癲癇動物模型的制備

關于癲癇動物模型的制備概述

癲癇流行病學介紹1

癲癇模型制備原理2

不同的癲癇模型制備方法3

討論與展望4第2頁,共21頁，2024年2月25日，星期天1.癲癇流行病學介紹癲癇是一種腦部疾患，特點是存在能產(chǎn)生癲癇發(fā)作的腦部持久性改變，并出現(xiàn)相應神經(jīng)生物學、認知、心理學以及社會學等方面的后果。中國癲癇患病率約為7‰，每年新發(fā)病40萬例，患者總數(shù)超過900萬，其中超過一半是兒童及青少年。第3頁,共21頁，2024年2月25日，星期天2.癲癇模型制備原理利用藥物制備癲癇模型，通過破環(huán)腦部神經(jīng)遞質釋放的平衡，阻斷興奮性氨基酸的循環(huán)通路，從而誘發(fā)癲癇形成與發(fā)作。利用手術制備癲癇模型，主要用于模擬外傷后癲癇。具體的發(fā)病機制尚不十分明確，目前研究顯示與各神經(jīng)元細胞之間的突觸連接的改變有關。第4頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.不同的癲癇模型制備方法癲癇動物模型1.藥物建模通過藥物注射的方式建立癲癇動物模型。2.手術建模利用外科手術的方法建立癲癇動物模型第5頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.1藥物建模的幾種方法1注射合成紅藻氨酸制備大鼠癲癇模型2注射氯化鋰-匹羅卡品致大鼠癲癇模型3穿刺注射海人酸杏仁核點燃大鼠癲癇模型第6頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.1.1注射合成紅藻氨酸法紅藻氨酸(kainicacid,KA)是紅海藻的提取物，可作用于脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的谷氨酸受體,可直接興奮神經(jīng)元,又可增強鈉離子的通透性而使神經(jīng)細胞去極化,誘發(fā)癲癇的發(fā)生。利用KA的人工合成品,即合成紅藻氨酸(syntheticalkainicacid,SKA)制作大鼠癲癇模型。第7頁,共21頁，2024年2月25日，星期天正常Wistar大鼠腹腔注射10mg/kgSKA后約5min,大鼠出現(xiàn)凝視行為(Ⅰ級),之分別在約23min、97min、129min和140min動物順序出現(xiàn)Ⅱ-Ⅴ級癲癇發(fā)作。3h后癥狀減輕，7-8小時后停止，14小時基本恢復正常。制備過程第8頁,共21頁，2024年2月25日，星期天方法特點

注射合成紅藻氨酸誘發(fā)大鼠癲癇，SKA5-12mg/kg腹腔注射可誘發(fā)大鼠癲癇發(fā)作,以10mg/kg劑量為佳。合成紅藻氨酸誘發(fā)大鼠癲癇發(fā)作的階段性明顯、行為學表現(xiàn)規(guī)律、穩(wěn)定,死亡率低，適宜大規(guī)模建立癲癇動物模型。第9頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.1.2注射氯化鋰-匹羅卡品法注射氯化鋰（Licl）和匹羅卡品(pilocarpine,PI-LO)致癲癇模型在動物行為、腦電圖、病理及藥理特性上與人類顳葉癲非常類似。近年來一直被認為是研究顳葉癲癇的理想模型。第10頁,共21頁，2024年2月25日，星期天制備過程

正常Wistar大鼠經(jīng)過腹腔注射LiCl125mg/kg,18-24h后腹腔注射PILO20mg/kg達到Ⅲ-Ⅴ級發(fā)作則為進入癲持續(xù)狀態(tài)(statusepilepticus,SE),致成功。

若無發(fā)作或發(fā)作未達到Ⅲ-Ⅴ級,則每隔30min腹腔注射PILO10mg/（kg·次),最多6次,其間癲癇發(fā)作>Ⅲ級的大鼠認為致成功。

第11頁,共21頁，2024年2月25日，星期天方法特點

PILO首次劑量為20mg/kg,以后小劑量給予PILO(10mg/kg),簡單易用，可按個體差異控制PILO的用量，成功率較高。此方法的致癲癇率和自發(fā)發(fā)作的出現(xiàn)率基本一致,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。是研究顳葉癲癇的理想模型。第12頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.1.3穿刺注射海人酸法

點燃模型(Kindlingmodel)是通過重復給予一個首發(fā)閾下電或化學刺激引起部分或全面性癲癇發(fā)作的癲癇模型,具備慢性、自發(fā)性和復發(fā)性特征。海人酸(kainicacid,KA)具有很強的神經(jīng)毒性作用,海馬富含KA受體,KA腦內(nèi)注射能使動物產(chǎn)生長時間肢體型癲癇發(fā)作。第13頁,共21頁，2024年2月25日，星期天制備過程Wistar大鼠麻醉后30min用5μL微量注射器吸KA1μL,顱骨穿刺以右側杏仁基底核為KA注射部位，速度為1μL/min,留針5min，以確保藥物被完全吸收。實驗大鼠在KA杏仁核注射后平均41和61min分別依次出現(xiàn)部分性發(fā)作和癲癇性大發(fā)作第14頁,共21頁，2024年2月25日，星期天方法特點

用KA杏仁核微量注射,為全身給藥點燃用量的萬分之一,點燃成功率高達90%。點燃一旦建立,動物的這種腦細胞及驚厥行為敏感性可長期維持,是研究腦細胞興奮性、可塑性以及學習和記憶、癲癇發(fā)病機制、癲癇外科手術預后判斷的理想動物模型。第15頁,共21頁，2024年2月25日，星期天3.2機械損傷制備大鼠癲癇模型

顱腦外傷是癲癇的常見病因之一。外傷后癲癇(PTE)的發(fā)病機制目前尚未闡明。現(xiàn)有研究表面，突觸重建在PTE的發(fā)病發(fā)展過程中起著重要作用。突觸素(synaptophysin.p38)和苔蘚纖維(mossyfiber，MF)與突觸重建關系密切，是突觸功能和突觸重建的重要標志之一。第16頁,共21頁，2024年2月25日，星期天制備過程

正常Wistar大鼠用2％戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔麻醉后，矢狀位切開頭部皮膚，剝離顱骨外膜，左側頂距矢狀縫旁3.5mm，冠狀縫后4.0mm處鉆一直徑3.0mm的骨窗，保持硬腦膜完整。此時接液壓打擊裝置，壓強152-202kPa，時程40-50ms。打擊后，縫合頭皮，清醒后自由進食、水。第17頁,共21頁，2024年2月25日，星期天液壓打擊手術部位圖示第18頁,共21頁，2024年2月25日，星期天方法特點手術后連續(xù)觀察實驗動物行為三個月，根據(jù)不同等級的癲癇發(fā)作，可研究外傷后癲癇的發(fā)病機制。

液壓腦損傷制備的動物模型，較好的模擬了人類PTE的顯著特征—晚期、慢性、反復、自發(fā)性發(fā)作。

是研究外傷后癲癇理想的動物模型。第19頁,共21頁，2024年2月25日，星期天4.討論與展望

導致癲癇發(fā)病的因素非常復雜,癲癇的發(fā)病類型多,目前還沒有一種動物模型能夠模擬出所有的癲癇發(fā)作類型。以上介紹的幾種癲癇動物模型，都有其獨特之處。不同方法制備的癲癇動物模型，將會為癲癇發(fā)病機制和治療的研究做出貢獻。第20頁,共21頁，2024年2月25日，