動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段

關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞核移植、動(dòng)物細(xì)胞融合、單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。提問(wèn)：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交第2頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。1、選材：

動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官，它們細(xì)胞增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。第3頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天在進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，用胰蛋白酶分散細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒(méi)有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2.分散成單個(gè)細(xì)胞第4頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特性：細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。要求：

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無(wú)毒、易于貼附。細(xì)胞的接觸抑制：當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。

第5頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.過(guò)程：第6頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無(wú)限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系5.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細(xì)胞株和細(xì)胞系？多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長(zhǎng)和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變第7頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞增值無(wú)限傳代去掉組織間蛋白動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體第8頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細(xì)胞順利的生長(zhǎng)增殖第9頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點(diǎn)是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動(dòng)物血清（一）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞大都生活在液體的環(huán)境第10頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天細(xì)胞的全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第11頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)第12頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù):將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植（難度高）受體細(xì)胞：MⅡ期的卵母細(xì)胞第13頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞第14頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天克隆動(dòng)物的研究意義1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動(dòng)物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護(hù)瀕危動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題：許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過(guò)大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。第15頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變的細(xì)胞是--------------------（）

A．細(xì)胞系B．細(xì)胞株

C．原代細(xì)胞D．傳代細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是------（）

A.動(dòng)物細(xì)胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

AD第16頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天3、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異

B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強(qiáng)D第17頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行；

C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能；

D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。A第18頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天植物體細(xì)胞雜交的意義：打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種第19頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）動(dòng)物細(xì)胞融合1.過(guò)程：誘導(dǎo)方式物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒仙臺(tái)病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）第20頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）動(dòng)物細(xì)胞融合1.過(guò)程：滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）第21頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體1.其由何種細(xì)胞產(chǎn)生？2.主要分布在哪里？3.如何得到抗體？提問(wèn)？第22頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體抗體1。抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞不能增值產(chǎn)生大量抗體2。特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏第23頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體設(shè)計(jì)方案：一個(gè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖-化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。雜種細(xì)胞第24頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天？

？誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？抗原效應(yīng)B細(xì)胞(三）單克隆抗體2.制備過(guò)程：第25頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天BBBB瘤瘤瘤瘤細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞篩選雜種細(xì)胞已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增值，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細(xì)胞。第26頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動(dòng)、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較第27頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天除通過(guò)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生單克隆抗體外，還有什么方法？第28頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.單克隆抗體的應(yīng)用：①在基礎(chǔ)理論研究中具有重要意義②在疾病診斷、治療和預(yù)防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導(dǎo)彈(三）單克隆抗體第29頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天總結(jié)一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一種新細(xì)胞滅活病毒雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)第30頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天多莉與“母親”第31頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過(guò)程融合后的卵細(xì)胞第32頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天克隆動(dòng)物的研究意義1.用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2.改良動(dòng)物品種3.治療人類疾病4..保護(hù)瀕危動(dòng)物第33頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天6.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請(qǐng)仔細(xì)看圖后回答問(wèn)題：黑面綿羊去核卵細(xì)胞白面綿羊卵腺細(xì)胞核重組細(xì)胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫(xiě)出ａ、ｂ所指的細(xì)胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實(shí)施細(xì)胞工程ａ時(shí)，所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據(jù)：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動(dòng)物細(xì)胞也具有

。⑸請(qǐng)舉例說(shuō)明克隆綿羊培育成功的實(shí)際意義：。第34頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天動(dòng)物的胚胎移植解決某些妊娠時(shí)間長(zhǎng)、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問(wèn)題。第35頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細(xì)胞融合的是（）A.經(jīng)過(guò)免疫的B淋巴細(xì)胞B.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過(guò)免疫的T淋巴細(xì)胞D.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞A鞏固練習(xí)第36頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天2..動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠(yuǎn)緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞3.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）誘導(dǎo)融合的方法完全相同B.所用的技術(shù)手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細(xì)胞AD第37頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.單克隆抗體制備過(guò)程中培育的雜交細(xì)胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合B.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成C.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D.由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成D第38頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天再見(jiàn)第39頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）動(dòng)物細(xì)胞融合1.過(guò)程：第40頁(yè),共45頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測(cè)有毒物質(zhì)（2）