[片；2.將材料放入70%—75%醫(yī)用灑精中滅菌數(shù)秒鐘；3.1：500RoccalB（一種商品滅菌劑名）稀釋液中浸5min4.放入5%—10%次氯酸鈉溶液中并滴入“吐溫80”數(shù)滴，滅菌15—30min，或浸入0.1%—0.2%升汞溶液中并加入“吐溫80”數(shù)滴，滅菌5—10min；5.用無菌水沖洗5次。也可以在從次氯酸鈉溶液中取出后，再放入無菌的0.1mol鹽酸（HCl）中浸片刻，再用無菌水沖洗數(shù)次。第四章植物組織培養(yǎng)技術5.組培苗污染的處理（1）發(fā)現(xiàn)污染的材料應及時處理，否則將導致培養(yǎng)室環(huán)境污染。（2）對一些特別寶貴的材料，可以取出再次進行更為嚴格的滅菌，然后接入新鮮的培養(yǎng)基中重新培養(yǎng)。（3）要處理的污染培養(yǎng)瓶最好在打開瓶蓋前，先集中進行高壓滅菌，再清除污染物，然后洗凈備用后的處理第四章植物組織培養(yǎng)技術（二）褐變1.褐變的概念是指外植體在培養(yǎng)過程，自身組織從表面向培養(yǎng)基釋放出褐色物質(zhì)，以致培養(yǎng)基逐漸變成褐色，外植體也隨之進一步變褐而死亡的現(xiàn)象。2.褐變原因

木質(zhì)素→→→→醌→積累造成毒害。多酚氧化酶[O]第四章植物組織培養(yǎng)技術3.影響褐變的因素（1）植物品種（基因型）木>草（2）生理狀態(tài)材料年齡：幼齡期＜成年型材料大小：小材料＜大材料組織：細嫩組織＜老熟組織

（3）培養(yǎng)基成分

無機鹽濃度過高、CTK水平過高外植體在最適宜的脫分化條件下，細胞大量增殖，抑制褐變。液體培養(yǎng)不容易褐變。PH高容易褐變。（4）培養(yǎng)條件

光照過強，溫度過高，培養(yǎng)時間過長，加速褐變。

（5）材料轉移時間長>短

第四章植物組織培養(yǎng)技術4.褐變的防止措施（1）選擇適宜的外植體（2）選擇合適的培養(yǎng)條件（3）外植體預處理（還原劑浸泡）（4）加快繼代轉接的速度（5）加抗氧化劑（VC、PVP、牛血清、牛蛋白）（6）0.1－0.5%活性炭第四章植物組織培養(yǎng)技術（三）玻璃化1.概念玻璃化是試管苗的一種生理失調(diào)癥，在植物材料進行離體培養(yǎng)時，有些培養(yǎng)物的嫩莖或葉片呈現(xiàn)半透明或水漬狀的現(xiàn)象。形態(tài)：植株矮小，節(jié)間短，葉水漬狀、半透明、脆易碎。第四章植物組織培養(yǎng)技術2.原因：（1）激素濃度（尤其CTK）增加或CTK╱IAA高（2）瓊脂濃度低（3）光照時間大于15h（4）溫度低，濕度大（5）通風條件不好（6）培養(yǎng)基離子種類及比例不適宜第四章植物組織培養(yǎng)技術3.預防措施：（1）適當控制培養(yǎng)基中無機鹽成分，適當提高蔗糖和瓊脂濃度，減少含氮化合物的用量，降低培養(yǎng)基的水勢。（2）適當降低CTK和GA的濃度?？紤]加入適當?shù)拿撀渌?。?）增加自然光照，控制光照時間；增加容器通氣，控制溫度。（4）加入其他物質(zhì)（如活性炭、多效唑、間苯三本分、根皮苷）。第四章植物組織培養(yǎng)技術（四）組培其它常見問題1.材料死亡2.黃化3.變異和畸形4.增殖率低下或過盛5.組培苗瘦弱或徒長6.不生根或生根率低7.過渡苗死亡率高第四章植物組織培養(yǎng)技術1.材料死亡原因與預防外植體滅菌過度滅菌濃度和時間適宜污染注意環(huán)境和個人衛(wèi)生，嚴格操作培養(yǎng)基不適宜或配制有問題選用合適培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境惡化改善培養(yǎng)環(huán)境，及時轉移和分瓶；加強組培苗的過渡管理第四章植物組織培養(yǎng)技術2.黃化（1）原因：培養(yǎng)基中Fe含量不足；礦物營養(yǎng)不均衡；培養(yǎng)環(huán)境通氣不良，瓶內(nèi)乙烯量高；激素配比不當；光照不足；糖用量不足，長期不轉移；培養(yǎng)溫