粉碎工藝與提取工藝對黑胡椒多糖抑菌活性的影響

粉碎工藝與提取工藝對黑胡椒多糖抑菌活性的影響

黑耳狼（l.exhook.）屬于擔(dān)子菌、木耳、耳科和耳科，也被稱為光耳、細(xì)耳和云耳。它是中國珍貴的醫(yī)療材料和食品菌。它的味道清新細(xì)膩，營養(yǎng)豐富。在過去的十年里，對黑耳狼的藥理學(xué)研究表明，黑耳狼具有廣泛的生理活性和藥用價值，尤其是關(guān)于黑耳內(nèi)多糖物質(zhì)的報道。由于現(xiàn)有研究報道大都是關(guān)于黑木耳多糖的分離提取、結(jié)構(gòu)鑒定以及多糖生理活性的研究,鮮見有關(guān)于原料粒度與提取工藝對黑木耳多糖抑菌活性的研究。由于超聲技術(shù)是利用超聲波(頻率>20kHz)具有的機械效應(yīng)、空化效應(yīng)及熱效應(yīng),通過增大介質(zhì)分子的運動速度,增大介質(zhì)的穿透力以提取有效成分的技術(shù)。具有提取過程不需要加熱,適用于熱敏物質(zhì),節(jié)省能源,提取過程為物理過程,不影響有效成分的生理活性,溶劑用量少,提取物有效成分含量高等優(yōu)點。近年來關(guān)于超聲技術(shù)提取植物多糖的研究報道較多。鑒于此,分別采用水提與超聲提取法對不同粒度黑木耳中的多糖類物質(zhì)進行提取,并對溶出的多糖類物質(zhì)的抑菌活性進行檢測,為今后合理的開發(fā)利用黑木耳資源,乃至工業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。1材料和方法1.1實驗材料1.1.1材料表面黑木耳,由浙江省富來森綠色產(chǎn)業(yè)集團公司提供。1.1.2病毒大腸桿菌、金黃色葡萄球菌。1.1.3培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂。1.1.4試劑苯酚、濃硫酸、95%酒精,均為分析純。1.2微生物VS-840K-U潔凈工作臺、ZHWY-2102C冷凍恒溫培養(yǎng)搖床、ES-315高壓蒸汽滅菌鍋、GZX-9240MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、PHX型智能生化培養(yǎng)箱、ZHWY-11030往復(fù)式水浴恒溫培養(yǎng)搖床、電爐、電子天平等。1.3實驗方法1.3.1超聲法提取多糖原料處理按不同粉碎粒度(40目、100目、150目、200目、300目)→干燥稱重→分別于超聲條件及水浴恒溫振蕩器中提取→過濾→離心→上清液→蒸發(fā)濃縮至原體積的1/4→醇析→冷凍離心→粗提物→洗滌干燥→多糖粗品。1.3.2不同濃度的黑木耳多糖液對不同多糖液的浸泡供試菌為大腸桿菌與金黃色葡萄球菌2種。將上述供試菌從斜面轉(zhuǎn)接到已滅菌的液體LB培養(yǎng)基中。在37℃,180r·min-1的條件下?lián)u床培養(yǎng)8h~10h。取直徑5mm的濾紙片浸泡在不同目數(shù)黑木耳提取的多糖液中,多糖液的初始濃度均調(diào)成0.05%,在此基礎(chǔ)上,依次稀釋比例為1∶1、1∶5、1∶10,濾紙片在不同多糖液中浸泡15min。將各種供試菌懸液取50μL注入含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的無菌平板中,用已滅菌的涂棒涂勻,然后用無菌鑷子夾取含多糖的濾紙片貼在含菌平板上,每皿4片,每菌重復(fù)2次,在細(xì)菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)8h到10h,測量濾紙片周圍抑菌圈直徑大小,比較抑菌效果。2結(jié)果與分析2.1原料粒度對多糖溶出量的影響實驗采用水提法與超聲提取法,對不同粒度黑木耳多糖提取效果見圖1。由實驗可知,對不同的原料粒度,超聲提取黑木耳多糖溶出量的效果均優(yōu)于水提,且隨著原料粒度的逐漸減小,多糖溶出量的趨勢逐漸增加。同時,原料粒度對多糖的溶出量影響亦較大,300目原料粒度水提時,多糖的溶出量是40目的4.38倍,300目原料粒度超聲提取時,多糖的溶出量是40目的4.95倍,說明超微粉碎協(xié)同超聲破碎技術(shù)可以有效地對黑木耳細(xì)胞壁破壁,提取多糖效果好,而且具有反應(yīng)條件溫和、細(xì)胞壁破碎徹底、粗多糖溶出率高的優(yōu)點。2.2黑加侖對抗菌效果2.2.1水提取物黑糖的抗菌效果水提時黑木耳多糖對大腸桿菌(E.coli)和金黃色葡萄球菌(S.aureus)的抑菌圈效果見表1及圖2、圖3。2.2.2原料粒度對銀耳多糖抑菌效果的影響超聲提取時黑木耳多糖對大腸桿菌(E.coli)和金黃色葡萄球菌(S.aureus)的抑菌圈效果見表2、圖4、圖5。由抑菌實驗可知,不同目數(shù)黑木耳水提法與超聲提取法獲得的APS均有一定的抑菌效果。采用水提工藝,150目黑木耳獲得的APS對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好,黑木耳粒度大于150目后,隨著粒度增加,APS對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果逐漸下降,說明原料粒度對黑木耳多糖的抑菌效果有一定影響。采用超聲波提取工藝,40目黑木耳獲得的APS對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果最好,隨著原料粒度增加,APS對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果均逐漸下降,且超聲處理時多糖的抑菌效果在各不同粒度時總體不如水提,說明超聲與粉碎協(xié)同處理對黑木耳多糖的抑菌效果影響較大。結(jié)合黑木耳多糖的溶出量實驗可知,超微粉碎協(xié)同超聲破碎技術(shù)雖然可以有效地對黑木耳細(xì)胞壁破壁,提取多糖效果好,但對多糖的抑菌效果卻產(chǎn)生一定影響,實際使用時應(yīng)綜合考慮各因素的影響。3原料粒度對黑木耳多糖溶出量的影響粉碎與超聲協(xié)同處理對黑木耳多糖的溶出量影響較大,對不同的原料粒度,超聲提取黑木耳多糖的溶出量的效果均優(yōu)于水提,且采用超聲提取與水提工藝時,均是原料粒度越小,多糖的溶出量越多。原料粒度與超聲處理對黑木耳多糖的抑菌