化學(xué)發(fā)光免疫分析

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

與臨床應(yīng)用5/8/20241化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)起源Halman在1977年基于放射免疫分析的基本原理，將酶的化學(xué)發(fā)光與免疫反應(yīng)結(jié)合起來(lái)，建立了化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。(Chemiluminescenceimmunoas)5/8/20242化學(xué)發(fā)光免疫分析臨床核醫(yī)學(xué)診斷核醫(yī)學(xué)（影像診斷）治療核醫(yī)學(xué)體外分析技術(shù)（放射免疫分析）（化學(xué)發(fā)光免疫分析）5/8/20243化學(xué)發(fā)光免疫分析什么是化學(xué)發(fā)光？人體內(nèi)的某些化合物分子被氧化后，可以形成激發(fā)態(tài)并返回基態(tài)同時(shí)發(fā)射光子，這就是化學(xué)發(fā)光。化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)是利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x器測(cè)量光量子的產(chǎn)額。該技術(shù)可以有效的消除樣本的本底干擾，消除樣本對(duì)光信號(hào)的散射，從而獲得更高的檢測(cè)靈敏度。

5/8/20244化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析原理：化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)免疫反應(yīng)系統(tǒng)5/8/20245化學(xué)發(fā)光免疫分析免疫反應(yīng)系統(tǒng)：將發(fā)光物質(zhì)（在反應(yīng)劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體）直接標(biāo)記在抗原（化學(xué)發(fā)光免疫分析）或標(biāo)記抗體（免疫化學(xué)發(fā)光分析）上，或用酶作用于發(fā)光底物。5/8/20246化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)：利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子（hv)，利用發(fā)光信號(hào)測(cè)量?jī)x測(cè)量光量子的產(chǎn)額，就可測(cè)知體內(nèi)某些微量生物活性物質(zhì)的含量。5/8/20247化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析類(lèi)型：根據(jù)標(biāo)記物的不同分為三大類(lèi)：1、化學(xué)發(fā)光免疫分析2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/20248化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)：優(yōu)點(diǎn)：安全，靈敏度高（10-15g/ml），穩(wěn)定性好，重復(fù)性較佳，結(jié)果漂移小，線(xiàn)性較好，準(zhǔn)確度高，操作方便，試劑貨架期長(zhǎng)（半年~1年），浪費(fèi)少，出結(jié)果快速。缺點(diǎn)：儀器價(jià)格昂貴，試劑成本較高，目前有些檢測(cè)項(xiàng)目不能用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，待開(kāi)發(fā)。5/8/20249化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光技術(shù)與其他免疫分析技術(shù)比較：

免疫診斷技術(shù)在經(jīng)歷了放射免疫法、酶標(biāo)免疫法、免疫熒光法等方法后，發(fā)展到今天，化學(xué)發(fā)光技術(shù)的出現(xiàn)并臨床應(yīng)用，為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)免疫診斷技術(shù)的發(fā)展奠定了一個(gè)劃時(shí)代的里程碑。

5/8/202410化學(xué)發(fā)光免疫分析.1、放射免疫法：1、放射免疫法缺陷：同位素半衰期短（125I半衰期60天）及需要特殊水源處理裝置，污染問(wèn)題、試劑有效期短、出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)（一般要2天）、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)穩(wěn)定性差，但在有些發(fā)達(dá)國(guó)家仍在使用，完全能滿(mǎn)足臨床需要。5/8/202411化學(xué)發(fā)光免疫分析2、酶標(biāo)記免疫分析缺陷：

由來(lái)已久，但是始終沒(méi)有能夠替代放射免疫。這種依靠比色法或偏振光法的檢測(cè)技術(shù)所受的干擾因素太多，甚至試管的形狀的變化都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，靈敏性、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較差（可測(cè)靈敏度為10-8g/ml）。5/8/202412化學(xué)發(fā)光免疫分析3、熒光免疫分析技術(shù)缺陷：利用特定波長(zhǎng)的入射光將分子轉(zhuǎn)換到激發(fā)態(tài)，然后分子回到基態(tài)并發(fā)射光子。但有以下干擾因素：

1）血清樣本中存在內(nèi)源性熒光帶，會(huì)增強(qiáng)非特異性本底熒光；

2）樣本對(duì)熒光光信號(hào)的散射也干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。5/8/202413化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)臨床應(yīng)用：1、甲狀腺功能類(lèi)：T3、T4、THS、FT3、FT4、rT3、TG、T-PO新生兒篩查：T4sTSH

2、性腺激素類(lèi)：HCG、?-HCG、FSH、LH、E2、E3、PRL、P、T、GH等3、腫瘤檢測(cè)：

CEA、AFP、Fe、PSA、CA125、CA153、CA199CA50、CA211、CA7245/8/202414化學(xué)發(fā)光免疫分析4、心血管：CK-MB、BNP、Tn-I、Myoglobin5、貧血類(lèi)：鐵蛋白、ViteB12、葉酸6、藥物濃度：地高辛、洋地黃、托普霉素可馬西平、苯巴比妥、等7、糖尿病及代謝：胰島素、C-肽、PTH8、過(guò)敏源類(lèi)：過(guò)敏源篩選、總過(guò)敏源9、傳染病：肝炎系列、風(fēng)疹、弓形體10、其他：皮質(zhì)醇、還有很多待開(kāi)發(fā)項(xiàng)目。5/8/202415化學(xué)發(fā)光免疫分析心血管系統(tǒng):如何能更快更準(zhǔn)確更全面的診斷AMI5/8/202416化學(xué)發(fā)光免疫分析時(shí)心電圖并不能典型歸類(lèi)診斷急性心肌梗塞有一定難度一半有不穩(wěn)定胸口窒息痛的病人，入院時(shí)心電圖并不典型。病人再發(fā)梗塞診斷困難導(dǎo)致不能及時(shí)診斷AMI延誤及時(shí)治療、護(hù)理臨床需要盡早準(zhǔn)確診斷AMI方法5/8/202417化學(xué)發(fā)光免疫分析肌肉組織心肌心肌細(xì)胞特異性標(biāo)志肌鈣蛋白ICT肌鈣蛋白I釋放入血心肌壞死（氨基酸順序40％差異）5/8/202418化學(xué)發(fā)光免疫分析心肌細(xì)胞肌紅蛋白肌酸激酶MB心肌壞死釋放入血（含量大）血液濃度明顯升高(CK-MB)5/8/202419化學(xué)發(fā)光免疫分析65432104812162024487296h肌紅蛋白CK-MB肌鈣蛋白

濃度急性心肌梗塞后各項(xiàng)指標(biāo)變化5/8/202420化學(xué)發(fā)光免疫分析肌紅蛋白升高高峰回落肌酸激酶MB肌鈣蛋白I1-2h4-8h6-8h5-12h10-24h12-24h18-30h48-72h5-7d5/8/202421化學(xué)發(fā)光免疫分析肌紅蛋白的臨床意義早期診斷特異性低靈敏度高急性心梗后最早(1-2h)出現(xiàn)的標(biāo)記最早能排除非急性心梗陰性預(yù)測(cè)率為99%體內(nèi)周期短，對(duì)再發(fā)梗塞特別靈敏肌紅蛋白測(cè)定能有效分辨非急性心梗，使急性心梗病人能盡早得到治療.有效觀(guān)察溶栓療效5/8/202422化學(xué)發(fā)光免疫分析肌鈣蛋白I的臨床意義診斷急性心肌梗塞特異性>98%特異性強(qiáng)、確診率高靈敏度低急性心梗發(fā)病后6h才出現(xiàn)，應(yīng)與肌紅蛋白一同使用肌鈣蛋白I升高即可確診為急性心肌梗塞，及時(shí)得到治療體內(nèi)周期長(zhǎng)，對(duì)外地病人延誤求診亦能診斷對(duì)極輕微的心肌創(chuàng)傷都能檢出5/8/202423化學(xué)發(fā)光免疫分析胸痛ECG發(fā)病肌鈣蛋白I肌紅蛋白CK-MB急性心梗+–++<8h>8h隨訪(fǎng)+再發(fā)心梗5/8/202424化學(xué)發(fā)光免疫分析肌紅蛋白注意事項(xiàng)肌酸激酶MB骨骼肌損傷

肌紅蛋白升高腎功能衰竭

CK-MB

增高5/8/202425化學(xué)發(fā)光免疫分析甲狀腺功能系列診斷：

T3T4TSHTSH-3

FrT3FrT4

TupT-poAb5/8/202426化學(xué)發(fā)光免疫分析

診斷各種甲亢必須具備的儀器設(shè)備:

1、甲狀腺131-I攝取率測(cè)定儀2、各種放射免疫測(cè)定儀或各種全自動(dòng)發(fā)光免疫測(cè)定儀3、甲狀腺功能顯像設(shè)備：（SPECT、γ照相儀）5/8/202427化學(xué)發(fā)光免疫分析甲亢正確診斷（特別是首診）1、臨床癥狀、體征。2、實(shí)驗(yàn)室檢查：T3、T4、FT3、FT4、sTSH或uTSH、TMAb、TGAb、TPOAb、TRAb……3、131-I攝取試驗(yàn)是必查項(xiàng)目

只靠臨床癥狀、體征及實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)法鑒別：碘甲亢、亞甲炎甲亢、亞急性淋巴細(xì)胞性甲炎甲亢、慢甲炎甲亢和醫(yī)源性甲亢。治療和處理是完全不同的。5/8/202428化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202429化學(xué)發(fā)光免疫分析目前臨床上靠一張甲狀腺功能檢查單（T3、FT3、T4、FT4增高和sTSH降低）診斷甲亢是不正確的，化驗(yàn)單只證明患者血中甲狀腺激素增多（甲狀腺毒癥），而碘甲亢、亞甲炎甲亢、亞急性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎甲亢、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、醫(yī)源性甲亢等靠臨床癥狀、體征及化驗(yàn)檢查是無(wú)法區(qū)分的，因此，首診病人必須做131-I攝取試驗(yàn)才不會(huì)造成誤診。5/8/202430化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202431化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202432化學(xué)發(fā)光免疫分析甲狀腺炎掃描圖5/8/202433化學(xué)發(fā)光免疫分析正常甲狀腺掃描圖治療1個(gè)半月后5/8/202434化學(xué)發(fā)光免疫分析治療后檢測(cè)結(jié)果顯示各項(xiàng)指標(biāo)正常5/8/202435化學(xué)發(fā)光免疫分析治療后恢復(fù)正常5/8/202436化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202437化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202438化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202439化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202440化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202441化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202442化學(xué)發(fā)光免疫分析臨床常見(jiàn)的甲狀腺疾病種類(lèi)：1、甲亢：大概分為13種，三大類(lèi)。2、甲減：分為原發(fā)性、繼發(fā)性。3、甲狀腺炎：分5種。4、甲狀腺腫瘤：良性、惡性。5、甲狀腺腫：青春期、結(jié)節(jié)性甲腫。6、TH不敏感綜合征：三大類(lèi)。5/8/202443化學(xué)發(fā)光免疫分析甲狀腺激素不敏感綜合癥：一、全身型：1、甲減型T3、T4、TSH2、代償型T3、T4、TSH二、垂體型：甲亢癥狀明顯：T3、T4、TSH三、外周選擇型：T3、T4、TSH（正常）臨床甲減癥狀5/8/202444化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202445化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202446化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202447化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202448化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202449化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202450化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202451化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202452化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202453化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202454化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202455化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202456化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202457化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202458化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202459化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202460化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202461化學(xué)發(fā)光免疫分析5/8/202462化學(xué)發(fā)光免疫分析總之，化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)（ChemiluminesentImmunoassay,CLIA）是繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）和時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興高度敏感的微量測(cè)定技術(shù)。

5/8/202463化學(xué)發(fā)光免疫分析其具備以下特點(diǎn)：

①高度敏感，極限達(dá)10-17g/mL，遠(yuǎn)高于RIA、EIA、FIA。②特異性強(qiáng)，重復(fù)性好C.V.＜5％。③測(cè)定范圍寬，可達(dá)7個(gè)數(shù)量級(jí)。