TNAIA 0263-2023 牛子宮內(nèi)膜炎診斷與防治技術(shù)規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0263-2023牛子宮內(nèi)膜炎診斷與防治技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandtreatmentofbovineendometritis2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0263-2023T/NAIA0263-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所、寧夏回族自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心、寧夏大學(xué)、寧夏回族自治區(qū)獸藥飼料監(jiān)察所、寧夏回族自治區(qū)畜牧工作站。本文件主要起草人：王建東、于有利、郭亞男、梁小軍、郭延生、岳康、康曉冬、侯鵬霞、高?；邸埦帽P、施安、張坤。牛子宮內(nèi)膜炎診斷與防治技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了牛子宮內(nèi)膜炎診斷與防治技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、診斷、預(yù)防和治療。本文件適用于牛場(chǎng)子宮內(nèi)膜炎的防治，其他牛場(chǎng)參照?qǐng)?zhí)行。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14926.42實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)標(biāo)本采集GB/T14926.43實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)染色法、培養(yǎng)基和試劑GB/T39759實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)語(yǔ)NY/T3234PCR檢測(cè)方法術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。牛子宮內(nèi)膜炎Bovineendometritis是指母牛分娩時(shí)或產(chǎn)后由于致病性病原微生物感染或胎衣不下、難產(chǎn)等產(chǎn)科疾病或環(huán)境因素、圍產(chǎn)期營(yíng)養(yǎng)調(diào)控水平等因素引起的子宮黏膜炎癥。診斷流行病學(xué)(陰道感染)和下行性感染(血源性或淋巴源性感染)爛 爛臨床癥狀黏液膿性子宮內(nèi)膜炎表現(xiàn)為病牛精神沉郁，體溫略有升高，食欲減退，陰道檢查時(shí)可見(jiàn)黏膜充血、病理變化有時(shí)可見(jiàn)子宮阜充血（見(jiàn)附錄C）。鏡下檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)初期黏膜毛細(xì)血管充血和滲出，黏膜淺層的子腺管上皮細(xì)胞，發(fā)生變性壞死脫落，可有紅細(xì)胞和纖維素滲出(假膜形成)（見(jiàn)附錄C）直腸檢查通過(guò)觸摸直腸，子宮角增大，子宮壁增厚，子宮呈面團(tuán)樣感覺(jué)，子宮收縮反應(yīng)減弱，子宮體有波動(dòng)感。慢性子宮內(nèi)膜炎的子宮壁增厚，彈性減弱，厚薄不均勻。陰道檢查道，至少停留30s以上，對(duì)側(cè)面、腹面和背面陰道壁至宮頸口進(jìn)行觸診，退出時(shí)對(duì)陰道內(nèi)的性狀和粘液量進(jìn)行檢查。B型超聲波診斷通過(guò)將探頭伸入直腸對(duì)子宮進(jìn)行超聲探查，對(duì)子宮內(nèi)膜厚度，子宮角直徑，卵巢等進(jìn)行觀察，判斷子宮內(nèi)是否有積液及積液量。子宮發(fā)生炎癥時(shí)，宮腔膨脹，輪廓不清并伴有部分回聲，存在片狀物。實(shí)驗(yàn)室診斷樣本采集0.1%1～2mL，立即注入備好的無(wú)菌瓶?jī)?nèi)，封蓋，標(biāo)記，冷藏保存。如果24h保存待用。樣品解凍時(shí)，置于38℃～40℃水浴解凍。分離培養(yǎng)綿羊血瓊脂培養(yǎng)基、MHA培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基和KF鏈球菌培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定（見(jiàn)附錄A）。5%37℃恒溫箱培養(yǎng)18h色、鏡檢，根據(jù)不同的培養(yǎng)特征、染色形態(tài)特征和其生化鑒定來(lái)綜合判定。PCR鑒別診斷16SrRNAB.1，PCR1465bp，見(jiàn)附錄B.2。4.5 結(jié)果判定符合流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化判斷為疑似病例。同時(shí)符合實(shí)驗(yàn)室診斷確診病例。預(yù)防和治療預(yù)防治療性清宮惡露的清洗，用0.1%的高錳酸鉀溶液；灌注抗生素，如鏈霉素、林可霉素等；注射縮宮素，通過(guò)促進(jìn)子宮的收縮，來(lái)促進(jìn)子宮惡露的排除。綜合預(yù)防爛 爛日常加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，遵守操作規(guī)程，定期消毒，定期監(jiān)測(cè)。避免從病發(fā)較高的地區(qū)引進(jìn)母牛，規(guī)范接產(chǎn)、做好產(chǎn)后保健、以及合理利用智能設(shè)備。治療西藥治療主要使用抗生素藥物，結(jié)合藥敏試驗(yàn)進(jìn)行治療，使用劑量參照說(shuō)明書。中藥治療可使用生化湯湯煎劑（組方：當(dāng)歸、川穹、自芍、炮姜、蒲公英、金銀花、連翹、甘草）等，療效較好。使用劑量參照說(shuō)明書。中西藥聯(lián)合用藥治療西藥選擇硫酸慶大霉素注射液，中藥選擇生化湯湯煎劑，使用劑量參照說(shuō)明書。其他療法子宮給藥治療，激素治療，微生物制劑治療等。附錄A（資料性）四種培養(yǎng)基的配制A.1伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基蛋白胨10.0g，乳糖10.0g，磷酸氫二鉀2.0g，瓊脂15.0g，伊紅0.4g，美藍(lán)0.065g，溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，傾入無(wú)菌平皿，4℃保存。A.2麥康凱培養(yǎng)基蛋白胨20.0g，牛膽鹽5.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂14.0g，乳糖10.0g，中性紅0.03g，加入蒸餾水或去離子水1L，將上述成分混合，加熱溶解，校正pH，加入瓊脂，煮沸溶化后再加人中性紅溶液，搖勻，115℃滅菌20min，待冷至50～55℃時(shí)傾注平皿。凝固后置4C冰箱保存，一周內(nèi)使用。A.3KF鏈球菌培養(yǎng)基蛋白胨10.0g，酵母粉10.0g，甘油磷酸鈉10.0g，氯化鈉5.0g，麥芽糖20.0g，乳糖1.0g，疊氮鈉0.4g，瓊脂13.0g，溴甲酚紫0.015g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121℃高壓15min，冷卻至50～60℃時(shí)，加入無(wú)菌1%TTC溶液10mL，混勻，傾入無(wú)菌平皿，備用。4MHA培養(yǎng)基牛肉粉6.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解酪蛋白17.5g，瓊脂17.0g，稱取本品加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，待冷至50℃，傾入無(wú)菌平皿，備用。爛 爛附錄B（資料性）PCR1取4.7.2培養(yǎng)物2mL，12000r/min10min，用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒對(duì)沉淀物進(jìn)行基的提取。以菌液DNA為模板，采用通用引物（16SrRNA），對(duì)細(xì)菌16SrRNA基因進(jìn)行PCR將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。引物序列如下：16SF5，-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3，16SR5，-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3，B.250μL反應(yīng)體系B.2.1：PCR反應(yīng)體系為50μL體系：模板2μL，27F、1492R各1μL（20μmol/L），2×TaqPCRMix25μL，ddH2O21μL；16SrRNAPCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min，94℃變性50s，57℃退火1min，72℃延伸90s，30個(gè)循環(huán)，72℃終延伸10