維生素C的定量測定

紫外分光光度計法測定果蔬中Vc的含量生物化學(xué)實驗1整理ppt本實驗要求：1.本實驗為設(shè)計性實驗，每人須撰寫好實驗設(shè)計，實驗設(shè)計包含“前言、實驗、結(jié)果與討論、結(jié)論〞四局部，其中前言和實驗需要在上實驗課前寫好，其余兩局部在實驗結(jié)束時撰寫，然后上交。2.實驗時，每個小組做一種果蔬的Vc含量測定3.實驗結(jié)束，每個小組提供一種果蔬的Vc含量數(shù)值供所有小組使用4.數(shù)據(jù)統(tǒng)計時，繪制表格或柱狀圖等請帶直尺和鉛筆5.參考資料：馬宏飛，盧生有，韓秋菊，李薇.“紫外分光光度法測定五種果蔬中維生素Ｃ的含量〞.化學(xué)與生物工程，2021,29〔8〕：92-94.6.本實驗成績?yōu)樯瘜嶒灴荚嚦煽儭?整理ppt1.學(xué)習(xí)定量測量維生素C的原理和方法2.學(xué)習(xí)設(shè)計實驗3.了解水果、蔬菜中維生素C的含量。一、實驗?zāi)康?整理ppt二、實驗原理維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏它時會產(chǎn)生壞血病，因此又稱其為抗壞血酸。它可分為復(fù)原型和脫氫型。復(fù)原型維生素C具有很強(qiáng)的性。金屬銅和酶〔抗壞血酸氧化酶〕可以催化維生素C氧化為脫氫型。根據(jù)它具有的復(fù)原性質(zhì)可測定其含量。維生素C的測定方法主要有紫外分光光度法、紅外光譜法、2,6——二氯靛酚滴定法、高效液相色譜法、鉬藍(lán)比色法、原子吸收法、碘量法、電位滴定法、熒光光度法、毛細(xì)管電泳法、流動注射化學(xué)發(fā)光法等。其中原子吸收法、高效液相色譜法和熒光光度法儀器相對昂貴；碘量法和電位滴定法操作步驟較繁瑣，而且受其它復(fù)原性物質(zhì)、樣品色素顏色和測定時間的影響；紫外分光光度法是根據(jù)維生素C對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩(wěn)定的特性，于243ｎｍ處測定樣品液與堿處理樣品液兩者吸光度之差，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計算樣品中維生素C的含量。

4整理ppt紫外分光光度計坐標(biāo)紙移液器離心機(jī)研缽三、實驗器材5整理ppt市售果蔬10-20g四、實驗材料6整理ppt1.10%HCl:10mL濃鹽酸溶解成100mL溶液。2.100ug/mL標(biāo)準(zhǔn)Vc溶液：準(zhǔn)確稱取0.05g抗壞血酸，加10ｍL10％HCl溶解，用蒸餾水定容至５00mL，混勻，即得100ug/mL維生素Ｃ標(biāo)準(zhǔn)溶液。3.1mol/LNaOH:40gNaOH溶解成1000mL溶液。五、實驗試劑7整理ppt1.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線〔有一組同學(xué)提前完成，其他小組不需要做〕按照下表操作，以A243為縱坐標(biāo)，以Vc濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)曲。六、實驗步驟012345678100μg/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液mL00.030.060.090.120.150.180.240.30蒸餾水mL32.972.942.912.882.852.822.762.70Vc濃度μg/mL0123456810A2438整理ppt〔1〕果蔬樣品的處理將蔬菜洗凈晾干，水果取果肉，分別稱取10.00ｇ于研缽中，各參加１0％HCl10mL，研磨勻漿，轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，混勻。移至離心管中3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min，取上清液即為待測果蔬提取液。2.樣品測定〔2〕待測果蔬提取液吸光度的測量取0.1mL待測果蔬提取液，放入盛有0.2mL10%HCl試管中，再加蒸餾水4.7mL，搖勻。以蒸餾水為空白，在243nm處測定其吸光度〔A1〕。9整理ppt

〔3〕堿處理果蔬提取液吸光度的測量依次吸取0.1mL待測果蔬提取液、1.0mL蒸餾水和0.4mL1mol/LNaOH放入試管中。搖勻；靜置20min后參加0.4mL１0％HCl，混勻，再參加3.1mL蒸餾水。以蒸餾水為空白，在243nm處測定其吸光度〔A2〕。〔4〕吸光度確定待測果蔬提取液與堿處理果蔬提取液的吸光度之差〔A1-A2〕即為果蔬樣品吸光度。10整理ppt3.計算測得果蔬樣品的吸光度后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可計算出果蔬中維生素Ｃ的含量［mg/〔100g〕］式中：ｃ為依標(biāo)準(zhǔn)曲線查到的Vc濃度,ug/mL；Ｖ１為測吸光度時吸取樣品溶液的體積，mL；Ｖ總為吸取樣品定容總體積，mL；Ｖ待測總為待測樣品總體積，mL；Ｗ總為果蔬質(zhì)量，ｇ；100為100ｇ果蔬。維生素Ｃ含量＝ｃ×Ｖ總

×Ｖ待測總

×100Ｖ１

×Ｗ總

×100011整理ppt七、分析與討論12整理ppt012345678100μg/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液mL00.030.060.090.120.150.180.240.30蒸餾水mL32.972.942.912.882.852.822.762.70Vc濃度μg/mL0123456810A24300.0480.1050.1590.2130.2700.3210.4440.540線性回歸方程:A=0.054825581c-0.004244186相關(guān)系數(shù)：R2=0.99970345513整理pptCORREL:array1和array2之間的相關(guān)系數(shù)INTERCEP