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文檔簡介
CCS
1634 DB34/T
梨黑斑病菌的
LAMP
Detection
Alternaria
species
involved
pear
black
spot
DB34/T
2022前 言本文件按照
GB/T
本文件主要起草人：楊雪、谷春艷、潘銳、翟承勛、徐會(huì)永、臧昊昱、戚仁德、高正輝、齊永杰、DB34/T
2022梨黑斑病菌的
檢測方法
范圍
LAMP
規(guī)范性引用文件
術(shù)語和定義
black
由鏈格孢類（Alternaria
）真菌引起的一種重要病害，已報(bào)道病原菌主要包括Alternariagaisen
K.
Nagan、A.
alternata
A.
tenuissima
A.
infectoriaA.
yaliinficiens
R.
A.
ventricosa
R.
Roberts。
方法原理
cytb
序列設(shè)計(jì)的特異性引物進(jìn)行
LAMP（Loop
amplification,
儀器設(shè)備
超低溫冰箱：-80℃
L，100
試劑和培養(yǎng)基DB34/T
2022
1000
mL），PDA
200
20
20
1000
mL）。
2％
CTAB
Tris-HCl
mmol/L
mmol/L
Tris-HCL
mmol/L
LAMP
Bst
DNA
SYBR
(Tris
4.84
g，Na2EDTA2
1.142
GB/T
6682
檢測方法將梨病果用
30
后，于病健交界處取少量組織置于
WA
培養(yǎng)基中
待長出菌絲后，切取一小塊放在
PDA
左右，收集菌絲于
CTAB
900
CTAB
提取液和
90
12000
rpm
rpm
去上清，沉淀用
次，37℃條件下待乙醇揮發(fā)干；加適量滅菌超純水或者
DNA
DNA
所用引物設(shè)計(jì)參見附錄A.1。
FIP：5
BIP：5
-3LAMP
20
F3
B3
DB34/T
2022
MgCl2
mM
10
結(jié)果判定LAMP
a)
黃綠色，表明含有梨黑斑病菌；如果擴(kuò)增產(chǎn)物為橙紅色，表明不含有梨黑斑病菌（參見附錄A.2）。b)
取擴(kuò)增產(chǎn)物在
明含有梨黑斑病菌；如果電泳圖譜無擴(kuò)增條帶，表明不含有梨黑斑病菌（參見附錄
A.3）。DB34/T
2022 A.1
引物設(shè)計(jì)示意圖見圖A.1
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